胃蛋白酶10篇

胃蛋白酶篇1

据报道，测定血清胃蛋白酶原进行胃癌早期诊断的普查以及胃癌的预防干预计划，已在日本、芬兰、挪威等国家实行。日本利用胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ在大面积的人群中进行普查，使胃癌的早诊率提高到了90％。

以往的研究表明，血清胃蛋白酶原水平可反映不同部位胃黏膜的形态和功能，联合测定胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ比值(PGR)被视为胃黏膜的“血清学活检”。

在正常人血清中的胃蛋白酶原Ⅰ浓度是胃蛋白酶原Ⅱ的6倍。胃蛋白酶原Ⅰ正常参考值范围为67～200 微克/升。

胃蛋白酶原Ⅰ

胃蛋白酶原Ⅰ>200微克/升：提示可能与饮食、药物的刺激或幽门螺旋杆菌感染以及胃溃疡、十二指肠溃疡有关。

胃蛋白酶原Ⅱ正常参考值范围

胃蛋白酶原Ⅱ>15微克/升：提示可能与幽门螺旋杆菌感染、胃溃疡、十二指肠溃疡以及胃窦部的疾病有关；

胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ比值（PGR）正常参考值范围为>7.5。

PGR

众多流行病学证据表明，胃癌患者胃蛋白酶原Ⅰ较健康者明显下降，胃蛋白酶原Ⅱ因为分布较广、变化不大。而胃癌患者PGR明显降低，是胃癌的高危信号。可见，血清胃蛋白酶原的测定是普查中筛选胃癌的良好指标。

临床上，若血清胃蛋白酶原呈现“阳性”结果，需再进一步进行多种肿瘤标志物的联合检测。这样常可在临床症状出现之前数月鉴别出复发和转移。胃蛋白酶原阳性者应每年检查一次胃镜，并进行密切随访，以早期发现变化，早期在内镜下进行***，以达到根治的目的。

胃蛋白酶篇2

【关键词】 胃蛋白酶原； 肿瘤标志物； 胃癌； 胰蛋白酶原-2

胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤，死亡率位居恶性肿瘤的第二位［1］。目前胃癌诊断主要依靠胃镜及病理检查，早期血清学筛查尚缺乏便捷准确的方法。实验室检查虽然有大便隐血及肿瘤标志物的检测，但阳性率准确性较低。本文采用TRFIA法对正常对照组、胃溃疡组及胃癌患者的血清进行了PG、TAT-2、CEA、CA50、CA19-9及CA242的检测，探讨了单项检测、2项联合检测及6项联合检测在胃癌筛查中的价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取在笔者所在医院经胃镜及病理检查确诊的胃癌患者65例，胃溃疡患者86例，健康体检者98例。

1.2 实验方法 受试者采集空腹静脉血3 ml，分离血清后，-20 ℃保存。检测前1 h血清复融，并离心取上清液检测。PGⅠ、PGⅡ试剂盒由无锡市江原实业技贸总公司提供，TAT-2、CEA、CA50、CA19-9、CA242试剂盒由江苏原子医学研究所提供。所有操作严格按说明书进行。临界值设定：PGⅠ≤50 μg/L，PGⅠ/PGⅡ（PGR）≤3为阳性，TAT-2≥50 μg/L为阳性，CEA＞20 μg/L为阳性，CA50＞1.5×104 U/L为阳性，CA19-9＞3.5×104 U/L为阳性，CA242＞2.0×104 U/L为阳性。

1.3 统计学处理 应用SPSS 11.0统计分析软件处理，阳性率的比较采用χ2检验。检验水准α=0.05。

2 结果

胃癌组各单项检测、2项联合检测及6项联合检测的阳性率与胃溃疡组和正常对照组比较，差异均具有统计学意义（P

3 讨论

PG是胃蛋白酶的前体，可分为PGⅠ、PGⅡ两个亚型,其血液中含量的变化可反映胃黏膜的分泌水平［2］。本研究结果显示，胃癌患者PGⅠ、PGR显著降低，而由于分泌PGⅡ的细胞分布相对较广，故PGⅡ无明显变化。本项检测胃癌组的阳性率为58.5%,与胃溃疡组和正常对照组比较，差异具有统计学意义（P

TAT-2是一种丝氨酸蛋白酶，又称肿瘤相关胰蛋白酶原-2，其在卵巢、消化道均有高表达［5］。本研究显示，胃癌患者TAT-2明显升高，阳性率为53.9%,与胃溃疡组和正常对照组比较，差异具有统计学意义（P

CEA是一种分子量较大的多糖蛋白复合物，极少进入血液循环，但肿瘤细胞可分泌致血清中升高。当血清中超过20 μg/L时提示有消化道肿瘤［4］。本研究显示，胃癌患者CEA阳性率为35.4%,与胃溃疡组和正常对照组比较，差异具有统计学意义（P

CA50、CA19-9、CA242是一组比较广谱的肿瘤相关抗原，常用于消化道肿瘤的诊断［4,6］。本研究显示，胃癌患者这三种肿瘤标志物的阳性率分别为36.9%、41.5%、49.2%,与胃溃疡组和正常对照组比较，差异均具有统计学意义（P

以上各单项检测，胃癌患者的阳性率与胃溃疡组和正常对照组比较，虽然具有显著性，但阳性率均较低；阳性率相对较高的PG、TAT-2两相检测，也仅为58.5%和53.9%，而联合检测却可以显著提高胃癌检出率。本研究显示，胃癌患者2项联合检测及6项联合检测的阳性率分别达到73.9%、89.2%,与单项检测比较，差异具有统计学意义（P

尽管以上检测方法不能用于胃癌的确诊，但却可以用于大面积人群的筛查，对发现的阳性病例，再进行胃镜及病理检查，即可达到早发现、早***、提高患者生存时间的目的。

参 考 文 献

［1］ 顾光大.血清胃蛋白酶原、胸苷激酶联合检测对胃癌的诊断意义［J］.实用医学杂志，2009，25（5）：715-717.

［2］ 马颖杰，王惠吉，鲍晓厉.血清胃蛋白酶原与胃溃疡及胃癌［J］.中国医刊，2008，43（12）：46-48.

［3］ 袁荣华，孙永强，翟晓峰，等.胃癌手术***前后血清胃蛋白酶原含量分析［J］.交通医学，2009，23（2）：139-140.

［4］ 蒋志***，刘冰梅.血清CEA，CA19-9，CA242及胃蛋白酶原亚群联合检测对胃癌的诊段价值［J］.云南医药，2009，30（6）：639-640.

［5］ 张艺，张珏，马智鸿，等.胃蛋白酶原与胰蛋白酶原-2联合检测筛查胃癌的意义［J］.中国临床医学，2009，16（4）：548-550.

胃蛋白酶篇3

【关键词】 胃肿瘤;乙酰肝素酶;基质金属蛋白酶9;免***组织化学

[ABSTRACT] Objective:To investigate the clinicopathological significance of the expression of heparanase (Hpa) and MMP9， and its relationship to progressing in gastric carcinoma. Methods： The expression of Hpa and MMP9 were detected by immunohistochemistry SABC in 65 gastric carcinoma cases and 20 adjacent nonneoplastic tissues. The positive ratios of Hpa and MMP9 were compared in gastric carcinoma tissues and adjacent nonneoplastic tissues as well as perse deep infiltration tissues with or without lymph node metastasis. The correlation analysis of Hpa and MMP9 expression in gastric carcinoma tissue was assessed. Results：The positive ratios of Hpa and MMP9 were significant higher in gastric carcinoma tissue than that in adjacent nonneoplastic tissue(P

[KEY WORDS] Gastric carcinoma; Heparanase; Matrix metalloproteinase 9; Immunohistochemistry

肿瘤细胞的侵袭和转移是一个复杂的多步骤过程。乙酰肝素酶(Hpa)是目前已确定的唯一能够降解硫酸乙酰肝素蛋白多糖基因(HSPG)的蛋白酶， 通过特异性降解HSPG发挥其促进肿瘤细胞侵袭和转移的作用;基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases9，MMP9)是一种锌离子依赖性内肽酶，主要降解细胞外基质和基底膜中的胶原蛋白，在破坏细胞外基质和基底膜的屏障作用、促进肿瘤细胞侵袭和转移的过程中同样具有作用。Hpa mRNA的检测在多种肿瘤中已有研究报道，但目前联合检测Hpa和MMP9在胃癌中的表达少有报道，本实验对65例胃癌切除标本Hpa和MMP9的表达进行了检测，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取河源市人民医院2003～2005年胃癌手术切除标本65例，男性47例，女性18例，年龄35～78岁，中位年龄60岁，其中有淋巴结转移者40例。所有病例术后均经病理证实。另取癌旁非瘤组织20例作为对照，癌旁组织距离肿瘤边缘不小于5 cm。

1.2 Hpa、MMP9的检测

采用免***组化SABC法进行检测。Hpa抗体、即用型SABC免***组化染色试剂盒及DAB显色试剂盒购于武汉博士得生物工程有限公司;兔抗人MMP9多克隆抗体为北京中山生物技术有限公司产品，均在4℃冰箱保存。用已知的阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定标准

1.3.1 Hpa Hpa以细胞膜和/或细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性判断标准，以染色强度和阳性细胞比例评定阳性表达。参照Friedmann等[1]的方法，每张切片随机观察5个视野，每个视野观察100个肿瘤细胞，计数500个肿瘤细胞中阳性染色的细胞数，阳性细胞记数仅限于肿瘤细胞染色。染色强度分级如下：无着色为0，淡黄色为1，黄色及更深颜色为2;阳性细胞数分级为:阳性细胞数小于50%为0， 50%～75%为1，>75%为2。染色强度分级与阳性细胞数分级两项得分相乘结果≥2为阳性表达。

1.3.2 MMP9 MMP9以细胞浆和/或细胞膜内出现棕黄色颗粒为阳性判断标准，参照Liaball等[2]的方法，每张切片随机观察5个视野，每个视野观察100个肿瘤细胞，计数500个肿瘤细胞中阳性染色的细胞数，阳性细胞计数仅限于肿瘤细胞染色，10%及以上细胞阳性染色的切片为阳性，10%以下阳性染色的切片为阴性。

1.4 统计学处理

应用SPSS10.0统计软件，行χ2检验或精确概率法及Spearman相关性检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 Hpa的表达

Hpa蛋白阳性表达主要位于细胞浆和/或细胞膜，肿瘤间质中的血管内皮细胞、巨噬细胞和淋巴细胞也偶有阳性表达，胃癌中Hpa的阳性表达率为60%(39/65);在癌旁非瘤组织中，血管内皮细胞、巨噬细胞和淋巴细胞偶有阳性表达， Hpa的阳性表达率为15%(3/20)，胃癌中的表达明显高于癌旁非瘤组织，差异具有统计学意义(χ2=12.390，P

2.2 MMP9的表达

MMP9在正常胃黏膜细胞中着色均匀，主要分布于细胞胞浆内，阳性表达率为15%(3/20);在胃癌组织中的表达异质明显，呈灶状或弥散性分布，阳性表达率为55.4%(36/65)，胃癌中的表达明显高于癌旁非瘤组织，差异具有统计学意义(χ2=10.046，P

2.3 不同肿瘤浸润深度及淋巴结有无转移胃癌患者Hpa、MMP9的表达

肿瘤浸润深度达到或超过浆膜层的胃癌患者Hpa、MMP9的阳性表达率明显高于未达浆膜层者，差异有统计学意义(P

2.4 Hpa、MMP9在胃癌中阳性表达的相关性

经相关性检验，Hpa、MMP9在胃癌组织中的表达呈正相关(rs=0.531，P=0.000)，见表2。表2 Hpa、MMP9在胃癌中表达的相关性

3 讨论

肿瘤细胞对细胞外基质(extracellar matrix，ECM)成分及其基底膜的降解是肿瘤浸润、转移的关键。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是人体内降解ECM的主要酶类，参与肿瘤演进等众多生理和病理过程[3，4]，MMP9作为MMPs家庭重要成员，具有广泛的酶底物特性，是降解基底膜成分IV型胶原的主要酶[5]。Sier等[6]的研究结果显示胃癌组织MMP9表达显著高于临近的正常胃粘膜，MMP9高表达的胃癌患者生存期明显缩短;David等[7]研究表明，与正常胃粘膜相比，胃癌组织MMPs表达明显升高，MMPs表达与胃癌分期密切相关。本实验结果显示，淋巴结转移患者MMP9阳性表达率明显高于无淋巴结转移者，说明MMP9在胃癌细胞突破基底膜向周围淋巴结转移过程中起着重要的作用; MMP9的表达还与胃癌的浸润深度密切相关(P

Hpa是目前发现的唯一能够降解细胞外基质和基底膜中主要成分HSPG的蛋白水解酶，其在肿瘤细胞的侵袭和转移中具有重要的意义。 Vlodavsky等[9]研究发现高转移潜力的肿瘤细胞Hpa活性比低或无转移潜力的肿瘤细胞高4～10倍。在卵巢腺癌、转移性黑色素瘤细胞、口腔鳞状细胞癌、肝细胞癌以及前列腺癌、膀胱癌和胰腺癌中Hpa mRNA和蛋白呈优势表达。Hulett等[10]也发现高转移的鼠腺癌细胞系表达高水平Hpa mRNA，而低转移细胞系仅有少量表达。Takaoka等[11]用RTPCR检测胃癌组织中Hpa的表达发现，正常胃粘膜组织中无Hpa的表达，胃癌组织中Hpa的表达与肿瘤体积和局部淋巴结转移有明显正相关性，高表达Hpa的患者预后差。本研究结果显示，Hpa的阳性表达与胃癌的浸润深度及有无淋巴结转移密切相关，表明在胃癌的进展过程中，Hpa具有重要的作用。本研究还发现，Hpa和MMP9在胃癌细胞上的表达呈正相关，推测Hpa和MMP9在胃癌浸润转移过程中存在相互关联、相互作用，联合检测Hpa和MMP9在判断肿瘤生物学行为及预后方面具有重要意义。

参考文献

1 Friedmann Y， Vlodavsky I，Aingon H，et al. Expression of heparanase in normal， dysplastic， and neoplastic human colonic mucosa and stroma evidence for its role in colonic tumorigensis[J]. Am J Pathol， 2000，157(4):11671175.

2 Liaball NB， Talbot I， Smith RA， et al. Matrix metalloprtease 2 (MMP2) and matrix metalloprtease 9 (MMP9)， type IV collagenase in colorectal cancer[J]. Cancer Res， 1996，56(3):190196.

3 Chambers AF， Matrisian LM. Changing views of the role of matrix metalloprotinases inmetastasis [J].J Natl Cancer Inst， 1997，89(17):12601270.

4 陈莉萍，刘嘉茵.血清基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶抑制剂-1在接受IVF-ET患者中的测定[J].实用临床医药杂志，2008，12(9)：110111.

5 Liotta LA， Steeg PA， StetlerStevenson WG. Cancer metastasis and angiogenesis:an imbalance of positive and negative regulation[J].Cell，1991，64(2):327336

6 Sier CFM， Kubben FJ， Canesh S， et al. Tissue levels of matrix metalloproteinase MMP2 and MMP9 and related to the overall survival of patients with gastric carcinoma[J]. Br J Cancer， 1996，74:413 417.

7 David L， Nesland J， Holm R， et al. Expression of lamin， collafen Ⅳ， fibronectin and type Ⅳcollafenase in fastric carcinoma[J]. Cancer，1994，13:518527.

8 张成武，邹寿椿，徐文娟，等.胃癌基质金属蛋白酶临床意义 [J].中国胃肠外科杂志，2000，3(1):2527.

9 Vlodavsky I， Fridmann Y， Elkin M， et al. Mammalian heparanase: gene cloning， expression and function in tumor progression and metastasis[J]. Nat Med， 1999，5(7):793802.

胃蛋白酶篇4

【关键词】 双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊;复方胃蛋白酶散;生理性腹泻

婴幼儿消化系统尚未成熟，胃酸和消化酶分泌少，酶活性偏低，不能适应食物和量的较大变化，另外新生儿生后尚未建立正常肠道菌群、改变饮食使肠道内环境变化或滥用广谱抗生素，均可使肠道正常菌群平衡失调而患腹泻，可分为感染性及非感染性两种［1］。长时间生理性腹泻易继发细菌性肠炎、肛周糜烂，严重者可发生脱水、生长发育迟缓［2］，偶尔也可发生短暂的肠绞痛，使患儿长时间哭闹，因此生理性腹泻也需积极***。现双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊(国药准字S19993065)与复方胃蛋白酶散(国药准字H14022760)联合用于小儿生理性腹泻的***，取得满意的疗效。

1 资料和方法

1.1 临床资料 选取2008年1月至2009年12月期间收治的生理性腹泻小儿患者188例，其中男96例，女92例，

1.2 方法 所有病例均采用双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊与复方胃蛋白酶散联用***①

②1~4个月双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊,1粒/次, 3次/d；复方胃蛋白酶散0.5 g/次,3次/d。

用温开水送服，疗程为2周，用药后由专人负责复查，并记录用药后3 d、7 d、14 d腹泻症状的演变，如每天腹泻次数、大便性状、是否腹胀及有无用药不良反应。

2 结果

结果显示，***3 d后的总有效率为91%，7 d的总有效率为95.8%，14 d 97.3%。具体情况如下表所示。服药期间未出现不良反应。

3 讨论

双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊主要是由长型双歧杆菌、嗜酸***杆菌和粪肠球菌组成的活菌制剂。双歧杆菌［3］和嗜酸***杆菌能够促进胃肠蠕动，调节胃肠功能，促进食物的消化、吸收、利用，还能代谢产生醋酸、***酸等有机酸和多种酶类，从而增加***糖在肠腔内酵解，进一步缓解腹泻症状。粪肠球菌定植在上肠道，处于膜菌群最外层，构成肠道外层生物屏障，使其处于平衡状态。

复方胃蛋白酶散是助消化药，用于小儿积食，食后腹胀；食***即泻，大便清稀、绿便；小儿消化不良等。复方胃蛋白酶散主要成分是胃蛋白酶、白术(土炒)、山药、鸡内金、山楂。胃蛋白酶常用于因食蛋白性食物过多所致消化不良；炒白术补气健脾；炒山药健脾止泻；鸡内金主治食积不化，消化不良，小儿疳积；山楂消食化积。

双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊与复方胃蛋白酶散联用，无配伍禁忌，促进消化、补充肠道有益菌，患儿用药3 d疗效明显，疗程达2周效果更显著，具有显著的协同作用。

参 考 文 献

［1］ 沈晓明，王卫平，等．儿科学．人民卫生出版社，2008,1.

胃蛋白酶篇5

【关键词】 蛋白激酶

关键词: 蛋白激酶C;同工酶;胃癌;多药耐药

摘 要:目的 观察传统型蛋白激酶C（cPKCs）在胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR1.0、耐药亚系SGC7901/VCR0.3，SGC7901/VCR0.7及药敏细胞系SGC7901表达及活性的变化，以及对细胞内药物浓度的影响. 方法 用免***荧光化学及蛋白印迹方法观察传统型蛋白激酶C在胃癌耐药细胞系及药敏细胞系的表达;竞争蛋白结合法测定PKC的活性;应用流式细胞仪观察细胞内药物浓度的变化. 结果 PKCα，PKCβⅠ ，PKCβ Ⅱ 及PKCγ在胃癌耐药细胞系及药敏细胞系均有表达，PKCα在耐药细胞表达呈强阳性，在药敏细胞表达呈阳性;PKCβⅠ 及PKCβⅡ 在耐药细胞及药敏细胞表达均为阳性;PKCγ在耐药细胞及药敏细胞表达均为强阳性.免***蛋白印迹实验证实，随耐药指数的增加，PKCα表达呈逐渐增高的趋势，薄层扫描蛋白印迹带的吸光度（A）分别为9584.17，9421.06，8534.64，8088.79，而PKCβⅠ ，PKCβⅡ 及PKCγ在耐药细胞系、耐药亚系及其药敏细胞系表达无明显变化.PKC活性检测结果提示，随耐药指数的增加，PKC活性呈逐渐增高的趋势，以细胞质及细胞核的PKC活性增高为主. 结论 传统型蛋白激酶C在维持胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR的多药耐药中起重要作用且具有同工酶特异性.

Keywords:protein kinase C;isoenzyme;gastric cancer;mul-tidrug resistance

Abstract:AIM To observe the expression and activity of classic protein kinase C in gastric cancer cell SGC7901and its drug-resistant sublines SGC7901/VCR slected by vincristine of different concentration（0.3，0.7and1.0μg・mL-1 ）.To explore the effect of classic protein kinase C on drug concen-tration within gastric cancer cells.METHODS The expres-sion of classic protein kinase C in gastric cancer cells was de-termined by immuno-fluorescent method and Western blot.The PKC activity was determined by competed protein bind-ing method.The drug concentration within cells was deter-mined by FACS.RESULTS Both SGC7901and SGC7901/VCR cells exhibited positive staining of PKCα，PKCβⅠ ，PKCβⅡ and PKCγ.The staining of PKCαin SGC7901/VCR was much stronger than that in SGC7901.There were no dif-ferences in the expression of PKCβⅠ ，PKCβⅡ and PKCγbe-tween SGC7901and SGC7901/VCR.By using Western blot，continuous increasing expression of PKCαin SGC7901/VCR was demonstrated along with the increasing resistant index，as well as no differences between SGC7901and its drug-resis-tant sublines.Results of activity assay showed continuous in-creasing activity of PKC in gastric cancer cells along with in-creasing resistant index.CONCLUSION Classic protein ki-nase C plays an important role in multidrug resistance of gas-tric cancer cells with isoenzyme specificity.

0 引言

蛋白激酶C是一类广泛分布的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，目前发现至少有12种同工酶亚型.按其生化性质及结构可分为四大类.由钙、磷酯（PL）、二酰基甘油（DAG）或佛波酯激活的PKC为传统型（cPKCs）;不依赖钙而由PL，DAG或佛波酯活化的PKC类为新型（nPKCs）;仅由PL类物激活的为***型型（aPKCs）;PKCμ不需钙、DAG激活，而由磷酯酰肌醇-4，5二磷酸激活，但在结构上与前三种部分类似，故称为第四种PKC［1，2］ .PKC具有异质性，不同的PKC亚类位于不同类型的细胞以及同一细胞内的不同部位，因而表现出不同的功能.近期研究提示，cPKCs可能参与了多药耐药的形成且具有同工酶特异性.本研究拟观察cPKCs在胃癌耐药细胞系、耐药亚系和药敏细胞系的表达及活性的变化以及对细胞内药物浓度的影响，以进一步揭示信号转导分子PKC在多药耐药发生中的作用.

1 材料和方法

1.1 材料 SGC7901细胞系由***事医学科学院惠赠，耐药细胞系SGC7901/VCR1.0及其耐药亚系SGC7901/VCR0.3，SGC7901/VCR0.7由本室诱导.兔抗人PKCα，PKCβⅠ ，PKCβⅡ 及PKCγ多克隆抗体购自Santa Cruz Biotechnology公司;羊抗兔IgG-FITC购自中山公司;辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG购自武汉博士德公司;PKC活性分析试剂盒购自Gibcobrl公司;［γ-32 P］ATP购自北京亚辉公司.细胞生长于含100mL・L-1 已灭活小牛血清的RP-MI1640培养液中，37℃，50mL・L-1 CO2 的条件下培养，耐药细胞培养液中分别加入0.3，0.7和1mg・L-1 长春新碱以维持耐药表型，用于实验前耐药细胞在不加长春新碱的培养液中培养2wk.

1.2 方法

1.2.1 免***荧光化学 取对数生长期的耐药细胞SGC7901/VCR及药敏细胞SGC7901，用2.5g・L-1 的胰酶消化传代于装有载玻片的培养皿中，培养24h后，用PBS冲洗3次，冷丙酮固定［3，4］ .PBS洗3次，加50mL・L-1 H2 O2 室温15min，水洗3次;3mL・L-1 Triton X-100室温15min，吸去不洗;1∶10的血清封闭30min，吸去不洗;分别加兔抗人多克隆抗体PKCα（2mg・L-1 ），PKCβⅠ （2mg・L-1 ），PKCβⅡ （4mg・L-1 ）及PKCγ（4mg・L-1 ），37℃孵育1h，PBS洗3次;加羊抗兔IgG-FITC（1∶60），37℃孵育1h，PBS洗3次，用500mL・L-1 的缓冲甘油封片.实验同时设PBS或无关抗体为替代一抗的阴性对照.

1.2.2 Western blot 收获对数生长期的细胞并用冷PBS清洗2次，以裂解缓冲液［50mmol・L-1 Tris-Cl（pH7.5），150mmol・L-1 NaCl，0.2mmol・L-1 EDTA，1mmol・L-1 PMSF和10g・L-1 NP-40］裂解细胞制备细胞总蛋白，Bradford法测定蛋白浓度;取150μg总蛋白上样进行SDS-PAGE电泳，通过电转移法将蛋白从聚丙烯酰胺凝胶转移至硝酸纤维素滤膜上，丽春红S染色并标记蛋白分子质量标准;去离子水漂去丽春红后以50g・L-1 脱脂奶粉于室温1h封闭滤膜，常规分别结合兔抗人PKCα，PKCβⅠ ，PKCβⅡ 及PKCγ多克隆抗体、辣根过氧化物 酶标记的羊抗兔IgG，最后以DAB显色目的条带.

1.2.3 PKC活性检测 参照文献［5］并进行改良取对数生长期的耐药细胞系、耐药亚系及药敏细胞系，用2.5g・L-1 的胰酶消化传代于10cm的培养皿中，至对数生长期，冷PBS冲洗2次后，用细胞刮收取细胞，加Buffer A1mL（Tris/EGTA/EDTA，β-巯基乙醇、蛋白酶抑制剂），用超声粉碎机粉碎，每次20s，共3次，然后1000g离心15min，沉淀部分超声粉碎后12000g离心10min，所得上清为细胞核部分;上清100000g4℃离心1h，所得上清为细胞质PKC部分;所得沉淀部分加含10mL・L-1 Triton X-100的BufferA抽提细胞膜PKC30min，每10min震荡1次，然后进行超声粉碎.蛋白定量用Bradford法，活性检测步骤按试剂盒要求进行，所测活性为cPKCs的总活性，PKC比活性用nmol・g-1 ・min-1 表示.

1.2.4 流式细胞仪检测细胞内药物浓度 参照文献［6，7］进行.取对数生长期细胞用2.5g・L-1 胰酶消化成单细胞悬液，接种6孔板并继续培养48h.加阿霉素至终浓度为5mg・L-1 ，继续培养1h，冷PBS洗3次，用细胞刮收获细胞离心，再以冷PBS重新悬浮，保存于4℃，上流式细胞仪检测.激发波长为488nm，接收波长为575nm.

统计学处理:用方差分析.

2 结果

2.1 免***荧光化学 PKCα在耐药细胞系SGC7901/VCR表达呈强阳性，在药敏细胞系SGC-7901表达呈阳性;PKCβⅠ 及PKCβⅡ 在耐药细胞及药敏细胞表达均呈阳性;PKCγ在耐药细胞及药敏细胞表达均呈强阳性.

2.2 Western blotting PKCα在耐药细胞系及耐药亚系较其药敏细胞系表达明显增加，随耐药指数的增加PKCα表达呈逐渐增加的趋势，薄层扫描蛋白印迹带的吸光度（A）分别为9584.17，9421.06，8534.64和8088.79（Fig1）.PKCβⅠ ，PKCβⅡ 及PKCγ在耐药细胞及药敏细胞无明显差异（Fig1）.

2.3 PKC活性检测结果 胃癌耐药细胞SGC7901/VCR及其耐药亚系与其药敏细胞比PKC活性明显增高，其中以细胞质及细胞核PKC活性增高比较明显（Tab1）.

2.4 细胞内药物浓度 胃癌耐药细胞SGC7901/VCR及其耐药亚系与其药敏细胞系比细胞内药物浓度明显减低，且具有统计学意义（P

***1 略

表1 胃癌耐药细胞系及其药敏细胞PKC活性　略

3 讨论

传统型蛋白激酶C，即钙、磷酯依赖的蛋白激酶C，包括4种同工酶亚型PKCα，PKCβⅠ ，PKCβⅡ 及PKCγ，Mr 80000～90000.cPKCs亚型分布有明显的组织特异性，如胰腺表达PKCα，PKCβⅡ ，而无PKCβⅠ 及PKCγ的表达;肾上腺皮质和髓质细胞表达PKCα，而间质细胞表达PKCβⅠ 和PKCγ;人白血病细胞表达PKCα，PKCβ和PKCγ.不同PKC亚型选择性器官分布提示它们在功能上的差异，多种亚型可在同一组织甚至同一细胞中存在，并介导不同的信号传递功能.我们观察了cPKCs在胃癌耐药细胞系及其药敏细胞系的表达［8］ ，PKCα在耐药细胞表达呈强阳性，在药敏细胞表达呈阳性;PKCβⅠ ，PKCβⅡ 在耐药细胞及药敏细胞表达均呈阳性;PKCγ在耐药细胞及药敏细胞表达均呈强阳性.蛋白印迹实验证实，随耐药指数的增加，PKCα的表达呈逐渐增高的趋势，而PKCβⅠ ，PKCβⅡ 及PKCγ在耐药细胞及药敏细 胞的表达无明显差异.提示PKCα在维持胃癌细胞的耐药表型中可能起重要作用.

有研究表明，在体外建立的耐药细胞株，较相应的敏感株蛋白激酶C活性明显增高［9］ .近年来也有研究表明耐药细胞系PKC的表达及活性较其药敏细胞系减低，但有趣的是这些细胞的基础PKC表达及活性水平与细胞耐药后PKC活性增高的细胞比高出许多倍，提示如果PKC活性的基础水平比较高，MDR表达不一定伴有PKC活性的增高［10］ .上述事实说明，肿瘤细胞获得MDR后，PKC活性的改变可能取决于亲代细胞本身的特性以及所诱导的药物类型.我们检测了胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR1.0，SGC7901/VCR0.7及SGC7901/VCR0.3及其药敏细胞SGC7901的PKC活性，提示细胞耐药后PKC总活性、细胞质及细胞核的活性明显增高，随耐药指数的增加呈逐渐增高的趋势，细胞膜的PKC活性无明显改变.可能是因为化疗药物长期诱导耐药细胞导致PKC的表达增加，而PKC通常以无活性的形式存在于细胞质，无化疗药物及其他刺激时细胞质内的PKC含量较多，所以检测到的结果细胞耐药后细胞质内PKC的活性较高而细胞膜的活性无明显变化，细胞核内PKC活性的增高可能与维持MDR表型蛋白的基因转录与表达有关.

MDR经常与PKC的水平和活性有关.从我们的实验结果也可以看出，PKC活性水平的升高与PKCα的表达有明显的相关性，随耐药指数的增加PKC的活性及PKCα的表达呈逐渐增高的趋势，细胞内药物浓度呈逐渐减低的趋势，更进一步说明PKCα在维持胃癌细胞的耐药表型中起重要作用.无论如何，对于PKC不同同工酶亚型与胃癌多药耐药性相关性的研究，为进一步明确胃癌的多药耐药机制以及选择逆转耐药的药物将会提供有益的帮助.

参考文献:

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［2］Johannes FJ，Prestle J，Eis P，Oberhagemann P，Pfizernnaier K.PKC-u is a novel，atypical member of the protein kinase C family ［J］.J Biol Chem，1994;269（8）:6140-6148.

［3］Zhang YH，Li YQ，Shi JW.Connections between glutamate de-carboxylase-like immunoreactive terminals and serotonin-like immunoreactive neurons in the periaqueductal gray and dorsal raphe nucleus of the rat ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1997;18（Suppl）:1-3.

［4］Li SQ，Gao P，Yan XJ.CEA overexpression in gallbladder car-cinoma ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2000;21（2）:141-142.

［5］Chou CY，Shen MS，Hsu KS，Huang HY，Lin HY.Involve-ment of PKC-αin regulatory volume decrease responses and acti-vation of volume-sensitive chloride channels in human cervical cancer HT-3cells ［J］.J Physiol，1998;512（2）:435-448.

［6］Liang R，Yang PD，Chen XQ.The detection of fluorescent in-tensity of Rhodamine123in multidrug resistance cell line HL-60/VCR by confocal laser scanning microscopy［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1997;18（Suppl）:56-58.

［7］Zhao HL，Lin SX，Jia B，Li J，Zhang LL，Znang SF.Inhibitory effects of salidroside on hypoxia-induced proliferation of rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells ［J］.Di-si Junyi Daxue　Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2000;21（2）:186-189.

［8］Han Y，Cao YX，Shi YQ，Nie YZ，Fan DM.Expression of P-glycoprotein and protein kinase C isoformαin gastric cancer multidrug-resistant cell line SGC7901/VCR ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2000;21（12）:1454-1456.

胃蛋白酶篇6

【关键词】 小儿肺炎；继发性腹泻；***酸菌片；复方胃蛋白酶散

文章编号：1004-7484（2013）-12-7539-01

小儿肺炎（Pediatric pneumonia）是儿科常见疾病之一，这种疾病一年四季均会发生，3岁以下的幼儿在冬、春季节发病率更高。该病的临床表现为发热、咳嗽、气促、呼吸困难和肺部细湿音等[1]；研究发现25.0%-43.4%的小儿肺炎患者在发病的同时，或者***好转后出现继发性腹泻的临床症状。笔者为探究小儿肺炎继发性腹泻***方法，随机抽取我院儿科自2010年3月至2011年3月之间接收诊治的80例小儿肺炎继发性腹泻患者，对其中的40例患者采用***酸菌片联合复方胃蛋白酶散进行***，疗效显著，相关资料现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究选取的研究对象为我院自2010年3月至2011年3月之间接收诊治的80例小儿肺炎继发性腹泻患者，所有患儿均符合《诸福棠实用儿科学》的相关诊断标准[2]，其中观察组男性患儿26例，女性患儿14例，患儿年龄3个月-5岁，平均（2.7±1.1）岁，腹泻4-13次/d，平均（7.4±1.1）次/d；对照组男性患儿28例，女性患儿12例，患儿年龄3个月-6岁，平均（3.7±1.1）岁，腹泻3-12次/d，平均（6.4±1.7）次/d。

1.2 ***方法 对照组患者给予单纯***酸菌片***，根据患儿年龄确定剂量为1-2岁儿童1片/两次。2-3岁，1片/一次，每天分早中晚三次服用，疗程为一周。研究组在对照组***基础上联用复方胃蛋白酶进行***，根据患儿年龄确定剂量为1-2岁儿童0.7g/一次。2-3岁，1.5g/一次，每天分早晚两次服用，疗程为一周[3]。两组患者同时进行抗生素对症***，***期间根据不同患儿的症状灵活给予母***、米汤一类易于消化的食物，根据病情变化增减***时间，腹泻稳定3d后考虑停止用药。

1.3 疗效评定 ***后3d对患儿开展疗效评价，显效：患儿临床症状恢复正常，***后患儿大便性状以及大便次数均回落到正常水平；有效：患儿临床症状恢复正常，大便次数大大减少，鼻塞与流涕症状减轻，大便性状有所好转；无效：患儿腹泻次数未下降，甚至出现恶化[4]。

1.4 统计学方法 运用SPSS13.0（Solutions Statistical Package for the Social Sciences）统计学软件对两组患儿***疗效进行对比，结果进行t检验，计数资料进行χ2检验与相对数描述，P

2 结 果

观察组显效30例，有效9例，无效1例，治愈率为97.5%；对照组显效18例，有效13例，无效9例，治愈率为77.5%；观察组平均疗程（3.6±0.7）d，对照组平均疗程（4.9±1.6）d，无患儿出现不良反应症状，研究组患儿***效果显著优于对照组患儿，相关数据具有统计学意义（P

3 讨 论

服用***酸菌片（Lactic acid bacteria piece）后，该药可以在人体肠道内形成一层保护膜，从而阻止病原细菌和病毒对人体的侵袭；另一方面该药还可以刺激肠道分泌出抗体，进一步提高人体肠道的免***力，保护促进有益菌的生长，从而达到缓颊腹泻的效果。虽然该药可以用于***腹泻，但是对该药品会出现过敏者应该禁止使用，此外患者服用过后出现严重不良反应，应立即停药及时就医。

复方胃蛋白酶散（Compound pepsin）能抑制人体胃排空和肠蠕动，具有调整胃肠功能的作用。当临床医学中使用***酸菌片联合复方胃蛋白酶散后，对于***小儿肺炎继发性腹泻有较好的疗效，两种药品联合使用后，可以达到优势互补的效果，患儿服用时口感也比以往好，容易被他们接受。

综上所述，***酸菌片联合复方胃蛋白酶散***小儿肺炎继发性腹泻取得了显著疗效，患儿疗程大大缩短，***后无不良反应，总体***效果满意，这种***方法值得临床应广泛推广应用。

参考文献

[1] 王春茹.***酸菌片***小儿肺炎继发性腹泻的疗效及安全性评价[J].吉林医学，2011，17（12）：295-296.

[2] Zheng Shihua，Chen bine traditional Chinese and western medicine treatment of infantile diarrhea over and over again[J].Chinese journal of experimental formulas of Chinese medicine，2013，12（13）：342-345.

胃蛋白酶篇7

关键词：分泌性中耳炎；胃食管反流病；胃蛋白酶；鼓室积液

【中***分类号】R453【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0130-02分泌性中耳炎（secretory otitis media，SOM）是以传导性聋及鼓室积液（包含浆液、黏液及浆―黏液）为特征的中耳非化脓性炎症疾病[1]。其发病机制是否与胃食管反流病（GERD）有关，国内外专家学者对其研究甚少。Tasker等[2]证明食管炎中反流的胃内容物可以进入鼻咽部和中耳，导致了中耳炎的发生；国内学者周长华等[3] 也证明分泌性中耳炎的发病因素可能与胃食管反流病有关。

本研究在我院耳鼻喉科门诊2012.7―2013.11月抽取鼓室积液45例，采用酶联反应免***吸附法（ELISA法），检测其中胃蛋白酶的含量，观察与分析分泌性中耳炎与胃食管反流病的关系，为分泌性中耳炎的临床***提供新的理论依据。现将结果报告如下。

1 材料及方法

1.1 实验材料

1.1.1 临床资料：采用全国最新的分泌性中耳炎诊断标准[4]为诊断依据。选取2012.7―2013.11月在青海大学附属医院耳鼻喉科抽取的45例鼓室积液为样本，所有病例均填写详细的调查表格。其中男29例，女16例，年龄2-52岁，中位数30.7±4.5岁；

1.1.2 主要试剂及设备：人胃蛋白酶ELISA试剂盒（北京久峰润达生物技术有限公司）；Elx800酶标仪（美国BIO-TAK INSTRUMENTS.INC公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 样本取材：使用鼓膜穿刺术（tympanotomy）抽吸鼓室液体，后将样本移入1.5ml无菌离心管，离心20分钟（3000转/分）后，收集上清液，放置于冰箱（-20℃）中保存待查。

1.2.2 观察指标：严格按照人胃蛋白酶ELISA试剂盒说明书操作，批内变异系数

1.3 统计学处理：所有数据均采用SPSS17.0统计软件分析，数据均以平均数±标准差表示。

2 结果

45例分泌性中耳炎患者鼓室积液使用P/N法定性测定，其中含有胃蛋白酶31例，阳性率68.9%。将胃蛋白酶稀释为0.1μg/ml-10μg/ml之间，根据在450nm出的吸光度与浓度关系制成标准曲线。根据方程可测得鼓室积液中胃蛋白酶含量为（0.659±0.46μg/ml），

由此推测反流的胃内容物可能进入鼻咽及中耳，GERD可引发分泌性中耳炎。中耳胃蛋白酶的存在可作为GERD食管外的一种表现，将来可能通过处理GERD来***胃酸反流导致的中耳炎，其机制为：通过抑制胃酸的反流，控制胃蛋白酶逆行上移经鼻咽部和咽鼓管进入中耳腔，从而可以避免患者接受鼓膜造口术及其他有创***。

3 讨论

分泌性中耳炎又称为渗出性中耳炎（otitis media with effusion，OME）、卡他性中耳炎（catarrhal otitis media），如积液粘稠呈胶冻状者，又称为胶耳。中医称为“耳闭”。分泌性中耳炎是耳鼻咽喉头颈外科常见疾病，尤其多发于儿童，发病率有逐年增高的趋势。其临床症状主要表现为传导性耳聋及鼓室积液，伴有轻微的耳痛，耳鸣，耳闭塞感，严重者可见极度内陷的鼓膜。国际上召开过多次关于分泌性中耳炎的专题研讨会，证明其病因可能与免***系统发育不成熟、病毒感染、神经性炎症机制改变、***突气化不良、咽鼓管功能不良等有关。在引起咽鼓管功能不良的各种原因中，GERD为其主要热点之一。咽鼓管功能不良可能归因于反流后酸性环境下的黏膜炎症、胆汁酸的毒性及酸的渗透作用，尤其是胃蛋白酶的水解破坏，这一系列反应都受蛋白水解活性调节[5]。

Tasker等[2]使用ELISA法得出，82%患者中耳渗出液中有胃蛋白酶原的存在，且测出胃蛋白酶的浓度高于血清浓度1000倍。从而认为：食管炎中反流的胃内容物可以进入鼻咽部和中耳，导致了中耳炎的发生。另有Lieu等[6]实验：测得分泌性中耳炎泌出液中胃蛋白酶和胃蛋白酶原的阳性率77%。Crapko等[7]对已行鼓膜置管的20例分泌性中耳炎患儿的鼓室积液中的胃蛋白酶使用Western Blot法进行分析，结果表明：胃蛋白酶阳性率为60%， 这也证明了中耳炎的发病因素可能与胃食管反流病有关。

O’Reilly等[8]对患有分泌性中耳炎的小儿（n=509）进行流行病学调查，发现20%小儿鼓室积液中可检出胃蛋白酶，平均浓度为202.4±329.1ng/ml（12.5～2303ng/ml），结果表明胃蛋白酶很有可能是分泌性中耳炎发病的危险因素。

本研究，旨在对分泌性中耳炎和胃食管反流病的关系进行探讨。通过实验观察到：45例鼓室积液中有31例测得胃蛋白酶，其阳性率为68.9%，含量为0.659±0.46μg/ml，从而证明分泌性中耳炎的发病因素及病理过程可能与胃食管反流病有关，以便为分泌性中耳炎的临床***提供新的理论依据。

参考文献

[1] 黄选兆，汪吉宝，孔维佳.实用耳鼻咽喉头颈外科学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2011：848-855.

[2] Tasker A，Dettmar PW， Panetti M，et al. Is gastricrc reflux a cause of otitis media with effusion in children[J]. Laryngoscope.2002，112：1930.

胃蛋白酶篇8

关键词：PTEN；uPA；原发性胃癌细胞株；转移

    肿瘤的转移及侵袭过程复杂，涉及到许多过程的相互影响。但是肿瘤细胞中细胞外基质的降解是肿瘤转移及侵袭的重要前提，从而导致肿瘤细胞微环境的改变，进而发生肿瘤细胞的转移。尿激酶型纤溶酶激活物（uPA）是一种丝氨酸蛋白酶，可以由成纤维细胞、上皮细胞、中性粒细胞、肿瘤细胞分泌[1]。PTEN是一种抑癌基因，是第一个具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因，该基因编码的蛋白质具有蛋白磷酸酶活性及脂肪磷酸酶活性。文章研究PTEN、uPA在胃癌组织及正常胃黏膜组织中的表达情况，旨在分析胃癌细胞的转移及对预后的影响，取得较好效果，现报告如下。 1 资料与方法

1.1  一般资料：胃癌细胞细胞株及正常胃黏膜上皮细胞株：2种细胞株均选购于上海爱研生物科技有限公司，胃癌细胞株的型号为BSG23，人胃黏膜细胞株的型号为GES-1，胃癌细胞株用含5%胎牛血清的RPMI-1640培养基，配置培养液时添加碳酸氢钠2 000 mg/L，在37℃、5% CO2条件下常规培养；正常胃黏膜细胞的培养：培养液采用DMEM/F12浓度比为1:1的比例混合，加补充物2%～20%胎牛血清、L-谷氨酰胺、牛血浆白蛋白、HEPES缓冲液、链霉素及万古霉素等[2]。培养后从各个细胞株中采取样本，运用细胞石蜡包埋法制作切片，选取完整及较好的切片进行SP染色，并在显微镜下观察[3]。

1.2  方法：采用免***组织化学SP法：①运用特异性一抗与组织或细胞抗原结合；②将生物素化地二抗与一抗结合；③将链霉素亲和素-过氧化物酶复合物与生物素化二抗结合，最终作用于底物。鼠抗人PTEN和uPA单克隆抗体及S-P试剂盒均从福州迈新生物技术开发公司采购。将石蜡标本以5 μm层厚切片，烤干并经二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，并用0.3% HO-甲醛液处理，阻断内源性过氧化物酶，运用PBS洗3次，并运用EDTA修复液常规修复，玻片封闭并在孵育盒中孵育抗体，正常羊血清保护，再加入一抗、二抗、链霉素亲和素-过氧化物酶复合物，运用免***组织化学SP法进行染色，其步骤严格按照试剂盒的说明进行操作，同时运用PBS缓冲液取代一抗作为阴性对照。显微镜下观察切片以切片对角线的方式观察，每条对角线观察10个视野，分析各个视野中各个指标的阳性表达率。

1.3  评价标准：PTEN和uPA的染色：阳性细胞信号为在胞浆中出现棕色颗粒或是棕黄色颗粒，出现阳性细胞数占细胞总数的25%以上者为阳性[4]。

1.4  统计学方法：所有数据均采用SPSS 16.0统计学软件打包处理完成，采用χ2检验分析胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中的PTEN和uPA的表达；采用Spearman等级相关统计学方法分析PTEN和uPA的相关关系，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

    在胃癌细胞核正常胃黏膜上皮细胞中PTEN和uPA的表达情况差异有统计学意义（χ2=19.80，χ2=2.86，P＜0.05），说明在胃癌细胞中PTEN的表达率较正常胃黏膜细胞低，而uPA的表达阳性率较正常组织高。详见表1。

表1  PTEN和uPA在胃癌细胞核正常胃黏膜细胞中的表达情况比较（例）

类型

例数

PTEN

uPA

阳性

阴性

阳性

阴性

胃癌细胞

20

4

16

19

1

正常胃黏膜细胞

20

18

2

3

17

    胃癌组织细胞中PTEN和uPA阳性率表达的相关性比较，经spearman等级相关分析，有r2=-0.4722，P＜0.05，说明胃癌组织中PTEN和uPA的表达呈负相关。

3 讨论

    uPA是一种丝氨酸蛋白酶，常以无活性的单链酶原形式存在，可经纤溶酶、组织蛋白等激活，当uPA与细胞膜上的uPA受体结合后，其可被纤溶酶、组织蛋白等激活，形成纤溶酶，进而非特异性的降解细胞外基质和基质中的蛋白质，如玻璃体结合蛋白、层黏连蛋白、蛋白多糖等，从而改善细胞局部生长的微环境，利于肿瘤细胞的转移和侵润。PTEN是新发现的一种抑癌基因，其中文名为人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因，位于10q23.3，转录产物为515 kb Mrna[5]。其蛋白产物含有一酪蛋白磷酸酶的功能区和约175个氨基酸左右的与骨架蛋白tenasin、auxilin同源的区域。它能抑制肿瘤侵润和转移，tenasin通过黏着斑连接肌动蛋白轴丝。黏着斑是包括整合蛋白、黏着斑激酶、Src和生长因子受体的复合物，它能介导细胞与基质的链接，形成的复合物参与信号传导，通过FAK信号传导通路影响着细胞向远处转移的能力。整合蛋白参与细胞生长调节、瘤浸润、血管生成和转移。此外PTEN能抑制多种金属基质蛋白酶的表达，而金属基质蛋白酶（丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶等）是肿瘤侵袭和转移的关键因素，PTEN可以通过抑制FAK的磷酸化阻止透明质酸诱导的MMP-9启动子分泌而抑制肿瘤细胞的转移和侵润[6]。

    本文研究胃癌细胞中PTEN和uPA的表达情况发现：在胃癌组织中前者表达较低，而后者呈现高表达的现象。两者表达的差异，可能是导致肿瘤细胞发生转移的原因，PTEN的低表达，使其对金属基质蛋白酶的抑制作用减弱，导致了对癌细胞生长及转移的抑制作用减弱，而uPA的高表达，则更好的为肿瘤细胞的转移和侵润创造了良好的微环境，有利于肿瘤的转移。

4 参考文献

[1] 宁平霞,张亚平.uPA和MMP-9在胃癌组织中的表达及意义[J].中国现代医药杂志,2010,12(1):58.

[2] 程永波.正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法[J].胃肠病学和肝病学杂志,2006,15(1):84.

[3] 陈  罡,罗殿中,李  信,等.培养细胞的石蜡切片用于DcR3免***化学染色的探讨[J].现代预防医学,2007,34(7):1251.

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胃蛋白酶篇9

干酵母俗称酵母片、食母生片。含转化酶、麦糖酶、叶酸、烟酸、肌醇及B族维生素等，常用于营养不良、消化不良及B族维生素缺乏症的辅助***。每片0.5 g或O.3 g，饭后嚼碎服。剂量过大会引起腹泻。属拮抗磺胺类药物，不宜与碱性药物，如氢氧化铝同服。需储存于干燥处。

胃蛋白酶为消化酶，常用于食用蛋白性食物后缺乏胃蛋白酶所致的消化不良，病后恢复期的消化功能减退以及食欲不振等，必须在胃酸参与下才能发挥作用，故常与稀盐酸同服。有合剂及片剂，饭前服用。忌与硫糖铝及碱性药物同服。密闭储存于干燥避光处。

多酶片含胃蛋白酶、胰酶(胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶)，用于胰腺疾病引起的消化障碍和胃蛋白酶缺乏或消化机能减退引起的消化不良症。为肠溶衣与糖衣的双层包衣片，内层为胰酶，外层为胃蛋白酶。饭前整片服用。不宜与抗酸药硫糖铝、胃得乐、奥美拉唑、复方氢氧化铝片及西咪替丁、雷尼替丁、法莫替丁等合用，也不宜与猪肝同食。

***酶生又称表飞鸣，为活***酸杆菌的干粉剂及片剂，通过在肠内分解糖类生成***糖，升高肠内酸度，抑制病菌繁殖，防止肠内发酵，减少产气。用于消化不良、肠发酵所致的小肠胀气，小儿饮食不当引起的腹泻、肝性脑病等。饭前服用。应密闭储存于冷暗处。注意不宜与磺胺类抗菌药、药用炭、鞣酸、酊剂及铋剂等合用，也不宜用开水送服。

胰酶肠溶片含胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶及糜蛋白酶，在中性或碱性环境中能促进蛋白质和淀粉的消化，对脂肪也有一定的消化作用。用于胰脏疾病引起的胰液分泌不足及糖尿病时的消化不良。餐前整片吞服。常与碳酸氢钠合用，以增加疗效，忌与酸性药品同服。避光、密封，在干燥处保存。

二甲硅油片又称消胀片，通过消除胃肠道中的泡沫，排除泡沫贮留的气体，缓解胃肠道胀气。用于消化不良和非机械性肠梗阻的胃肠胀气。餐前和临睡前服用。

复合消化酶亦名达吉胶囊，含胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、淀粉酶、熊去氧胆酸、纤维素酶、胰酶、胰脂酶，可促进各种植物纤维素分解，促进蛋白质、脂肪及碳水化合物的消化吸收，促进肠内气体排除，消除腹部胀满感，促进胆汁分泌，抑制肝细胞内脂肪沉积，提高胆色素排泄，***黄疸。用于胃肠道、胰脏消化机能不全，急、慢性肝脏疾患所致的胆汁分泌不足，胆道疾患、胆囊切除病人的消化不良，病后恢复期过食及高脂食物引起的消化不良。餐后口服。急性肝炎、胆道闭锁病人不可服用。不良反应包括可能发生口内不快感，偶有呕吐、腹泻、软便。密闭，在室温下保存。

多潘立酮(吗丁啉) 用于由胃排空延缓、食管反流、食管炎引起的消化不良症，功能性、器质性、感染性、饮食性、放疗或化疗所引起的恶心、呕吐。饭前15～30分钟服用。增加胃动力有可能产生危险时(如胃肠道出血、机械性梗阻、穿孔)、患分泌催***素的垂体肿瘤(催***素瘤)、***癌病人禁用，禁止与酮康唑口服制剂合用。妊娠妇女、肝功能损害、严重肾功能不全(血清肌酐>0.53 mmol/L，即>6 mg/d1)病人慎用。与抗胆碱药合用会拮抗其***消化不良的作用，抗酸剂和抑制胃酸分泌药物会降低其口服生物利用度，不宜合用。遮光、密闭保存。

药用炭也称活性炭，能吸附肠内异常发酵产生的气体，减轻腹胀。其剂型为片剂，口服应用。

地衣芽孢杆菌(整肠生) 可调整肠道菌群失调，维持生态平衡，消除消化不良、腹胀等症。用于***急慢性肠炎、痢疾及各种因素引起的肠道菌群失调、腹泻等，对慢性溃疡性非特异性结肠炎急性发作、伪膜性肠炎、肝硬化引起的腹泻、胀气有理想的***效果。该药不可与环丙沙星合用，剂量加倍时可有便秘。

胃蛋白酶篇10

【摘要】 目的比较壁虎不同提取工艺成分对S180和H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及免***器官的影响。方法以肉瘤S180、肝癌H22荷瘤小鼠作为动物模型，以抑瘤率及胸腺、脾脏指数为指标比较壁虎原粉及水煎煮、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解等不同工艺成分的抗肿瘤作用。结果3种酶解工艺成分对肉瘤S180和H22肝癌抑瘤率均明显高于原粉与水煎煮液，相比模型组有显著性差异(P

【关键词】 壁虎; 酶解; 抗肿瘤; S180; H22

壁虎，别名守宫、壁虎、蝎虎、天龙，味咸性寒，功能祛风，定惊，散结，解毒。壁虎作为药材始见于《本草经集注》，而《本草纲目》就称其能治“瘰疬初起……血积成痞，反胃膈气，痈疮大痛”。 其可入血分透筋达络，既善破血散结解毒，又能通经活络而止痛。随着壁虎多种药理活性，特别是抗肿瘤活性被发现后[1]， 人们对壁虎的关注度日益提高。目前壁虎临床一般以原粉、水煎煮等方法应用，存在服用量大、易被微生物污染等缺点。现代药理研究表明，动物类药材发挥作用的主要为其小分子肽[2～4]，因此，我们拟采用酶解方法得到其小分子肽，并与常规原粉和水煎煮液比较其抗肿瘤作用的差异。

1 材料

1.1 动物昆明种小鼠，雄性，体质量(20±2)g，购自山东中医药大学实验动物中心，动物许可证号为：SCXK(鲁)20050015。S180腹水小鼠和H22肝癌小鼠均购自山东省医学科学院。

1.2 仪器***-2型组织捣碎机，江苏江南仪器厂;摇摆式高速中药粉碎机，浙江大德中药器械有限公司;W-O型恒温水浴锅，上海申顺生物科技有限公司，TDL-5飞鸽牌离心机，上海安亭科学仪器厂;小型切向流超滤系统，美国Millipore公司(密理博)。

1.3 试剂及药品胃蛋白酶(酶活力>1 200 U/g)，胰蛋白酶(酪蛋白转化力≥25.0)，均购自国药基团化学试剂有限公司，注射用环磷酰胺，200 mg/支，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：08051354，氟尿嘧啶注射液(5-Fu)，上海旭东海普药业有限公司，批号:080302。壁虎购自济南兴旺蟾业，经本校周风琴教授鉴定系壁虎科动物无蹼壁虎Gekko swinhonis Gunther的干燥全体，置干燥箱60℃以下真空干燥，粉碎，过80目筛，细粉备用。

2 方法

2.1 供试品溶液的制备

2.1.1 原粉液的制备取壁虎细粉，用0.2%羧甲基纤维素将其稀释成1 ml∶0.5 g的混悬液，备用。

2.1.2 水煎煮提取液的制备取壁虎细粉，加8倍量水煮沸煮沸60 min，离心，残渣加8倍量水煮沸30 min，离心，合并上清液，浓缩至1:0.5(每毫升药液相当于0.5 g药材，下同)，即得水煎煮提取液。

2.1.3 胃蛋白酶酶解液的制备[5]取壁虎细粉90 g，置于组织捣碎器中，加入5倍量水，匀浆(10 000 r/min)10 min，等分为3份，取1份，煮沸15 min，放冷，调节pH 2.0，移至37 ℃恒温水浴锅中，保温10 min，加入1%胃蛋白酶，2 h后取出，离心(4 000 r/min)10 min，取上清液，微滤(0.22 μm)，超滤(相对分子质量3 000)，收集相对分子质量小于3 000部分，浓缩至1∶0.5，即得胃蛋白酶酶解液。

2.1.4 胰蛋白酶酶解液的制备[6]取“2.1.3”项下一份样品液，煮沸15 min，放冷，调节pH 7.5，移至55 ℃恒温水浴锅中，保温10 min，加入1%胰蛋白酶，3 h后取出，离心(4 000 r/min)10 min，取上清液，微滤(0.22 μm)，超滤(相对分子质量3 000)，收集相对分子质量小于3 000部分，浓缩至1∶0.5，即得胰蛋白酶酶解液。

2.1.5 仿生酶解液的制备取“2.1.3”项下一份样品液，煮沸15 min，放冷，调节pH 2.0，移至37 ℃恒温水浴锅中，保温10 min，加入1%胃蛋白酶，2 h后取出，调节pH 7.5，移至55 ℃恒温水浴锅中，保温10 min，加入1%胰蛋白酶，3 h后取出，离心(4 000 r/min)10 min，取上清液，微滤(0.22 μm)，超滤(相对分子质量3 000)，收集相对分子质量小于3 000部分，浓缩至1∶0.5，即得仿生酶解液。

2.2 抗肿瘤作用的比较[7]

2.2.1 对S180荷瘤小鼠的影响无菌抽取传代8 d的S180腹水小鼠腹腔肿瘤细胞，加入生理盐水调整浓度至4×109个/L，于每只小鼠右腋下注射0.2 ml，接种140只。接种24 h后，将小鼠随机分为7组，每组20只，即模型组、原粉组、水煎煮组、胃蛋白酶酶解组、胰蛋白酶酶解组、仿生酶解组与阳性对照组。模型组灌胃生理盐水10 ml·kg-1，连续10 d;原粉组、水煎煮组、胃蛋白酶酶解组、胰蛋白酶酶解组、仿生酶解组均5 g药材·kg-1药液，连续10 d;阳性对照组腹腔注射环磷酰胺，剂量30 mg·kg-1，连续3 d;给药量均为10 ml·kg-1。第11天，各组动物颈椎脱臼处死，剥离肿瘤、胸腺、脾脏，称重，计算抑瘤率、胸腺与脾脏指数，计算公式如下：

抑瘤率(%)=(空白组瘤重均值-样品组瘤重均值)/空白组瘤重均值×100%

胸腺(脾脏)指数=重量(mg)/体质量(g)

2.2.2 对H22荷瘤小鼠的影响建模方法、给药方式、剂量均同S180荷瘤小鼠(对照组为5-Fu，25 mg·kg-1)。

2.3 统计学方法实验数据采用SPSS 10.0统计软件进行分析，所有测定数值以±s表示，采用方差分析法进行分析，P

3 结果

3.1 对S180荷瘤小鼠的影响

3.1.1 对S180荷瘤小鼠抑瘤率的影响结果见表1表1 对S180荷瘤小鼠抑瘤作用的影响

3.1.2 对S180荷瘤小鼠脾脏、胸腺指数的影响结果见表2表2 对S180荷瘤小鼠免***器官的影响

3.2 对H22荷瘤小鼠的影响

3.2.1 对H22荷瘤小鼠抑瘤率的影响结果见表3表3 对H22荷瘤小鼠抑瘤作用的影响

3.2.2 对H22荷瘤小鼠脾脏、胸腺指数的影响结果见表4表4 对H22荷瘤小鼠免***器官的影响

4 讨论

壁虎在临床上常用于肿瘤，特别是消化道肿瘤的***，一般焙干研细或水煎煮入药，但壁虎起抗肿瘤作用的物质基础还不清楚。小分子肽抗肿瘤作用逐渐引起了人们的注意。越来越多的研究表明，动、植物含有小分子肽具有很好的抗肿瘤作用，世界上许多国家正在竞相研究开发小分子肽类抗肿瘤的防治药物，如谷胱甘肽、海参五肽、槲寄生肽、胸腺五肽等[8，9]。本研究运用酶解的方式，使壁虎含有的蛋白类成分酶解成小分子肽，对其抗肿瘤作用进行研究。研究结果表明，壁虎经酶解后的抗肿瘤作用明显高于原粉组与水煎煮组。

本实验中的壁虎仿生酶解是指模拟人体消化过程，先用胃蛋白酶酶解，再以胰蛋白酶酶解的方法，对壁虎药材进行酶解。

小分子肽的界限划分迄今未有明确定义，鉴于国内外热门研究小分子肽的相对分子质量都在3 000以下[10]，本实验中3种酶解液均为经过超滤所得的相对分子质量小于3 000的小分子肽。

参考文献

[1] 叶云珍. 中药壁虎的研究进展[J].中药材，2009，32(7):1160.

[2] Shimonishi Y. Peptide Science-Present and Future[M].Dordrecht:Kluwer Academic Publishers，1999:436.

[3] 王爱华，柳美玲，戴志明，等.小肽的吸收机制与营养价值研究进展[J].上海畜牧兽医通讯，2008，2:7.

[4] 王克夷.开发小肽，筛选新药[J].中国生化药物杂志，2003，24(1):48.

[5] 钱 方，邓 岩，刘 阳，等.胃蛋白酶水解大豆蛋白的研究[J].中国***品工业，2001，29(3):10.

[6] 黄开华，周艳明，吴 畏，等.胰蛋白酶酶解鹿血条件的优化[J].湖北农业科学，2007，46(2):302.

[7] 徐叔云.药理学实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2001:1270.

[8] 徐桂华，毕力夫，苏秀兰.抗肿瘤生物活性肽研究进展[J].中国医药生物技术，2007，2(2):130.

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