学文网牛血清白蛋白篇1
【关键词】 对苯二酚
蛋白质是生物体的基本组成成分，如酶、抗体、转运蛋白等在生物体内发挥着重要功能。人血清白蛋白存在于血液中，分子量为66241，等电点为47〔1〕，主要维持血浆的胶体渗透压，其另一功能是与许多微溶于水的物质结合为易溶于水的复合物。酚类化合物对DNA有不同程度的损害〔2-5〕，对苯二酚在环境中容易氧化为对苯二醌，对苯二酚与对苯二醌可以和DNA碱基形成加合物〔6-8〕，对人体危害极大。对苯二酚与对苯二醌是通过人血清白蛋白转运进入人体各器官。因此，研究血清白蛋白与对苯二酚与对苯二醌的相互作用具有重要意义。本文利用循环伏安法研究了对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极上的电化学行为，并初步探讨了在L半胱氨酸上牛血清白蛋白与对苯二酚及对苯二醌相互作用的机制。
1 材料与方法
11 仪器与试剂 缓冲液：005mol/L Na2HPO4-005mol/L NaH2PO4-010mol/L NaCl缓冲溶液(用NaOH调pH)；005g/L L半胱氨酸；01mol/LH2SO4；20000g/L对苯二酚。200000g/L牛血清白蛋白。MEC-12B型多功能微机电化学分析仪(江苏电分析仪器厂)；金电极(直径1mm)为工作电极，铂电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极。
12 实验方法
121 L半胱氨酸在金电极上组装 将金电极在置于005μmAl2O3粉末中反复抛光至镜面，用Microcloth抛光布抛光光亮，再用丙酮冲洗，用亚沸水超声波清洗。将金电极置于01mol/LH2SO4中于2V氧化5s，-035～15V于1V/s循环扫描5次，取出金电极，用蒸馏水冲洗干净，用磁力搅拌器在蒸馏水中清洗5min，将清洁后的金电极置于50g/L L半胱氨酸浸泡24h，取出金电极，用蒸馏水冲洗干净，用磁力搅拌器在蒸馏水中清洗5min，即得L半胱氨酸修饰金电极。所用水为3次亚沸蒸馏水。
122 电化学行为 在500ml容量瓶中，加入010ml对苯二酚，500ml 005mol/L Na2HPO4-015mol/L NaCl缓冲溶液，混匀，作循环伏安扫描。
13 量子化学计算 对苯二酚与对苯二醌用半经验方法(AM1)进行分子几何构型初始优化，然后用密度泛函理论(DFT)在6-31G(d)水平进行全优化分子结构，在相同水平计算分子的分子前线轨道能量及静电荷。用Gaussian03软件完成所有计算。
2 结果
21 L半胱氨酸修饰电极的电化学行为特征(***1) 由修饰电极于-060～08V范围内的循环伏安***可见，裸金电极上未见氧化还原峰存在；L半胱氨酸修饰电极在高电位的电流增大，溶液pH=730时，在-0068V产生一个氧化峰，这可能是羧基在较低的电位下被还原为羟基所致。
22 对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极上的电化学行为(***2，表1) 从表1可见，在L半胱氨酸修饰金电极上，当溶液pH=730时，氧化峰(Epa)比裸金电极负移了0169V，还原峰(Epc)比裸金电极负移了0061V，对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极可逆性变好，峰电流变大，对对苯二酚的氧化还原具有催化作用。结果与杜丹等人研究对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极上的电化学行为一致〔9〕。当溶液pH=1100时，在L胱氨酸修饰金电极上的氧化峰比裸金电极正移了0090V，还原峰比裸金电极负移了0010V，说明在pH-1100时，对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极可逆性变坏，峰电流变小，对对苯二酚的氧化还原不具有催化作用。
表1 对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极及裸金电极上的电化学参数（略）
23 扫速对对苯二酚峰电流和峰电位的影响 对苯二酚在裸金电极上的氧化还原峰电位随着扫速的增大氧化峰电位发生正移，还原峰负移，峰电流(ip)与扫速的平方根(V1/2)成正比，说明峰电流受扩散控制；对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极上的氧化还原峰电位受扫速的影响与裸金电极相似，峰电流(ip)与扫速的平方根(V1/2)成正比，说明峰电流也受扩散控制。
a，a`:裸金电极；b，b`:L半胱氨酸修饰电极；扫描速度：100mv/s
***1 L半胱氨酸修饰金电极上的循环伏安***（略）
a，a`:00400g/L对苯二酚在裸金电极上；b，b`:00400g/L对苯二酚在L半胱氨酸修饰电极上；扫描速度：100mv/s
***2 对苯二酚在L半胱氨酸修饰金电极上和裸金电极上的循环伏安***（略）
24 牛血清白蛋白对峰电位与电流的影响(***3) 由于牛血清白蛋白容易吸附到金电极上，故在修饰电极上研究了牛血清白蛋白在pH=730溶液中对对苯二酚氧化还原电位及电流的影响。从***3可见，牛血清白蛋白加入到对苯二酚溶液时，其氧化峰电位发生负移，但峰电流改变不大，说明牛血清白蛋白对对苯二酚向电极扩散的影响较小；而对其氧化产物对苯二醌，其氧化峰电位发生负移，峰电流变小，说明牛血清白蛋白对对苯二醌的扩散的影响较大。当牛血清白蛋白的浓度达到05000g/L时，峰电位不再改变，说明牛血清白蛋白与对苯二酚结合达到饱和状态。当牛血清白蛋白的浓度达到12000g/L时，峰电流不再改变，说明牛血清白蛋白与对苯二醌结合达到饱和状态。根据苯二酚和对苯二醌可以和血清白蛋白结合的饱和度及血清白蛋白的分子量，计算苯二酚和对苯二醌和血清白蛋白结合比分别为48：1和16：1。
转贴于
a:00400g/L对苯二酚;b:00400g/L(15800g/L)牛血清白蛋白；pH=730；扫描速度：100mv/s
***3 牛血清白蛋白对苯二氧化还原电位及电流的影响（略）
25 对苯二酚现对苯二醌的量子化学计算结果 对苯二酚与对苯二醌所有原子都在一个平面内，对苯二醌的最大净电荷为043，最小的负电荷为-045，最低空轨道和最高占有轨道能量分别为-012999和-027059Hartree，分子的偶极距为0，为非极性分子；分子的净电荷反映了分子间净电吸引的能力；最低空轨道能量越低，越容易接受电子，最高占有轨道能量越高越容易提供电子，分子的前线轨道反映了形成分子氢键的能力，故对苯二酚较对苯二醌容易提供电子，而对苯二醌较对苯二酚容易接受电子。由此来看，对苯二醌比对苯二酚具有较大的净电吸引的能力和形成分子氢键的能力，因而在电极上峰电位和峰电流改变较大。
3 讨论
结果表明，在pH1100时主要以NH2-C(R)OO存在。具有较好催化活性的基团为NH3-C(R)OO-。苯酚的pKa1=1000时，主要以苯酚分子的形式存在，而对苯二酚的羟基是供电子基团，故pKa1
参考文献
〔1〕 张昌颖.生物化学［M］.2版.北京：人民卫生出版社，1985：432.
〔2〕 宋远志.对苯二酚与脱氧核糖核酸的相互作用［J］.中国公共卫生，2006，22(2)：192-194.
〔3〕 宋远志.苯酚与脱氧核糖核酸的相互作用［J］.中国公共卫生，2005，21(12)：113-114.
〔4〕 宋远志.对硝基苯酚与杂交中DNA的相互作用［J］.中国公共卫生，2005，21(1)：33-35.
〔5〕 宋远志.邻氨基酚与脱氧核糖核酸的相互作用［J］.中国公共卫生，2005，21(9)：94-96.
〔6〕 Krisztina Pongracz，William J.Bodell.Detection of 3'-Hydroxy-1，N6-benzetheno-2'-deoxyadenosine 3'Phosphate by 32P Postlabeling of DNA Reacted with pBenzoquinone［J］.Chem Res Toxicol，1991，4:199-202.
〔7〕 Margaret Gaskell，Rebekah Jukes，Donald J.L.Jones.Identification and Characterization of(3，4-Dihydroxy)-1，N2-benzetheno-2-deoxyguanosine 3-Monophosphate，a Novel DNA Adduct Formed by Benzene Metabolites［J］.Chem Res Toxicol，2002，15:1088-1095.
〔8〕 Margaret Gaskell，Keith I E McLuckie，Peter B.Farmer.Genotoxicity of the benzene metabolites para-benzoquinone and hydroquinone［J］.Chemico-Biological Interactions，2005，153(1):267-270.
牛血清白蛋白篇2
[关键词] 牛血清白蛋白；生物色谱柱；阿司匹林
[中***分类号] R96[文献标识码] B[文章编号] 1673-7210（2014）06（a）-0101-04
Preparation of bovine serum albumin biological chromatographic column and its application in determination of Aspirin
TANG Lingli1 WEI Shibai2 HUANG Dongping1 HUANG Mingli1 RUAN Chong1
1.College of Public Health of Guangxi Medical University, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530021, China; 2.Department of Pharmacy, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530021, China
[Abstract] Objective To prepare biological chromatographic column to separate and determine the ingredients of drugs. Methods Silica gel was reacted with 3-aminopropyl trimethoxylsilane to form amine functionalized activated silica gel, which was covalent binding with BSA to synthesize BSA bonded stationary phase. Then BSA bonded stationary phase was packed column with homogenization, thus BSA biological chromatographic column was prepared. Aspirin was taken as a detective object to examine the combination performance and separation performance of BSA bonded stationary phase. Results It came to that, the combined rate was 3.69 μmol/g, the biological chromatographic column was 74 mg/g, the amount of Aspirin in per tablet was 14.65 μg and the labeled amount was 107.8% detected by BSA biological chromatographic column. Conclusion All of above shows that BSA bonded stationary phase is synthesized successfully, and the BSA biological chromatographic column has good combination property and separation property.
[Key words] Bovine serum albumin; Biological chromatographic column; Aspirin
牛血清白蛋白色谱柱的制备
及对阿司匹林的
1.广西医科大学公共卫生学院，广西南宁 530021；2.广西医科大学第一附属医院药学部，广西南宁 530021
[摘要] 目的 制备生物色谱柱，用于分离或测定药物成分。 方法 采用3-氨基丙基三甲氧基硅烷（APTS）与硅胶反应生成氨基功能化的活化硅胶，并与牛血清蛋白（BSA）共价结合形成BSA键合固定相，匀浆装柱制备成BSA生物色谱柱，以阿司匹林（Aspirin，ASP）为分析对象考察BSA固定相的结合性能和分离性能。 结果 BSA结合率为3.69 μmol/g，ASP在BSA键合固定相色谱柱上的最大结合量为74 mg/g，经BSA色谱柱测得阿司匹林肠溶片的含量为14.65 μg/片，标示量为107.8%。 结论 这表明BSA与硅胶载体成功结合形成BSA键合固定相，所制备的BSA生物色谱柱具有良好的结合性能与分离性能。
[关键词] 牛血清白蛋白；生物色谱柱；阿司匹林
[中***分类号] R96[文献标识码] B[文章编号] 1673-7210（2014）06（a）-0101-04
Preparation of bovine serum albumin biological chromatographic column and its application in determination of Aspirin
TANG Lingli1 WEI Shibai2 HUANG Dongping1 HUANG Mingli1 RUAN Chong1
1.College of Public Health of Guangxi Medical University, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530021, China; 2.Department of Pharmacy, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530021, China
[Abstract] Objective To prepare biological chromatographic column to separate and determine the ingredients of drugs. Methods Silica gel was reacted with 3-aminopropyl trimethoxylsilane to form amine functionalized activated silica gel, which was covalent binding with BSA to synthesize BSA bonded stationary phase. Then BSA bonded stationary phase was packed column with homogenization, thus BSA biological chromatographic column was prepared. Aspirin was taken as a detective object to examine the combination performance and separation performance of BSA bonded stationary phase. Results It came to that, the combined rate was 3.69 μmol/g, the biological chromatographic column was 74 mg/g, the amount of Aspirin in per tablet was 14.65 μg and the labeled amount was 107.8% detected by BSA biological chromatographic column. Conclusion All of above shows that BSA bonded stationary phase is synthesized successfully, and the BSA biological chromatographic column has good combination property and separation property.
[Key words] Bovine serum albumin; Biological chromatographic column; Aspirin分子生物色谱法（MBC）是20世纪80年代中后期逐渐发展起来的以酶、受体、抗体、传输蛋白等生物大分子为固定相的一类色谱法，是基于生物大分子的特异性相互作用原理进行分离纯化具有活性的化合物或测定生化参数的一项新兴技术[1]。药物作为一类重要的生物活性物质与血浆蛋白存在可逆性的结合平衡，药物分子通过血浆白蛋白的运输到达受体部位发生药理作用，而药物分子在体内与血浆蛋白的相互作用是其发挥药理作用的前提，因此可以通过血浆白蛋白生物色谱筛选药物中的活性成分。付强等[2]通过自制人血清白蛋白色谱柱成功对DL（±）色氨酸进行了手性分离；Bentucci等[3]制备出的血清白蛋白色谱柱，不仅可筛选出药物活性成分，还可通过体外实验反映药物-血清白蛋白的相互作用。蔡汉宁等[4]制备出核心组蛋白色谱柱作用于其活性物质，至少筛选出9种组蛋白作用蛋白。与传统的实验方法相比，分子生物色谱法具有高度专一性、分离速度更快、容易自动化操作、重复性好等优点[5]。
由于人血清白蛋白价格昂贵，用于制备生物色谱柱成本太高，有学者利用牛血清白蛋白与人血清白蛋白结构相似的特点，制备成牛血清白蛋白色谱柱用于中药活性成分的分离测定。Tan等[6]通过制备的牛血清蛋白生物整体柱，成功的分离出当归的活性成分，并考察了当归提取液在该整体柱上保留的影响。本文主要通过将硅胶氨基功能化与BSA共价键结合合成BSA固定相，制备BSA生物色谱柱，并选择了阿司匹林（ASP）作为与BSA结合的对象来验证BSA色谱柱的性能。ASP作为一种代表性药物，不仅具有卓越的消炎、退热、止痛能力，研究表明它还可以协同干扰素抑制肝细胞癌生长转移[7]，抑制宫颈癌Hela细胞增殖[8]，预防妊娠期高血压[9]等。通过对ASP及其肠溶片的分离测定，可以进一步探讨生物色谱柱在药物有效成分分离测定中的应用前景。
1 仪器与材料
6010紫外可见分光度计（安捷伦科技公司，上海）；LC-10Tvp高效液相色谱仪（日本岛津公司）；spectrum 100傅立叶变换红外光谱仪（美国penkim Elmer仪器有限公司）；Bio-Rad垂直电泳槽、电泳仪（美国Bio-Rad公司）。
3-氨基丙基三甲氧基硅烷（APTS）（97%，上海晶纯试剂有限公司，批号：15122）；N，N′-琥珀酰亚胺碳酸酯（98%，阿拉丁公司，批号：25231）；考马斯亮蓝G250（沃凯，批号：WB20091102）；BSA（Solarbio）；硅胶Sepra Silica （粒径50 μm，phenomenex 美国）；ASP标准品（Purity>99%）；ASP肠溶片（50 mg/片，国药准字H43021814）；四甲基乙二胺（TEMED）、丙烯酰胺溶液、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸胺、Tris碱、甘氨酸、十二烷基硫酸钠（SDS）均来自北京索莱宝。
2 方法与结果
2.1 BSA色谱柱的制备
取硅胶2 g（平均粒径为50 μm，孔径46 Å（1 Å=0.1 nm），比表面积为518 m2/g），加入适量甲苯回流除去残留水分，按10 μmol/m2加入3-氨丙基三甲基硅烷反应8 h得到氨丙基硅胶，过滤，分别用甲苯和甲醇洗涤，真空干燥后置干燥器保存。取氨丙基硅胶2 g，加入乙腈5 mL和N，N′-琥珀酰亚胺碳酸酯2 g，于30℃反应24 h，过滤后分别用乙腈、甲醇洗涤得到活化硅胶。取制备得的活性硅胶1.5 g，加入到25 mmol/L（pH=6.6）的磷酸盐缓冲液中，再加入适量BSA，30℃下搅拌反应20 h，过滤后依次用水及5%乙醇多次洗涤，得到BSA固定相。将制备好的BSA固定相用缓冲液匀浆后注入不锈钢柱（4.5 nm×150 nm）中，并抽真空压紧柱，制备得到BSA色谱柱。
2.2 傅里叶红外光谱（FTIR）验证活化硅胶功能基团
用溴化钾压片法制备活化硅胶样品，进行FTIR分析。FTIR分析结果见***1，硅胶（a）和活化硅胶（b）共有的吸收峰有：1099、1103 cm-1处的非对称伸缩振动，指纹区800 cm-1的对称伸缩振动和470 cm-1的弯曲振动，均为硅胶的主要结构Si-O的特征谱带；与硅胶（a）相比，活化硅胶（b）增加了伯胺（-NH2）的吸收峰1402、1561 cm-1，2928 cm-1峰为亚甲基的不对称变形振动峰，说明硅胶上中有亚甲基的存在，表明APTS已结合在硅胶上。由此可见，活化硅胶成功连接上了氨基功能基团。
a.硅胶；b.活化硅胶
***1 硅胶和活化硅胶的红外光谱***
2.3 BSA与活化硅胶结合量
按硅胶与BSA质量比8∶1、4∶1、2∶1、1∶1进行表面覆盖率的测定。称取四份硅胶，每份0.5000 g，分别与0.0625、0.1251、0.2500、0.5000 g BSA反应，反应结束后各取100 μL洗涤液采用考马斯亮蓝染色法[10]测定其中BSA含量，用BSA加入量与反应剩余BSA量之差计算出结合量，按照下列公式计算出BSA的表面覆盖率：表面覆盖率=结合蛋白的物质的量（μmol）/活化硅胶质量（g）。结果显示，活化硅胶与BSA质量比为4∶1时，BSA结合量已基本达到饱和，加大剂量并不能明显的增加键合量，表明BSA表面覆盖率可能受空间位阻大小的影响。见***2。
***2 活化硅胶与BSA不同配比下的BSA表面覆盖率
2.4 BSA固定相结合ASP研究
精密称取ASP对照品50 mg，用冰醋酸-甲醇（1∶10）溶液稀释至50 mL，摇匀，得到ASP标准溶液。取ASP标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL用冰醋酸-甲醇（1∶10）溶液稀释至10 mL，各取10 μL用于HPLC。色谱条件：流动相：甲醇-20%冰醋酸（3∶1）；流速：1 mL/min；色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：30℃；紫外检测器，λ=237 nm。得到ASP标准曲线方程：Y = 97 941X+ 37 178，r = 0.9997，其中Y为峰面积，X为ASP浓度（μg/μL）。
称取一定量的硅胶和BSA固定相匀浆法分别填装于两根柱子中，精密称定适量的ASP，用中性乙醇溶解后缓缓倾注入色谱柱中，用蒸馏水洗涤柱子，接收洗涤液，根据标准曲线计算洗脱液中ASP含量，ASP加入量与洗脱液中ASP含量之差得到固定相对ASP的结合量，见***3。对比硅胶固定相和BSA固定相对ASP的结合量，ASP与BSA固定相结合量明显大于与硅胶固定相结合量，证明与ASP结合的主要是BSA而不是硅胶。
***3 硅胶固定相、BSA固定相与阿司匹林结合量的比较
2.5 BSA色谱柱性能考察
牛血清白蛋白篇3
[摘要] 目的 探讨小牛血清去蛋白提取物对放射性肠炎的防治作用，寻找能够有效防治各种放射性黏膜损伤的理想药物。 方法 将Ⅱ、Ⅲ期盆腔肿瘤患者108例随机分成观察组和对照组各54例，观察组行放疗+小牛血清去蛋白提取物保留灌肠，对照组行放疗+地塞米松等药物保留灌肠，观察两组相关血清和临床指标在***前后的变化。 结果 在疗程内，随着时间的推移，C反应蛋白（CRP）的水平不断升高，观察组的CRP增长速度慢于对照组（P<0.05）；与对照组相比，观察组能显著延长首次直肠临床症状的发生时间；放疗结束后，观察组总有效率为81.48%，显著高于对照组的59.26%，差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论 小牛血清去蛋白提取物可有效调节CRP水平，减轻放疗所致的直肠黏膜免***损伤，推迟直肠黏膜炎症的发生时间。
[关键词]盆腔肿瘤；小牛血清去蛋白提取物；放射性肠炎；C-反应蛋白
[中***分类号] R574 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）16-15-03
盆腔、腹腔、腹膜后肿瘤，尤其是妇科肿瘤及前列腺肿瘤是最常见的恶性肿瘤，放射***已经成为恶性肿瘤综合***过程中一个不可缺少的重要环节。但放疗中常常出现累及小肠、结肠和直肠的放射性肠炎（radiation enteritis，RE）。据流行病学不完全统计，目前我国放射性肠炎发生率高达7%～21%[1]，常表现为腹痛、腹泻、大便次数增多、便脓、便血，严重者可出现肠粘连、肠狭窄、肠梗阻。放射性肠炎不仅给患者带来不便和痛苦，同时还会导致放疗计划不能顺利进行进而影响***效果[2]，因此，如何防治放射性肠炎已经成为医生和患者急需解决的关键问题。小牛血清去蛋白提取物能有效防治放射所致的皮肤黏膜损伤，在放射性口腔黏膜炎防治上已得到广泛的应用[3]，然而对于放射性肠炎的临床应用报道较少，本研究采用随机对照研究法来评价小牛血清去蛋白提取物保留灌肠***放射性肠炎疗效，同时寻找一种能预测疗效的生化指标。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2010年12月～2012年12月间我院肿瘤科门诊及住院进行放射***的盆腔肿瘤患者108例，所有患者经X线钡剂检查、肠系膜血管造影、内窥镜检查、活组织检查以及病理证实、无远处转移及影响放疗的严重内科疾病、卡氏评分>70，并签署了相关***知情同意书。所有患者随机分为观察组和对照组各54例，观察组男15例，女39例，年龄37～72岁，平均（50.1±13.2）岁，体重51～82 kg，平均（67.1±18.5）kg；病理类型：宫颈癌20例、卵巢癌13例、直肠癌10例、膀胱癌7例、前列腺癌4例；采用放射损伤分级标准对放射性肠炎进行分级：Ⅱ度放射性肠炎32例，Ⅲ度放射性肠炎22例。对照组男17例，女37例，年龄40～75岁，平均（48.0±16.0）岁，体重47～78kg，平均（63.3±15.2）kg；病理类型：宫颈癌18例、直肠癌13例、卵巢癌12例、膀胱癌6例、前列腺癌5例；Ⅱ度放射性肠炎30例，Ⅲ度放射性肠炎24例。所有患者均为术后单纯放射***，两组患者在年龄、性别、体重指数、病理类型以及放射性肠炎分级等方面比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 ***方法
从放疗疗程开始第1天，观察组应用小牛血清去蛋白提取物（黑龙江省珍宝岛制药有限公司，H20013157），给药方式为：生理盐水50mL+小牛血清去蛋白提取物200mg，保留灌肠，1次/d，5次/周。对照组给药方式为：生理盐水50mL+庆大霉素8mg+地塞米松5mg+维生素B12 1mg，保留灌肠。一般用药时间在当日放疗结束后1h内给药，至常规放射***结束后1周为止。
1.3 观察指标及疗效评价
两组患者于放疗前1天开始抽静脉血送检血清C反应蛋白，之后每放疗5次抽1次静脉血，持续至放疗疗程结束。采用美国BD公司生产的凝血检测专用真空采血管采集者放疗后1h左右的静脉血3mL置于含枸橼酸钠抗凝管中，3000r/min，离心15min，制备的血浆严格按操作规程定量检测CRP，跟踪观察患者病情，对照组采用相同方法采集静脉血3mL。CRP检测采用免***散射比浊法，采用美国贝克曼库尔特有限公司生产的贝克曼ACL7000全自动血凝仪上进行，采用配套的增强型***胶免***分析定量检测试剂盒，定标血浆由美国贝克曼公司提供。
放疗结束后，依据RTOG/EORTC小肠/大肠晚期放射性损伤分级方案[4]：0级，无明显肠道症状；Ⅰ级，轻度腹泻，轻度痉挛，轻度直肠分泌物增多或出血；Ⅱ级，中度腹泻和肠绞痛，大便>5次/日，多量直肠黏液或间断出血；Ⅲ级，梗阻或出血，需手术；Ⅳ级，发生坏死、穿孔、瘘道。
放疗评定标准[5]：治愈（CR）：分级下降至0级；部分缓解（PR）：分级下降但未达到0级；无效（NC）：分级无下降，甚至上升。有效率为CR+PR。
1.4 统计学处理
采用SPSS13.0软件进行数据统计分析。计量资料以（）表示，采用t检验，计数资料采用x2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者C反应蛋白与放疗疗程的关系
2.2 两组临床疗效比较
***前后两组各级放射性直肠炎的分布见表2，观察组中30例患者分级由Ⅰ级下降到0级，治愈率为55.56%（30/54）；14例患者分级由Ⅱ级下降到Ⅰ级，部分缓解率为25.92%（14/54）；10例患者分级无下降，无效率为18.52%（10/54）；总有效率为81.48%（44/54）。对照组中21例患者分级由Ⅰ级下降到0级，治愈率为38.89%（21/54）；11例患者分级由Ⅱ级下降到Ⅰ级，部分缓解率为20.37%（11/54）；16例患者分级无下降，6例患者分级下降到Ⅲ级，无效率为40.74%（22/54）；总有效率为59.26%（32/54）。总有效率组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。 观察组患者首次出现放射性直肠炎时间为（18.0±4.0）d，剂量为（28.0±7.0）Gy；对照组患者首次出现放射性直肠炎时间为（12.0±3.0）d，剂量为（19.0±5.0）Gy，提示观察组推迟了放射性直肠炎发生时间并缩短了临床症状持续时间（t=4.218，P<0.05）。
牛血清白蛋白篇4
[关键词] 荧光光谱法；分光光度法；盐酸拓扑替康；盐酸依利替康；喜树碱类药物；牛血清白蛋白；结合反应
喜树碱是采用特殊工艺从植物中提取而得的，来源于我国特有珙桐科植物喜树，是一种具有很强抗癌活性的天然化合物[1]。蛋白质是最重要的生物大分子之一，几乎参与了所有生命活动过程。本研究采用荧光光谱法、分光光度法对蛋白质与盐酸拓扑替康（THC）与盐酸依利替康（IHC）两种喜树碱类药物有机小分子的相互作用机理进行研究，为高效低毒的喜树碱类药物开发提供参考。
1 实验方法
1.1检验设备
CARY Eclipse型荧光光度计（瓦里安）；3400型uv—vjs分光光度计（日立）。
1.2实验方法
1.2.1荧光光谱法[2]
在10ml比色管中加入0.2ml牛血清白蛋白（含量lmg/ml），依次加入1×10-4mol/l盐酸拓扑替康溶液适量，0.5mlPH为7.4的Tris-HCl缓冲溶液，用荧光光度计以1cm石英比色皿测定荧光强度。然后分别加入KCl、CaCL2、ZnCl2、FeCL3、CuCl2溶液测定金属离子对喜树碱类药物猝灭BsA荧光的影响.
1.2.2分光光度法[3]
在10ml比色管中加入lml1×10-4mol/l盐酸拓扑替康溶液，加入0.5mlPH为7.4的Tris-HCl缓冲溶液，在分光光度计上进行吸光度测定。盐酸依利替康测定方法同上。
2 结果
2.1荧光光谱
牛血清自蛋白分子中因含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等残基而发射较强的内源荧光。用盐酸拓扑替康与盐酸依利替康两种喜树碱类药物滴定牛血清自蛋白，测定结果显示350nm处的荧光发射峰被猝灭，而在450nm、540nm二处出现了新的发射峰，即盐酸拓扑替康与盐酸依利替康的发射峰，二种分子在405nm处有一等发射点，荧光光谱结果提示牛血清自蛋白与盐酸拓扑替康与盐酸依利替康之间发生了静态猝灭作用，二者结合生成了超分子化合物，405nm处的等发射点说明溶液中同时存在着被结合的和游离的盐酸拓扑替康与盐酸依利替康，从荧光光谱***中显示，仅盐酸拓扑替康与盐酸依利替康比有牛血清自蛋白存在下盐酸拓扑替康与盐酸依利替康的最大吸收峰强度要弱，充分说明牛血清自蛋白与盐酸拓扑替康与盐酸依利替康之间发生了非辐射荧光共振能量转移，且牛血清自蛋白对盐酸拓扑替康与盐酸依利替康的荧光吸收有敏化作用。
2.2分光光度
牛血清自蛋白加入盐酸拓扑替康与盐酸依利替康的紫外可见吸收光谱。随着盐酸拓扑替康与盐酸依利替康的加入，在278nm处的牛血清自蛋白吸收峰逐渐升高并伴有轻微的蓝移，结果与荧光光谱相符，结果提示牛血清自蛋白与盐酸拓扑替康与盐酸依利替康相互作用引起了蛋白质分子发生了变化，短波方向移动说明蛋白质分子的肽链延伸了并且疏水性下降。
3 讨论
人血清白蛋白（HSA）与牛血清白蛋白（BSA）具有相似的氨基酸序列，人血清白蛋白是由585个氨基酸残基组成的单肽链蛋白质，分子量为67kDa；而牛血清白蛋白是由580个氨基酸残基组成的单肽链蛋白质，分子量为68kDa。肽链中都含有35个半胱氨酸残基。因此，在药物研究中，牛血清白蛋白常替代人血清白蛋白来作为蛋白质模型进行体外研究，作为与人血清白蛋白结合情况的参考，且价廉易得，而人血清白蛋白主要用于遗传方面、临床、新陈代谢的研究。
本研究采用荧光光谱法、分光光度法研究盐酸拓扑替康与盐酸依利替康两种喜树碱类药物与牛血清白蛋白的相互结台反应结果显示，牛血清自蛋白与盐酸拓扑替康与盐酸依利替康之间发生了静态猝灭作用，二者结合生成了超分子化合物。牛血清白蛋白与二种喜树碱类药物之间存在的相关性，可引起了蛋白质分子的变化。
参考文献：
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牛血清白蛋白篇5
[关键词] 牛奶蛋白过敏；婴儿；腹泻病；氨基酸配方粉
[中***分类号] R725.7 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）31-0131-02
牛奶蛋白过敏是小儿最常见的食物过敏之一，在欧美发达国家，婴儿牛奶过敏发生率达2.0%～7.5%[1]。近年来，随着临床医学发展及人们生活水平提高，儿科医师越来越关注牛奶蛋白过敏与婴儿腹泻病的关系。本文对近两年来我科住院及门诊由牛奶蛋白过敏所致婴儿腹泻病20例患者的临床资料进行分析总结。
1对象与方法
1.1 对象
2010年2月～2012年2月在我院门诊及住院20例1～6个月婴儿，其中男15例，女5例，全部满足下例条件：①主要症状除反复腹泻外，部分伴脓血便、呕吐、湿疹；②肠镜提示肠黏膜有灶性红斑、小结节、糜烂甚至溃疡等不同病理改变；③食物特异性免***球蛋白G检测一种或多种蛋白不耐受；④食物回避试验或激发试验阳性；⑤辅食添加至蛋清/蛋黄、鳕鱼、牛肉、鸡肉、小麦、西红柿、大米中的3～4种。
1.2 方法
采集患儿喂养史、家族过敏史及临床表现，对20例1～6个月婴儿进行血细胞分析、凝血系列、肝功能、便常规及培养、肠镜检查、食物特异性免***球蛋白G检测。
2 结果
2.1 过敏情况及喂养情况
20例患儿5例皮肤湿疹，2例家长患有过敏性疾病，15例配方奶粉喂养，3例母***+配方奶粉混合喂养。
2.2 临床表现
生后由于母***不足，给予添加配方奶粉喂养后，出现腹泻、脓血便、呕吐、湿疹等。发病时间大多为生后1～3个月，临床上均以反复腹泻伴/不伴脓血便为主要临床表现，既往诊断急性腹泻病或急性感染性腹泻病，予抗感染、补液、止泻等对症***后，大便呈黄色糊状，无肉眼脓血便及镜下血便，每日1～2次，不久再次发作。其中5例伴有皮肤湿疹，大部分湿疹见于颜面部、颈部、两耳廓及四肢褶皱处，临床表现为瘙痒，部分可渗出、结痂，皮肤科予外用药局部***后好转，但经常复发。2例患儿家长有过敏性鼻炎病史。
2.3 辅助检查
2.3.1 血细胞分析检查 20例白细胞计数均正常，其中嗜酸性粒细胞升高14例，贫血5例，血红蛋白（95～105） g/L。
2.3.2 便常规检查及便培养检查 便常规检查：白细胞++～+++/HPF，潜血试验阳性12例；白细胞+/HPF，潜血试验阴性5例；白细胞（3～5）/HPF，潜血试验阴性3例；20例便培养均为培养出致病菌。
2.3.3 凝血系列、肝功能检查 20例患儿化验凝血系列、肝功能均正常。
2.3.4 肠镜检查结果 20例全部行电子肠镜检，15例肠黏膜灶性红斑、小结节、糜烂甚至溃疡；5例肠黏膜无明显改变。见***1。
2.3.5 食物特异性免***球蛋白G检测 采用食物特异性免***球蛋白G抗体检测试剂盒（美国BIOMERICA公司出品的Allerqua-ntTM Food IgG ELISA Kit），酶联免***法检测20例患儿对牛奶、鱼、虾、大豆、花生、蛋黄/蛋清、牛肉、鸡肉、西红柿、小麦、鳕鱼、玉米、大米等14种食物的敏感性；结果判定在全自动酶标仪450 mm波长处测定每孔吸光度A值，通过与标准曲线比较得到IgG浓度（nakt/L）。食物特异性免***球蛋白G判断标准：0级为阴性，+1级为轻度不耐受，+2级为中度不耐受，+3级为重度不耐受，20例患儿检测结果示：15例仅牛奶+3；3例牛奶+3，蛋黄/蛋清+1；2例牛奶+2，鳕鱼+1。
2.3.6 食物回避试验或激发试验 食物过敏的最好***是回避不适宜食物，而激发试验则是诊断食物过敏的“金标准”[2]。所有患儿在未给予特殊药物***前，回避原有配方奶粉、母***喂养及添加辅食，更换为氨基酸配方粉（商品名纽康特），其中12例在1周临床症状明显好转，粪便转为黄色糊状，复查便常规白细胞（0～3）/HPF，潜血试验阴性；5例3 d复查便常规白细胞阴性，潜血试验阴性；湿疹患儿2周内湿疹完全消退。本研究随访3个月以上患儿15例，其中12例服用氨基酸配方粉3个月后替换为普通配方奶及添加辅食半年内无临床症状，其余3例停用氨基酸配方粉后再次出现腹泻、脓血便，呕吐及颜面部湿疹，更换为氨基酸配方粉后不久临床症状消失，表明小儿腹泻病与牛奶蛋白过敏密切相关。
3 讨论
婴儿是食物过敏的高危人群，其中以牛奶蛋白过敏最多见。牛奶蛋白过敏是指机体牛奶蛋白的高反应性，可涉及多器官和多系统，表现为皮肤、胃肠道和呼吸道症状[3]，临床可分为IgE介导型和非IgE介导型，前者表现为皮肤搔痒、荨麻疹、血管性水肿、喘息发作、鼻炎、呕吐、腹泻等，常在进食后数分钟内出现；非IgE介导型主要表现为特异性皮炎、慢性腹泻、脓血便、缺铁性贫血、便秘，湿疹等，部分患儿可出现生长发育迟缓，多于进食后数小时或数天后出现[4]。本研究对象为1～6个月婴儿，以腹泻、脓血便、呕吐、湿疹等为主要表现，发病隐匿，以非IgE介导为主，与文献相符。
牛奶蛋白过敏的诊断需要详细地收集病史、喂养史、家族史等多方面的信息。临床常用方法有：牛奶蛋白回避及激发试验、双盲安慰剂对照牛奶激发试验、食物变应原皮肤点刺试验、血清异性IgE测定等[5，6]。双盲安慰食物激发试验是诊断牛奶过敏的金标准，此方法诊断周期长，程序较复杂，且条件要求高，目前较少采用。临床上常用的是通过采集临床症状、生长发育情况、家庭过敏史、喂养史及添加辅食等，结合皮肤点刺试验和牛奶回避、激发试验诊断牛奶过敏。临床实践中，小婴儿牛奶蛋白过敏以非IgE介导为主，血清异性IgE测定阳性率极低。婴儿皮肤娇嫩易致皮肤点刺试验不准确，痛苦较大，故临床仅作为参考。本实验研究对象为小婴儿，其中5例皮肤湿疹，2例家长有过敏性疾病，15例生后奶粉喂养，混合喂养5例，提示病史资料的收集对牛奶蛋白过敏的诊断有重要意义。
牛奶蛋白回避或激发试验对IgE介导或非IgE介导的过敏反应均有效，简单易行，是目前临床上诊断婴儿牛奶蛋白过敏最常用方法[7]。本实验20例小婴儿临床表现主要为反复腹泻伴/不伴脓血便、呕吐、轻度贫血、皮肤湿疹等迟发型牛奶过敏。既往以急性腹泻病或急性感染性腹泻病***无效或不久再次发作，而给予氨基酸配方粉（纽康特）替代饮食或回避牛奶蛋白摄入1周后，大便每日1～2次，性状为黄色糊状，未见肉眼血便及镜下血便；2周内患儿湿疹完全消退。停用氨基酸配方粉再次进食普通配方奶粉及牛奶蛋白后，部分患儿临床症状复发，与本实验结果一致。
牛奶蛋白过敏的***主要有环境控制，饮食控制、药物***，而回避牛奶蛋白及含牛奶蛋白的食物是***的关键。氨基酸配方奶粉是以纯化的氨基酸或寡肽为基础，完全回避了牛奶蛋白，且含有正常量的脂肪和碳水化合物，其营养可保证婴幼儿生长发育的正常需要，是目前解决牛奶蛋白过敏的最好选择。
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牛血清白蛋白篇6
文/王亮
“因为我有糖尿病，所以要控制喝水”，糖尿病患者常有口渴、喝水多的表现，病友们常有一种错误的观点，认为患糖尿病后应该控制喝水，这是大错特错的。喝水多是体内缺水的表现，是人体的一种保护性反应，患糖尿病后控制喝水不但不能***糖尿病，反而使糖尿病更加严重，可引起酮症酸中毒或高渗性昏迷，是非常危险的。
①喝水有利于体内代谢毒物的排泄。
②喝水有预防糖尿病酮症酸中毒的作用。
③酮症酸中毒时更应大量饮水。
④喝水可改善血液循环，对老年患者可预防脑血栓的发生。
⑤严重肾功能障碍，尿少、水肿时，要适当控制饮水。
调整饮食防胆色素结石
文/张依秋
胆色素结石在我国是一种多发常见病，其发病率有逐年上升趋势。然而胆色素结石的病因尚不十分明了，且可引发多种合并症。湖北医学院附属第一医院普外科进行一项医学研究证实，胆色素结石的成因与蛋白质营养有关，合理调整饮食结构，有助预防胆色素结石的形成。
科研人员曾从收集的50份胆石标本中，随机取出经红外线吸收光谱鉴定胆固醇结石20份，胆色素结石20份，编号相同的胆固醇结石患者胆汁10份、胆色素结石患者胆汁10份，编号相同的血清40份和正常人血清20份，测定组成蛋白质的17种氨基酸含量。结果表明，胆固醇结石患者血清中氨基酸含量与正常人无差异，而胆色素结石患者血清中氨基酸浓度则低于正常人，从而影响了胆汁中蛋白质的含量。研究证实，胆汁中蛋白质含量的降低是胆色素结石形成的主要原因，血清中氨基酸总量的降低也是胆色素结石的易患因素。
科研人员认为，摄取食物中含蛋白质营养高于一般饮食水准者，胆色素结石的发病率下降。为了较好地防治胆色素结石，患者可适当多吃些富含蛋白质的动、植物类食品，如鱼、虾、瘦肉、家禽、蛋类、***类、豆类、硬壳果类、五谷类及大白菜、油菜、黄瓜等，以促进人体摄取充足的蛋白质，降低胆色素结石发病率。
痛风者最宜食鸡蛋和牛奶
文/王兴国
痛风的基本病理是血液中尿酸浓度过高，以至于“渗漏”到关节附近的软组织中并形成尿酸盐结晶，并引起严重的疼痛。因为在体内，尿酸是由嘌呤代谢而来的，所以痛风患者（还有高尿酸血症。即只有血尿酸升高，并无疼痛症状）要减少嘌呤摄入——低嘌呤饮食。因为，肉类、鱼类、内脏、大豆制品等富含蛋白质的食物通常含有较多的嘌呤，所以被列为“要少吃或不吃”之列。那么，痛风患者的蛋白质如何来满足呢，最佳选择是鸡蛋和牛奶。
牛奶中不含有嘌呤。这是因为嘌呤实际上是核酸（属遗传物质，如DNA即脱氧核糖核酸）分子的组成部分（碱基对）。核酸是遗传物质，遗传物质一般存在于细胞核之中。牛奶是牛的***细胞分泌的体液，里面没有细胞结构，没有细胞核，也就没有遗传物质，没有核酸，故没有嘌呤。
牛血清白蛋白篇7
【关键词】 婴儿； 牛奶蛋白过敏性腹泻； 深度水解蛋白配方奶粉； ***
中***分类号 R725.7 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2016）27-0113-02
Effect Study of Depth Hydrolyzed Protein Formula Applied in Baby with Milk Protein Allergy Diarrhea/ZOU Su-juan，LI Wen-bin.//Chinese and Foreign Medical Research，2016，14（27）：113-114
【Abstract】 Objective：To investigate the effect of depth hydrolyzed protein infant formula applied in baby with milk protein allergy diarrhea.Method：From January 2013 to September 2015，50 cases of baby milk protein allergy diarrhea patients in our hospital were selected as the research objects，their clinical data were retrospectively analyzed.According to the method of random numbers they were divided into two groups，all patients avoided milk food，the control group received free amino acid milk powder（new kt） treatment，the research group was given depth hydrolyzed protein infant formula（new peptide）.The effect was compared between the two groups.Result：The total effective rate of the research group was 100%，higher than 76.0% of the control group，the difference was statistically significant（P
【Key words】 Infant； Milk protein allergy diarrhea； Depth hydrolyzed protein formula； Treatment
First-author’s address：Children’s Hospital of Okanagan Valley Area Maternity and Child Care Center in Quanzhou City，Quanzhou 362000，China
doi：10.14033/ki.cfmr.2016.27.059
婴儿牛奶蛋白过敏性腹泻属于婴幼儿常见疾病，主要因其胃肠道屏障及免***系统发育不全，直接接触牛奶蛋白后引发的胃肠道过敏症状，以腹泻、呕吐、便血及腹胀等为主要临床症状，严重情况下会引发过敏性休克或死亡等风险[1-4]。及时采取正确、有效的***方案***，对于改善患儿预后有着积极的意义。笔者所在医院借鉴相关研究将深度水解蛋白配方奶粉应用在婴儿牛奶蛋白过敏性腹泻中，取得了比较良好的效果，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2013年1月-2015年9月笔者所在医院接诊的婴儿牛奶蛋白过敏性腹泻患儿50例为研究对象。入选患儿均及时确诊，符合牛奶蛋白过敏性腹泻诊断标准，月龄2～6个月，主要为奶粉配方喂养，病程不超过2个月，且以大便稀水样或不消化样为主要症状，无黏液脓血，经大便镜检等显示无异常，无其他并发症[5]。按照随机数字表法将其分为两组，各25例，对照组：月龄2～6个月，平均（3.8±0.8）个月；男14例，女11例；病程2 d～2个月，平均（6.9±1.1）d。研究组：月龄2～6个月，平均（3.6±0.7）个月；男13例，女12例；病程1 d～2个月，平均（6.7±1.3）d。两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
两组患儿入院后确诊符合牛奶过敏所致腹泻，回避食物2～4周，尤其要回避牛奶食品，对照组予以游离氨基酸配方奶粉（纽康特），至少食用3～6个月或者食用至9～12个月龄。研究组停用普通奶粉，并予以深度水解蛋白配方奶粉（纽肽特）。其中患儿有母***混合喂养，则将母***喂养也一并停用，采取深度水解蛋白配方奶粉喂养时间为2周；2周后可尝试加用普通奶粉喂养，剂量控制在1/4普通奶粉+3/4深度水解蛋白配方奶粉，然后对患儿的大便性状进行观察，2～3 d，若正常则继续增加1/4普通奶粉（1/2普通奶粉+1/2深度水解蛋白配方奶粉），继续观察大便性状，2～3 d；反之，若大便异常则改回100%深度水解蛋白配方奶粉喂养，直到有所正常后才改为前述增加方案，直到最终患儿过渡为100%普通喂养为止。若为纯母***喂养的患儿则停母***，妈妈回避牛奶及牛奶制品2周，婴儿服用深度水解蛋白配方奶粉，2周后继续母***喂养，若再次发生腹泻，则停母***，改为深度水解蛋白配方奶粉喂养3～6个月。
1.3 观察指标
对两组患儿临床症状、腹泻次数、大便性状等进行观察，总结临床效果及随访半年复发率，并对比分析。
1.4 疗效评价标准
本研究疗效按照《腹泻病疗效判断的补充意见》中相关评价标准执行，显效：***5 d后患儿全身症状彻底消失；粪便性状与次数均恢复正常。有效：***5 d后全身症状显著缓解；粪便性状与次数明显好转。无效：全身症状未改善，亦或者是病情恶化[6]。总有效率=有效率+显效率。
1.5 统计学处理
将本次研究的相关数据录入EXCEL表格中，数据均经统计学软件SPSS 18.0进行处理，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，P
2 结果
2.1 两组临床效果比较
研究组***后显效19例、有效6例、无效0例，总有效率100%，对照组则分别为8、11、6例，总有效率为76.0%，两组总有效率比较差异有统计学意义（P
2.2 两组随访半年复发率比较
研究组随访半年无任何患儿复发，而对照组则有3例复发，复发率为12.0%。两组复发率比较差异有统计学意义（P
3 讨论
牛奶蛋白过敏属于比较常见的婴幼儿症状，近几年国内一些研究中显示0～3岁小儿发生牛奶蛋白过敏的概率约为0.83%～3.50%，高居食物过敏第二位。婴幼儿作为食物过敏公共健康问题高危人群，发生牛奶蛋白过敏后表现形式多样，且症状轻重不一，轻者有腹泻、腹痛、便血、呕吐等，而严重情况下则有休克、死亡等，严重威胁患儿的生长发育，需加强重视。牛奶中有多种可引发过敏的蛋白质，这些蛋白质可能属于过敏原而引发患儿发病，尤其是过敏性腹泻极为常见。婴儿在消化道黏膜、免***系统等方面发育不完善，极易受到致病过敏原的侵袭。结合本次研究与同类研究，可见其主要特点有：其一，本次研究接诊的患儿月龄均未超过6个月，而且大多数患儿为多次添加不同品牌配方奶粉喂养后发生超敏反应，以皮肤过敏反应为主，进而出现腹泻；其二，尽管一些患儿经血液变应原筛查后对牛奶蛋白未过敏，但其IgE不足100 IU/ml[7]。为此，在***前应对患儿有无病史进行详细询问，并了解与掌握他们牛奶喂养后出现症状的时间。笔者所在医院针对接诊的50例牛奶蛋白过敏性腹泻患儿进行回顾性分析，按照随机数字法分为两组，对照组回避食物+氨基酸配方奶粉***，研究组用深度水解蛋白配方奶粉***。两组总有效率比较差异有统计学意义（P
胃肠道作为小儿出生后最早接触食物蛋白的部位，也是蛋白过敏最早的器官之一，若发生牛奶蛋白过敏后，极易出现呕吐、腹泻、腹胀及便血等，进而有休克等，严重情况下导致患儿死亡。基于此，尽早发现相关症状，及时入院诊断十分关键。牛奶蛋白过敏性腹泻诊断需详细询问患儿病史，同时可实施皮肤点刺试验、牛奶蛋白特异性IgE、血清总IgE及激发试验等处理[8]。但是这些方式各有优劣，比如牛奶蛋白特异性IgE检测，虽然有很高的特异性，但其费用昂贵，一般医院难以普及；部分患儿胃肠道牛奶蛋白过敏为非IgE介导，为此血清总IgE检测阴性也无法否定其属于非IgE介导过敏；皮肤点刺试验尽管费用低廉，但会对患儿产生额外疼痛，结果也不确定。总之，目前尚无确切统一的有效诊断方案，为此大多数学者一致认为可采取综合诊断处理。
婴儿发生牛奶蛋白过敏性腹泻后，应及时回避牛奶及含有牛奶蛋白的食品，在未应用特殊药物***前，应及时回避原有配方奶、辅食及母***喂养等，可更换为氨基酸配方奶粉处理。当然，母***喂养属于解决这类过敏最为理想的方式，但是目前无法母***喂养的小儿较多，或者一些进入转奶期的小儿，无法一直予以母***喂养，此时需根据小儿过敏性疾病风险选取合适的低敏配方奶粉处理，比如深度水解蛋白配方奶粉、纯氨基酸配方奶粉等，尽管后者可完全回避过敏原，但其价格昂贵且口感不佳，无法逐步耐受，不能作为初级预防处理。深度水解蛋白配方奶粉经加热、超滤及水解等程序加工处理而成，使得蛋白质成分抗原性明显降低，加上其营养价值等同于普通奶粉，成为近几年***牛奶蛋白过敏性腹泻最为理想的配方奶粉。通过本次研究及同类研究，证实婴儿牛奶蛋白过敏性腹泻采取深度水解蛋白配方奶粉***，不仅能缓解症状，且能支持患儿的正常发育[9-10]。
综上所述，深度水解蛋白配方奶粉***婴儿牛奶蛋白过敏性腹泻可取得不错效果，可有效改善患儿症状，预防疾病复发，值得借鉴。
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牛血清白蛋白篇8
在屠宰前，使用注射器对全部试验肉牛进行尾静脉采血，置于10mL不加抗凝剂的离心管中，用记号笔在离心管上记录牛耳号，迅速置于放有冰袋的采样箱中。利用高速离心机以3000r／min离心10min，分离血清，将血清置于－20℃冰箱冷冻保存待测。使用雷杜RT－200CPlus全自动生化分析仪测定结石组血清的钾（K）、钠（Na）、氯（Cl）、钙（Ca）、磷（P）和镁（Mg）。1．2．4结石的化学成分分析取屠宰后肾结石样品，将结石样品喷铂金后，在EDAX－Genesis2000型X－射线能谱仪上分析其各元素的含量。1．2．5数据处理所有的数据使用Excel2007进行数据统计和分析，结果用平均值±标准差的形式表示。
在40头肉牛的屠宰过程中，共发现23头患有肾结石的肉牛，发病率为57．5％。牛肾为典型的多肾，经剖检可知，结石大多聚集在个别肾内部的肾盂处。肾结石大部分呈现***白色或淡黄色，其中大多数呈细小的砂粒状结石。有结石的肾主要集中在牛肾的两个尖端处，而中间部分的肾几乎不存在结石。每头牛每天采食10kg的精料和2kg的稻草，计算出每日的干物质采食量（DMI）、粗蛋白质（CP）、钙（Ca）和磷（P）的摄入量，并且和肉牛饲养标准进行比较。该肉牛场的干物质采食量（DMI）略高于营养标准。每日饲料蛋白质的摄入量偏高，钙和磷的摄入量过高，且饲料的钙磷比严重失衡，磷的含量比钙高。血液生化指标的测定使用雷杜RT－200CPlus全自动生化分析仪测定结石组的血清生化指标，并且将结果与正常肉牛的参考值（王书林，2001）进行对比。结石组的血清钙（Ca）明显下降，而血清磷（P）和血清镁（Mg）明显上升，其他离子指标都处于正常的参数范围内。结合表2可知，高磷低钙饲料和血液生化指标的高磷低钙之间存在着相关性。2．4结石能谱分析结果使用X－射线能谱仪测定肾结石的化学成分结果结石的主要化学成分为磷和镁，同时还含有少量的氮和钾。从化学成分分析，初步判断该结石的主要成分是磷酸镁铵和磷酸镁钾的混合物。
长期以来，精粗比过高一直被普遍认为是肾结石的重要诱因之一。Munakata等（1974）研究结果发现，当精料的饲喂量达到阉牛体重的1．5％时，尿液中就可以检测到尿沉渣晶体；而当精料的饲喂量占体重的2．5％时，饲喂2个月以上尿中就可以检测到大量尿沉渣，并开始形成结石。该牛场体重为500kg左右的长期育肥阉牛每日精料采食量为10kg，占体重的2％。在该精料比例下，可以缓慢沉积尿沉渣；当尿液中的尿沉渣数量累积到某个阈值时，就会形成结石。此外，育肥时间跟结石的形成也可能有很大关系，该牛场因生产高档牛肉而采取长期育肥方式，有利于尿沉渣的累积，也有可能是结石产生的促进因素。人们普遍认为尿石症是家畜体内矿物质代谢紊乱的结果，其中饲料的钙磷比是学者研究的热点。饲料中合理的钙磷比在1．5～2．1之间，这时的钙和磷均容易被动物体吸收。该肉牛场饲料的钙磷比仅为0．94，远远低于上述比例，出现了磷含量高于钙的现象。据报道，当饲喂大量玉米、麸皮等饲料，钙磷比在1左右时，就会在尿道内形成磷酸镁铵结石。同时，饲料的高磷低钙，会导致进入血液中无机磷的增加，导致血清和尿液的高磷，提高肾结石的发病率（张高轩等，1989）。
牛血清白蛋白篇9
[关键词] 牵牛子酒提取物；Lewis 肺癌；细胞间连接通讯；水通道蛋白1
[收稿日期] 2013-07-08
[基金项目] 国家自然科学基金项目（81173094）；河南省科技厅重点攻关项目（112101310308）；河南大学省部共建项目（SBGJ090704）；河南省高校青年骨干教师项目（2010GGJS-025）
[通信作者] *杜钢***，教授，Tel：15037883506，E-mail：
转移是恶性肿瘤生物学行为最本质的特征，也是癌症患者死亡的主要原因。在癌转移的***上，西医目前主要采用手术切除、放疗、化疗等措施，虽然在一定程度上有治标的效果，远期疗效并不确切，且其毒副作用大，病人的承受能力有限，很多患者生存质量反较***前下降[1]。我国的传统医学认为痰浊内阻是肿瘤形成的关键因素之一，而“痰毒流注”是恶性肿瘤转移的病因和重要机制[2]。很多学者从细胞间质及细胞黏附因子等肿瘤发生和转移的内环境因素对痰症理论进行了研究，证实了肿瘤细胞和间质细胞之间的津液代谢失调和痰症之间的相关性[3]，很多临床实践也证实了肿瘤从痰论治的有效性[4]。因此，根据中医“病有主药”的原则筛选有特色的化痰药物成为中药***肿瘤的关键。
牵牛子是旋花科植物裂叶牵牛Pharbitis nil （L） Choisy或圆叶牵牛P. purpurea （L） Voigt的干燥成熟种子，性寒味苦，有泻下通便、消痰涤饮，杀虫攻积等作用[5]。牵牛子的消痰涤饮作用符合中医肿瘤从痰论治原则，杀虫攻积有可能直接抑制肿瘤生长，而泻下通便可以引邪外出。综合分析，牵牛子有可能具有多方面抗肿瘤、抗转移作用，符合特色化痰药物抗肿瘤的候选条件。结合酒有温通经脉、引行药势之功，本研究观察了牵牛子酒提取物的抗肿瘤抗转移作用，并探讨了其可能的机制。
1 材料
1.1 动物 C57BL/6小鼠，雄性，体重18～22 g，北京维通利华试验动物有限公司提供，实验动物合格证号SCXK（京）20090002。饲养于河南大学实验动物中心，自由饮食及饮水。
1.2 中药制备 牵牛子购自开封市天济堂药店，经河南大学药学院丛悦教授鉴定为旋花科植物牵牛P. nil的种子。牵牛子酒提取物由本校药物研究所制剂室制备：牵牛子粉碎过40目筛，加入10倍量体积分数52%的泸州老窖白酒60 ℃超声提取40 min，抽滤，提取2次，合并2次抽滤液，减压浓缩致干，用时加水溶为所需浓度供动物实验用，水溶液无菌过滤后供细胞实验用。
1.3 试剂与仪器 DMEM培养基（美国Gibco-BRL）；MTT（美国Sigma公司）； 标准胎牛血清（天津市源洋生物制品科技有限责任公司）；荧光黄（LY）（美国Sigma公司）；Cx43和AQP1兔抗鼠多克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）；羊抗兔IgG-HRP（武汉博士德生物工程有限公司）；HDL洁净台（北京东联哈尔仪器制造有限公司）；UV-2000型紫外-可见光分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）； LGR16-W型高速冷冻离心机（北京京立离心机有限公司）；800型酶标仪（Bio-Tek）；DYY-7C电泳仪；XDS-500D型倒置荧光显微镜（上海蔡康光学仪器有限公司）。
2 方法
2.1 细胞增殖检测 取对数生长期的LLC细胞，用0.25%胰酶消化，调整细胞数5×104个/mL，以每孔100 μL接种于96孔板中。细胞于含10% 胎牛血清的DMEM培养基中5%CO2，37 ℃培养24 h后添加含不同浓度牵牛子酒提取物（终浓度以牵牛子计为0，7.5，15，30，60，120 mg·L-1 ）的同一培养基，每孔100 μL，每组6个复孔。48 h后，除去培养基，加含MTT 0.5 g·L-1的PBS 每孔100 μL，继续培养4 h后除去孔内的液体，加入DMSO每孔100 μL，震荡10 min，在酶标仪上570 nm处测吸光度A，抑制率=（A不加药组-A加药组）/A不加药物组×100%。
2.2 细胞迁移实验 取对数生长期的LLC细胞，用0.25%胰酶消化，调整细胞数3×105个/mL，以每孔2 mL接于6孔板中，细胞于含10%胎牛血清的DMEM培养基中5%CO2，37 ℃培养，待细胞长满后，用10 μL微量移液器***头在其中划痕，用培养基冲洗后添加含不同质量浓度牵牛子酒提取物（0，7.5，15 mg·L-1）的低血清DMEM培养基（含胎牛血清2%）每孔2 mL， 每组设3个平行孔， 分别于划痕后0，24 h拍照，利用显微镜拍照程序测量划痕宽度，每条划痕测量3次，取其平均值。细胞迁移距离=划痕后初始宽度-划痕后24 h宽度。
2.3 细胞自噬检测 取对数生长期LLC细胞，用0.25%胰酶消化，调整细胞数2×105个/mL，以每孔2 mL接于6孔板中，细胞于含10%胎牛血清的DMEM培养基中5%CO2，37 ℃培养24 h后去除培养基，添加含不同质量浓度牵牛子酒提取物（0，7.5，15 mg·L-1）的低血清DMEM培养基（含胎牛血清1%）每孔2 mL，每组设3个平行孔。24 h后，除去培养基，PBS洗细胞3次，加入6 mg·L-1的吖啶橙（AO）染液每孔400 μL，5%CO2，37 ℃培养箱内染色20 min，吸出AO，PBS冲洗细胞3 次后，在荧光显微镜下观察并拍照。
2.4 细胞间连接通讯 取对数生长期的LLC细胞，以2×105个/mL接种于6孔板，每孔2 mL，细胞于含10%胎牛血清的DMEM培养基中5%CO2，37 ℃培养24 h后，添加含不同浓度牵牛子酒提取物（0，7.5，15 mg·L-1）的同一培养基每孔2 mL， 每组设3个复孔，继续培养48 h。以预温至37 ℃的PBS冲洗细胞3 次后，加入预温的0.05%荧光黄（LY）PBS染料每孔2 mL，用锋利的手术刀片轻划细胞层，标记3 min，吸出LY，PBS冲洗细胞2次后，显微镜下观察荧光传递情况。每孔平行划痕2条，每孔随机观察10个点，根据荧光在细胞中的传输层数计分：0分，荧光局限于划痕边缘的单层细胞；1分，2～3层细胞有荧光；2分，3～4 层细胞有荧光；3分，5 层以上细胞有荧光。
2.5 Western blotting检测LLC细胞AQP1蛋白表达 取对数生长期的LLC细胞，以2×105个/mL接种于6孔板，每孔2 mL，细胞于含10%胎牛血清的DMEM培养基中5%CO2，37 ℃培养24 h后，添加含不同质量浓度牵牛子酒提取物（0，7.5，15 mg·L-1）的同一培养基每孔2 mL，每组设3个复孔，继续培养48 h。PBS洗3次，每组加1 mL裂解液（含10 μL PMSF），冰上裂解30 min。4 ℃ 12 000×g离心15 min，取上清加入上样缓冲液，100 ℃加热10 min使蛋白变性。每孔上样20 μg总蛋白，SDS-PAGE凝胶电泳后转膜至PVDF膜，5%脱脂奶粉室温封闭2 h，抗兔AQP1 （1∶200） 4 ℃过夜，TBST洗涤PVDF膜5 min×4次，二抗（1∶1 000）室温孵育2 h，TBST洗涤5 min×4次，ECL系统显影。β-actin作为内参，Image J软件采集条带灰度值，取目的条带吸光度与内参条带比值作为相对表达量。
2.6 Lewis肺癌皮下移植模型 取生长良好的Lewis肺癌荷瘤小鼠2只处死，剥离瘤组织，用冷的无菌生理盐水研磨制备瘤细胞悬液，调细胞数5×106个/mL，以每只小鼠0.2 mL接种于C57BL/6小鼠前肢右腋皮下。将80只肿瘤接种小鼠随即分成4组，每组20只，分别为：模型组、阿霉素组、牵牛子酒提取物高、低剂量组。肿瘤接种后次日给药，对照组灌胃生理盐水每10 g体重0.2 mL，每日2次；牵牛子酒提取物高、低剂量组分别灌胃牵牛酒提取物 1 000，300 mg·kg-1体重（以牵牛子计），每日2次；阿霉素组尾静脉注射给药5 mg·kg-1，每周1次。***时间为3周，***期间每日监测小鼠体重1 次，第2周开始每周用数显游标卡尺测肿瘤直径2次。第22天，每组随机选取小鼠10只，采血分离血清，电化学发光法检测荷瘤小鼠血清癌胚抗原（CEA）和β2微球蛋白（β2-MG），并处死小鼠，剥离肿瘤，称重。其余每组10只小鼠观察生存期。肿瘤体积（mm3）=肿瘤长度×肿瘤宽度×肿瘤宽度×1/2；肿瘤抑瘤率=（1-***组平均瘤重T/对照组平均瘤重）×100%。
2.7 Lewis肺癌实验性肺转移模型 取生长良好的Lewis肺癌荷瘤小鼠1只处死，剥离瘤组织，用冷的无菌生理盐水研磨制备瘤细胞悬液，0.01 mol·L-1 Tris-0.83%NH4Cl溶液裂解红细胞后调细胞数5×105个/mL，以每只0.2 mL iv建立实验性肺癌转移模型。将80只模型小鼠随即分成4组，每组20只，分别为：模型组、阿霉素组、牵牛子酒提取物高、低剂量组。给药***方式同皮下移植模型。第28天，每组随机处死小鼠10只，取出肺脏，检测肺转移结节数，并取左肺上叶用免***组化染色检测水通道蛋白1（AQP1）和缝隙连接蛋白Cx43表达。其余每组10只小鼠观察60 d内的小鼠存活。
2.8 免***组化检测水通道蛋白1（AQP1）和通讯连接蛋白Cx43 将贴附于防脱载玻片上的肺组织石蜡切片经常规脱蜡和水化后于3%H2O2溶液中室温孵育10 min消除内源性过氧化物酶的活性；将切片放入柠檬酸缓冲液微波煮沸5 min×2次修复抗原；5%BSA室温封闭20 min，倾去多余液体，滴加1∶50稀释的AQP1或Cx43兔抗鼠多克隆抗体，4 ℃过夜；PBS洗3次后生物素化羊抗兔IgG（1∶100）37 ℃孵育20 min；PBS冲洗3次后滴加SABC，37 ℃孵育20 min；PBS冲洗3次后DAB显色剂显色，苏木素轻度核复染， 封片后在光镜下观察。采用半定量方法表达结果，切片的染色强度记分：0分，染色为阴性；1分，染色为弱阳性（浅棕黄色）；2分，染色为阳性（棕黄色）；3分，染色为强阳性（深棕黄色）。
2.9 统计方法 采用SPSS 16.0软件包分析，计量实验数据以±s表示，组间比较采用t检验；生存时间采用Kaplan-Meier存活分析，P
3 结果
3.1 牵牛子酒提取物对体外培养Lewis肺癌细胞的影响 牵牛子酒提取物对体外培养的Lewis肺癌细胞呈剂量依赖性生长抑制，作用48 h IC50为37.21 mg·L-1（表1）。牵牛子酒提取物明显阻止细胞迁移（表1），降低细胞AQP1蛋白（表1），促进细胞间连接通讯（GJIC）（表1，***1），减少癌细胞低血清自噬（***2）。
表1 牵牛子酒提取物对体外培养Lewis肺癌细胞的影响（±s，n=6）
Table 1 Effect of alcohol extract from Pharbitidis Semen on Lewis lung cancer cells in vitro（±s，n=6）
注：与未处理的对照组比较1）P
***1 牵牛子酒提取物对小鼠Lewis肺癌细胞GJIC的影响
Fig.1 Effect of alcohol extract from Pharbitidis Semen on GJIC of Lewis lung cancer in vitro
3.2 牵牛子酒提取物对Lewis肺癌皮下移植肿瘤的影响 与未***的模型小鼠比较，牵牛子酒提取物呈剂量依赖性减缓肿瘤生长（表2，***3），***结束后阿霉素、牵牛子酒提取物高剂量和低剂量对Lewis肺癌皮下移植肿瘤的抑制率分别为50.5%，43.5%，38.2%。同时，牵牛子酒提取物也降低荷瘤小鼠血清CEA和β2-MG水平（表2），延长荷瘤小鼠存活时间，模型组、阿霉素组、牵牛子酒提取
***2 牵牛子酒提取物对小鼠Lewis肺癌细胞低血清自噬的影响（×200）
Fig.2 Effect of alcohol extract from Pharbitidis Semen on cell autophagy of Lewis lung cancer under low serum condition in vitro（×200）
物高剂量和低剂量组的小鼠平均存活时间分别为43.4，44.0，52.9，50.7 d（***4）。
3.3 牵牛子酒提取物对Lewis肺癌实验性肺癌转移的影响 与未***的模型小鼠比较，牵牛子酒提取物呈剂量依赖性阻止肿瘤转移（表3），同时，牵牛子酒提取物也能增强荷瘤肺组织间隙连接蛋白Cx43的免***组化染色深度，减弱水通道蛋白AQP1的阳性染色密度（表3，***5）。以60 d为观察期（存活时间超过60 d的按60 d计），Kaplap-Meier分析结果显示，牵牛子酒提取物能延长肿瘤肺转移小鼠中位存活时间（表3，***6）。
表2 牵牛子酒提取物对Lewis肺癌皮下移植肿瘤的影响（±s，n=10）
Table 2 Effect of alcohol extract from Pharbitidis Semen on subcutaneous allograft of Lewis lung cancer in vivo （±s，n=10）
***3 牵牛子酒提取物对Lewis肺癌皮下移植肿瘤生长的影响（n=10）
Fig.3 Effect of alcohol extract from Pharbitidis Semen on tumor growth in mice with subcutaneous allograft of Lewis lung cancer（n=10）
***4 牵牛子酒提取物对Lewis肺癌小鼠生存时间的影响（n=10）
Fig.4 Effect of alcohol extract from Pharbitidis Semen on life span in mice with subcutaneous allograft of Lewis lung cancer（n=10）
表3 牵牛子酒提取物对Lewis肺癌实验性肺癌转移的影响（±s，n=10）
Table 3 Effect of alcohol extract from Pharbitidis Semen on pulmonary metastasis of Lewis lung cancer in vivo （±s，n=10）
4 讨论
细胞间连接通讯（gap junction intercellular communication，GJIC） 是目前发现的相邻细胞间最重要的直接信息交流形式，对细胞的新陈代谢、内环境稳
***5 牵牛子酒提取物对Lewis肺癌肺转移小鼠肺组织AQP1和Cx43的影响（n=10）
Fig.5 Effect of alcohol extract from Pharbitidis Semen on AQP1 and Cx43 staining of lung immunohistochemistry in mice with pulmonary metastasis of Lewis lung cancer（n=10）
***6 牵牛子酒提取物对Lewis肺癌实验性肺转移小鼠生存时间的影响（n=10）
Fig.6 Effect of alcohol extract from Pharbitidis Semen on life span in mice with pulmonary metastasis of Lewis lung cancer（n=10）
定、增殖和分化等生理过程起着重要的调控作用[6]。电镜、生化、免***学方法、荧光染料传输及同位素示踪法等肿瘤检测结果表明多数肿瘤细胞之间无GJIC功能，其缝隙连接少或无，而邻近的正常组织或良性肿瘤的细胞之间缝隙连接正常[7]。近年来，通过对各种肿瘤的研究证实，高转移能力细胞系间的缝隙连接通讯功能明显低于低转移能力细胞系间的缝隙连接功能，肿瘤细胞间及其与周围正常细胞间常见缝隙连接的异常或缺失，是肿瘤转移的一个重要原因，而GJIC重建则有明显的肿瘤抑制作用[8]。Connexin蛋白表达的异常直接影响到间隙连接通讯的功能，进而影响到细胞的生长、分化、增殖、代谢和凋亡，以及细胞结构稳态的维持，其中Connexin43蛋白是Connexin家族中的一种主要蛋白，其表达减少或缺失与多种肿瘤的发生、发展及转移相关[9]。在本研究中，牵牛子酒提取物对体外培养的Lewis肺癌细胞呈剂量依赖性促进细胞间连接通讯，阻止细胞生长和迁移。牵牛子酒提取物在荷瘤小鼠中能增强荷瘤肺组织间隙连接蛋白Cx43的免***组化染色深度，呈剂量依赖性阻止肿瘤生长和转移。由此可推断，小鼠Lewis肺癌GJIC建立的减少及Cx43的表达降低可能是肿瘤生长和转移的机制之一，牵牛子酒提取物通过对癌细胞GJIC及Cx43表达的调控可能是其***肿瘤、抑制肿瘤转移的一种途径。
水通道蛋白是一个特异性跨膜转运水的蛋白质家族，其中水通道蛋白AQP1在体内广泛分布，能明显提高细胞膜对水的通透性，维持细胞内外水的平衡[10]。姜勇等通过RNA干扰技术调控AQP1蛋白在HT20细胞系中的表达，直接证明了水通道蛋白介导的细胞膜水通透性在结肠癌细胞迁移起着重要作用，并有可能与结肠癌的侵袭和转移相关[11]。另有研究表明，与正常组织相比，AQP1蛋白在肿瘤组织中表达增高，与肿瘤的发生和发展密切相关，也是肿瘤侵袭力强的可能机制之一[12]。在本研究中，牵牛子酒提取物对体外培养的Lewis肺癌细胞能降低细胞AQP1蛋白，对实验性肺癌转移小鼠也能减弱荷瘤肺组织AQP1的阳性染色密度，延长肿瘤肺转移小鼠存活时间。由此可推断，小鼠Lewis肺癌AQP1高表达可能是肿瘤生长和转移的机制之一，牵牛子酒提取物通过对癌细胞AQP1表达的调控可能是其***肿瘤、抑制肿瘤转移的另一种途径。
自噬在维持多细胞生物的细胞内稳态方面起到重要作用。不适宜的微环境会提高肿瘤细胞的自噬水平，为癌细胞提供丰富的营养，有利于肿瘤休眠细胞的生存，促进肿瘤细胞对低氧的适应，提高肿瘤细胞抗失巢凋亡能力，增加肿瘤细胞的转移[13]。另外，近来发现肿瘤标志物不仅可用于肿瘤的诊断，也可评估肿瘤疗效和预后[14]。在本研究中，牵牛子酒提取物对体外培养的Lewis肺癌细胞能减少癌细胞低血清自噬，对荷瘤小鼠也能降低血清肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）和β2-MG水平，进一步证实了牵牛子酒提取物***肿瘤、抑制肿瘤转移的作用。
综上所述，牵牛子酒提取物的抗肿瘤、抗转移作用与牵牛子消痰涤饮、杀虫攻积的性能相吻合，也体现了肿瘤浸润转移的痰易行性（随气血无处不到）。从消痰涤饮、杀虫攻积中药中寻找有特色的抗肿瘤药物可以更全面的了解肿瘤的生物学特性，为寻找肿瘤***新靶点奠定基础，也是阐明中医肿瘤“痰”本质的新切入点。
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Study on anti-tumor and anti-metastasis mechanism of alcohol extracts
from Pharbitidis Semen against Lewis lung cancer
LI Jia-huan， DU Gang-jun*， LIU Wei-jie， LIU Ying-hui， ZHAO Bei， LI Hong
（Institute of Pharmacy， Pharmaceutical College of Henan University， Kaifeng 475001， China）
[Abstract] Objective： To observe the effect of alcohol extracts from Pharbitidis Semen on the proliferation and metastasis of Lewis lung cancer， and study its anti-tumor mechanism. Method： In vitro， MTT assay and scratch assay were adopted to detect the effect of alcohol extracts from Pharbitidis Semen on the proliferation and metastasis of Lewis lung cancer cells. The cell autophagy was detected by the acridine orange staining. The gap-junction intercellular communication （GJIC） was investigated by the fluorescent yellow transfer. The expression of aquaporin 1 （AQP1） was analyzed by the Western blotting. In vivo， the subcutaneous implant model and the experimental pulmonary metastasis model of Lewis lung cancer in mice were established to evaluate the anti-tumor and anti-metastasis effects of alcohol extract from Pharbitidis Semen. The serum carcinoembryonic antigen （CEA） and β2 microglobulin （β2-MG） of mice bearing lewis lung cancer were detected by the electrochemiluminesence immunoassay. The expressions of lung AQP1 and Connexin 43 （Cx43） were examined by the immunohistochemical method. Result： In vitro， alcohol extracts from Pharbitidis Semen inhibited the cell proliferation in a dose-dependent matter， significantly prevented the cell migration， down-regulated AQP1 proteins of cells， promoted GJIC， and decreased the serum-free autophagy of tumor cells. In vivo， compared with untreated model mice， alcohol extracts from Pharbitidis Semen inhibited the tumor growth in a dose-dependent matter， prevented the tumor metastasis and prolonged the life span of mice bearing Lewis lung cancer， while decreasing serum CEA and β2-MG of mice bearing Lewis lung cancer， enhancing the immumohistochemical staining intensity of Cx43 and weakening aquaporins AQP1 positive intensity. Conclusion： Alcohol extracts from Pharbitidis Semen could prevent the proliferation and metastasis in Lewis lung cancer cells. Its mechanism may be related to the promotion of GJIC and the down-regulation of AQP1.
牛血清白蛋白篇10
一、牛奶抗衰老延年益寿
明代医药学家李时珍在《服***歌》中写道:“清晨能饮一升余,返老还童天地久。”总结出了牛奶的保健功能。现代医学研究证实,牛奶含有一种生物活性物质,即“SOD”,它能有效地清除人体内的“自由基”等有害物质(即所谓体内垃圾),从而增强人体免***功能,促进新陈代谢,延缓衰老。
据美国《营养学杂志》介绍,人们完全可以把牛奶看成是低脂、低胆固醇食品,并指出,牛奶富含的蛋白质在人体的消化吸收率达97%,也是维持老年人正常脑体活动的必需物质。所富含的钙和磷,能有效防治老年人极易出现的骨质疏松症,其中磷元素还有助于延缓脑细胞衰老而增强记忆力。所富含的维生素A,对老年人常见的眼角质软化、干燥性眼炎及夜盲症等均有辅助***作用。牛奶中所富含的维生素类物质,还能减少皱纹、滋润皮肤和防止老年瘙痒症。
二、牛奶防癌抗癌
牛奶中的β-酪蛋白,具有较强的抗癌变功能,牛奶在胃内形成***酪,而***酪中的共轭亚油酸,有软化血管,降低血清胆固醇和抗胃癌的作用。
德国慕尼黑大学医学研究所日前发表的一份报告指出,常饮牛奶有助于防止***癌。报告说,牛奶的饮用量与***癌发病率明显成反比。每天喝0.5千克牛奶的妇女中没有发现***癌患者,而在88名患***癌的妇女中调查发现,她们几乎没有喝牛奶的习惯。说明牛奶所含的***糖和钙质对抵制***癌有特别的作用。
澳大利亚学者研究发现,牛奶中的***脂含有多种抗癌化合物。他们在动物实验中获知,***脂中含有能阻止各种肿瘤生长的结合亚油酸,这是一种须从食物中补充的必需脂肪酸。结合亚油酸能抑制人体内的恶性黑色素瘤、直肠癌、结肠癌、肺癌、***癌等癌细胞株的生长,***脂是结合亚油酸含量最丰富的天然食品。所以,经常喝牛奶可防癌抗癌,有利于健康。
三、牛奶可以降血压
血压与钙的摄入量密切相关。牛奶含有丰富的钙质,如果每天喝两包软包装鲜奶,就可摄入500毫克的钙。常喝牛奶,摄入的钙质增多,高血压发病率就可降低,起到降血压的效果。
专家们通过临床观察,发现牛奶中的矿物质元素钾、钙、锌和蛋白质、蛋氨酸等,都具有稳定人体情绪和降低血压的作用。同时,牛奶中所特有的***清酸成分,还具有降低血液中胆固醇含量、提高蛋白质水平、降低心肌张力和保护心脏的功能。高血压、冠心病及胆固醇偏高的心血管疾病患者,宜经常食用牛奶,它可起到辅助***作用。
四、牛奶对于胃溃疡、十二指肠溃疡和萎缩性胃炎患者很有益处
牛奶中的蛋白质加热后会发生变性,这些变性的蛋白质及奶中的磷脂类物质会紧紧地吸附在胃壁上,对胃黏膜起到保护作用,并刺激胃黏膜下壁细胞分泌,使已受伤的胃黏膜得到修复。同时奶有成分,即***糖分解代谢所产生的***酸及葡醛酸等还能增加胃内酸度,抑制有害菌分解蛋白质产生毒素,使胃免遭毒素的侵蚀,从而利于胃炎的恢复和***。
五、牛奶预防胆结石
每天临睡前喝一杯牛奶,可起到排空胆囊、避免胆汁浓缩、阻止胆囊内形成小结石的功能。但应注意,如果第二天不定时吃早餐,那么前一天晚上所喝的牛奶就会失去作用。
六、牛奶催眠
牛奶中的色氨酸,对人体有安神促眠的功能,尤其对体质虚弱经常失眠的人,效果明显。每天晚上临睡前喝一杯牛奶,半小时后便可入睡。