学文网病毒样本篇1
1贵州省不同烟区杂草携带病毒的检测结果
贵州省10个县(市)27个乡镇83块烟田853份杂草样本的病毒血清学(ELISA)检测结果见表1。可以看出在853份杂草样本中，TMV、CMV、PVY的带毒率分别为12．31%、6．33%、2．34%，以TMV最高。27个乡镇的烟田杂草中均检出带有TMV，有22个乡镇的烟田杂草带有CMV，有14个乡镇的烟田杂草带有PVY，表明TMV、CMV、PVY在田间不仅侵染烟草，同时还侵染烟田杂草。
2贵州省烟区不同种类杂草携带病毒的检测结果
贵州省烟区不同种类杂草携带病毒的检测结果见表2，可以看出采集的853份杂草样本隶属30科70种，ELISA检测带有TMV、CMV、PVY的杂草有18科44种，其中腺梗豨莶、小飞蓬、藜、马唐、尼泊尔蓼、桃叶蓼等杂草的带毒率分别为44.12%、42.86%、38．46%、36．51%、36．36%、35.48%，以腺梗豨莶、小飞蓬的带毒率较高。853份杂草样本中有179个杂草样本携带病毒，占总样本数的20.98%。179个带毒杂草样本中有105份杂草样本携带TMV，占总样本数的12．31%，占带毒杂草样本的58．66%;有54份杂草样本携带CMV，占总样本数的6．33%，占带毒杂草样本的30.17%;有20份杂草样本携带PVY，占总样本数的2.34%，占带毒杂草样本的11．17%。另外674个样品未检测出带有TMV、CMV、PVY。
3TMV、CMV、PVY复合侵染烟田杂草的检测结果
TMV、CMV、PVY复合侵染烟田杂草的检测结果见表3，可以看出在122个阳性样本中，27个杂草样本检测到2种以上病毒的复合侵染，占22．13%。其中TMV+CMV复合侵染马唐、狗尾草、雀稗、双穗雀稗、小飞蓬、黄花蒿、野艾蒿、苦荬菜、胜红蓟、桃叶蓼、尼泊尔廖、藜、蔊菜，有16个样本，占13．11%;TMV+PVY复合侵染马唐、腺梗豨莶、桃叶蓼、蔊菜，有5个样本，占4．10%;CMV+PVY复合侵染小飞蓬、野茼蒿、桃叶蓼、尼泊尔廖蓼，有4个样本，占3．28%;TMV+CMV+PVY复合侵染马唐和野茼蒿，有2个样本，占1．64%;23份马唐阳性样本中，有2份样品受TMV+CMV的复合侵染，2份样品受TMV+PVY的复合侵染，1份样品受TMV+CMV+PVY的复合侵染;11份桃叶蓼阳性样本中，1份样品受TMV+CMV的复合侵染，1份样品受TMV+PVY的复合侵染，1份样品受CMV+PVY的复合侵染。可见在所检测的杂草阳性样本中，马唐、桃叶蓼受病毒复合侵染的概率高于其他杂草。
4结论与讨论
通过对贵州省烟田853份杂草样本的病毒血清学(ELISA)检测结果进行分析，发现烟田杂草TMV、CMV、PVY的带毒率分别为12．31%、6．33%、2.34%，以TMV最高，表明TMV、CMV、PVY在田间不仅侵染烟草，同时还侵染烟田杂草。所采集的853份杂草样本隶属30科70种，有179个杂草样本携带烟草病毒，占总样本数的20.98%，18科44种杂草携带TMV、CMV、PVY，以腺梗豨莶、小飞蓬、藜、马唐、尼泊尔蓼、桃叶蓼等杂草的带毒率较高。在853份杂草样本中，27个杂草样本检测到2种以上病毒的复合侵染，占22．13%，TMV+CMV复合侵染马唐、狗尾草、雀稗、双穗雀稗、小飞蓬、黄花蒿、野艾蒿、苦荬菜、胜红蓟、桃叶蓼、尼泊尔蓼、藜，均高于其他复合侵染病毒组合，马唐、桃叶蓼受病毒复合侵染的样品数高于其他杂草。研究结果得出，烟田发生的很多杂草是烟草病毒病的中间寄主。因此在烟草病毒病的防治工作中，不仅要针对烟草植株进行防治，同时还要施用抗病毒制剂以防治烟田杂草，才能有效控制烟草病毒病的危害，这在烟草病毒病的防治中是前人仍未涉及到的。笔者认为，防控烟田杂草不仅可以减轻杂草对烟草植株的危害，同时还能减轻田间病毒病的发生和危害。但是在田间控草的情况下，病毒病的减轻程度是怎样的还有待进一步研究。
作者：何永福 王楠 叶照春 陆德清 王莉爽 吴石平 单位：贵州省植物保护研究所
病毒样本篇2
摘要：目的 对1起由诺如病毒引起的学校聚集性急性胃肠炎***情进行实验室调查分析。方法 流行病学调查与实验室检测相结合，采集病例肛拭、粪便、食品、调味品、环境涂抹样、水样共40份样本，进行RT-PCR核酸检测及常规细菌学检测。结果 6名学生、1名保健教师、3名食堂厨师的肛拭样和1个粪便样、1个食品中检出诺如病毒核酸阳性。结论 RT-PCR检测技术能快速有效的检出肛拭、粪便、食物中的诺如病毒，从而为***情的病因诊断提供科学依据。
关键词：诺如病毒；PCR；食源性疾病；检测技术
Abstract：Objective A laboratory investigation and analysis of school outbreaks of acute gastroenteritis caused by Norovirus was performed. Methods The method combined epidemiological investigation with laboratory testing was employed. A total of 40 samples including anal swabs and feces of patients； food； condiments； smear samples of environment samples ； water samples were collected and utilized for RT-PCR detection and routine bacteriological testing. Results Norovirus nucleic acid were detected positive in anal swabs of six students， a health care teacher， three chefs and a feces sample， a food. Conclusion Norovirus in anal swab， feces and food can be detected quickly and effectively by RT-PCR.
Key words：Norovirus；PCR；Foodborne diseases；Detection technology
近年来，诺如病毒引起的急性胃肠炎暴发时有发生。诺如病毒可通过食物、水及人与人接触而使人感染发病，若在学校及幼儿园等集体单位发生，则易引起群体性胃肠炎暴发。诺如病毒感染性腹泻以起病急、传播快、暴发多为特征，因该病的症状及其多在冬季流行率上升，故被称为"胃肠道流感"或"冬季呕吐病"[1]。本文针对2015年3月成都市成华区某小学发生的一起诺如病毒引起的聚集性急性胃肠炎，将相关实验室病原检测情况及技术探讨报告如下：
1 资料与方法
1.1临床信息 学生聚集性病例的主要症状为呕吐、腹泻、腹痛、恶心，部分病例的血常规检测结果显示白细胞总数、中性粒细胞率增高。
1.2流行病学及卫生学调查 患者均为在校学生及教师，有在校共同进餐史，学校提供公用直饮水及生活用水。
1.3 样本采集及其来源 根据流行病学信息，准备的采样物资包括病毒采样管（北京友康）、自配灭菌1% NaCl肉汤、灭菌盐水和肠道致病菌直划平板（Mac、HE、TCBS）。采集病例肛拭8份、粪便样1份、学校厨师肛拭8份、供餐食品留样5份、调味品4份、环境涂抹样16份及水样2份（见表1）。
1.4实验室检测 对采集的样本进行病毒学检测和食物中毒常规致病菌检测。用RT-PCR法检测诺如病毒和轮状病毒核酸；采用RT-PCR和细菌培养法检测食物中毒常规致病菌：沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌、致泻大肠埃希氏菌。
1.4.1 病毒检测样本处理 肛拭和粪便样本无需前处理；对于食品样本，采用无菌操作取适量（约5 g）样本至病毒采样管内（若有体积较大的食材，则用灭菌剪刀剪碎后放入），充分振摇后，静置待用。
1.4.2 细菌DNA 的提取及检测 取样本盐水管上清液1mL，12000rpm离心5min后弃上清。沉淀加入灭菌水50μL，将其悬浮后100℃煮沸5min，12000rpm离心2min，取上清用于PCR反应。本实验采用达安生物科技有限公司提供的沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌、致泻大肠埃希氏菌核酸检测试剂盒，按说明书加入5μL核酸提取物，在ABi Step-one plus PCR扩增仪依程序进行40次循环扩增，并检测。
1.4.3病毒RNA 的提取及检测 选用天隆核酸提取试剂盒（磁珠法）（Ex-RNA/DNA 病毒2.0）提取病毒RNA。取各样本上清液200μL，按说明书加入10μL Proteinase K，4μL Acryl Carrier，放入天隆NP 968核酸提取仪依程序自动提取。RT-PCR采用达安生物科技有限公司的A、B、C 组轮状病毒核酸、诺如病毒核酸检测试剂盒，取核酸提取物5μL，加入PCR反应管，放入ABi Step-one plus PCR扩增仪依程序扩增40个循环，并检测。
1.4.4 细菌学培养法常规检测 按照WS 271-2007、GB 4789-2010方法进行沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌、致泻大肠埃希氏菌、变形杆菌、椰毒假单胞菌等病原菌的检测。
2结果
2.1细菌PCR检测 扩增曲线均无明显指数增长期和平台期，表明样本中未检出目标菌核酸。
2.2病毒RT-PCR检测 RT-PCR结果表明，6名学生、1名保健教师、3名食堂厨师的肛拭样本和1个粪便样本、1个食品样本（炒榨菜）中检出诺如病毒；所有样本中均未检出轮状病毒（见表2）。
注：打"/"号为该样品未开展检测此项检测。
2.3细菌学培养 细菌学培养结果显示，样本均未检出目标菌。
2.4***情控制 临床资料、流行病学调查资料和实验室检测结果显示，从食品加工者、食品及用餐者检测出诺如病毒，构成一条出清晰的传播链。因此，此次***情判定为诺如病毒引起的聚集性***情，可能系诺如病毒污染学校供餐食品所致。明确诊断和进行***情分析后，疾控中心继续开展调查，指导并督促学校落实***情控制措施，停止食用污染的食品，对相关区域进行了消毒，对带病毒厨师调离食品加工岗位，继续开展症状监测、病例搜索等防控措施。对住院病例进行有针对性***。截止***情发生后第3d，住院病例相继痊愈出院，未发现新发病例，***情得到有效控制。
3 讨论
3.1在17例病例的临床检验结果中，有5例血常规检测结果显示中性粒细胞率增高，淋巴细胞率降低，部分患者白细胞总数增高。一般情况，接诊医院会做出胃肠道细菌型感染诊断，但检测实验室不应轻易排除对病毒的采样、检测。
3.2此次事件共采集了40个样本，包括肛拭、粪便、食品、调味品、环境涂抹样、水样等不同的样本类型，样本容器包括病毒采样管、1% NaCl肉汤采样管、灭菌盐水采样管和Mac、HE、TCBS致病菌直划平板。科学、适度、合理的采集样本可提高病原微生物的检出率。
3.3诺如病毒的检测目前主要采用RT-PCR 技术，国内食品类检测研究仅限于牡蛎等贝类样本， 尚未见蔬菜、水果等其他食品的病毒检测方法报道。另外，食品样本一般体积大，病毒含量少，样本处理、病毒富集是实验室检测的关键点，也是难点。一般采用有机絮凝沉淀法进行富集[3]。但无论是PEG沉淀法，还是Trizol抽提法，过程都比较繁琐、用时长，加之多数基层疾控中心现阶段并未配备相关设备和耗材，因此无法进行病毒富集。在此次检测中，我们根据经验判断病毒含量可能比较大，所以采用均质后静置，取上清液直接进行检测，结果显示多个样本诺如病毒阳性。这表明在样本数量足够、污染病毒量大且成分单一的情况下，本方法对于突发公共卫生事件的快速检测有一定的可行性。
3.4 与常规培养方法相比，PCR技术用于病原微生物检测具有灵敏、快速、检出率高等优势。目前，该技术的应用越来越广泛。此次采用PCR法检出以诺如病毒为代表的肠道致泻病毒，为聚集性胃肠炎的病因诊断提供了有力证据。
3.5对于基层疾控中心来说，病原微生物的富集、检测等基础设备设施的匮乏给检测带来了一定的难度，特别是中西部地区的基层疾控中心应加强检测能力的建设。
参考文献：
[1] GUREMONT E，BRASSARD J，HOUDE A，et al.Development of an extraction and concentration procedure and comparison of RT-PCR primer systems for the detection of hepatitis A virus and norovirus GII in green onions[J].J Virol Meth， 2006， 134（1-2）：130-135 .
[2] KOOPMANS M，DUIZER E.Food borne viruses：an emerging problem[J].Int J Food Microbiol，2004，90（1）：23-41.
[3] 周晓红.食品中诺如病毒RT-PCR 检测技术研究进展[J].国外医学卫生学分册，2009，36（4）：234-238.
病毒样本篇3
【摘要】目的探讨酶联免***法在诊断风疹病毒急性感染中的应用价值。方法选取2010年1月——2012年12月在本院进行孕前体检、产检的患者的血浆样本1892份，使用酶联免***法进行风疹病毒IgM抗体和IgG抗体进行检测。结果在1892份血浆样本中，发现风疹病毒IgM阳性样本10例，IgM抗体阳性率是0.53%。结论酶联免***法可以同时对风疹病毒IgM抗体和风疹病毒IgG抗体进行检测，临床诊断准确率比较高，值得推广使用。
【关键词】酶联免***法；风疹病毒急性感染；检测分析
风疹病毒是一种RNA病毒，是属于披膜病毒科并仅限于人类的一种病毒[1]。在电镜下大多呈不规则的球形，核心直径为50nm-70nm[2]，风疹病毒的抗原结构比较稳定，风疹病毒会发生垂直性感染，孕妇在妊娠早期会将病毒通过胎盘屏障传染给胎儿，容易出现流产、死胎、畸形。为探讨酶联免***法在诊断风疹病毒急性感染中的应用价值。本文选取2010年1月——2012年12月进行孕前体检、产检患者的血浆样本1892份，使用酶联免***法进行风疹病毒IgM抗体和IgG抗体进行检测。现将检测结果报道如下：
1资料与方法
1.1一般资料选取2010年1月——2012年12月进行孕前体检、产检患者的血浆样本1892份，患者女性1892例；年龄最小的21岁，最大的43岁，平均年龄为（32.21±1.21）岁；在血样抽取后马上将血浆进行分离并存放在零下20摄氏度下存放备用。
1.2方法使用酶联免***法进行风疹病毒IgM抗体和IgG抗体进行检测。使用风疹病毒IgM抗体和IgG抗体检测试剂盒，以及风疹病毒IgG抗体亲和力检测试剂，对1892份血浆样本进行IgM抗体和IgG抗体水平进行检测，对阳性和可疑样本进行复查。
2结果
在1892份孕前体检、产检患者的血浆样本中，发现风疹病毒IgM阳性样本10例，IgM抗体阳性率是0.53%，其中IgG抗体阳性9例，IgG抗体阴性1例，对这9例风疹病毒IgM阳性并且IgG阳性的样本进行IgG亲和力研究发现，IgG低亲合力抗体6例（说明患者存在原发性感染），IgG中等亲合力抗体2例（说明患者存在既往性感染或者在近期接种过风疹病毒***苗），IgG高亲合力抗体1例（说明患者正处于风疹病毒急性感染期），详见表1。
3讨论
人体本身具有免***能力，对于外部的病毒感染后，在人体内就会出现相应的抗体，通常是先产生IgM抗体，再产生IgG抗体[3]，IgM抗体的滴度在到达高峰后会慢慢开始下降，在IgG抗体的滴度则会在到达高峰后，会维持在一个较高的滴度并且保持较长的时间。风疹病毒是一种RNA病毒，是属于披膜病毒科并仅限于人类的一种病毒。在电镜下大多呈不规则的球形，核心直径为50nm-70nm，风疹病毒的抗原结构比较稳定，风疹病毒会发生垂直性感染，孕妇在妊娠早期会将病毒通过胎盘屏障传染给胎儿，容易出现流产、死胎、畸形。风疹病毒虽然可以通过***苗进行接种预防[4]，但是一旦感染就会对临床***造成极大的困难，所以对患者的风疹病毒感染情况进行检测，对患者的母婴安全具有重要意义。诊断风疹病毒的重要方法是对患者血清中的IgM和IgG抗体进行检测，传统临床检测方法是对IgG抗体的浓度进行连续性的监测，但是研究发现，处于急性感染后期的风疹病毒感染者可能会出现无法检测或者常见均可检测到低滴度的情况。本文经研究发现，在1892份患者的血浆样本中，发现风疹病毒IgM阳性样本10例，IgM抗体阳性率是0.53%，其中IgG抗体阳性9例，IgG抗体阴性1例，对这9例风疹病毒IgM阳性并且IgG阳性的样本进行IgG亲和力研究发现，IgG低亲合力抗体6例（说明患者存在原发性感染），IgG中等亲合力抗体2例（说明患者存在既往性感染或者在近期接种过风疹病毒***苗），IgG高亲合力抗体1例（说明患者正处于风疹病毒急性感染期）。通过研究我们发现，酶联免***法较传统IgG抗体水平连续检测方法明显要简便，避免了长期跟踪检测的麻烦，对于风疹病毒急性感染期诊断也更加准确，并且如果单检IgM抗体或者IgG抗体亲和力都可能造成风疹病毒急性感染的漏检发生，会直接影响临床诊断的准确性和对***方案的确定。通过本文的结果可以确定，目前依旧存在较高的IgG抗体的高阳性率，说明风疹病毒存在较高随机感染率，不但提示进行酶联免***法的重要性，也提醒我国继续普及风疹病毒***苗的重要性。综上所述，酶联免***法可以同时对风疹病毒IgM抗体和风疹病毒IgG抗体进行检测，临床诊断准确率比较高，值得推广使用。
参考文献
[1]文伟，古醒辉，曾劲峰.酶联免***法检测风疹病毒急性感染结果分析[J].实用预防医学，2010，17（8）：1523-1525.
[2]郝田，孔强.巨细胞病毒、风疹病毒检测与***效果分析[J].中国厂矿医学，2003，16（06）：507-508.
[3]宋宏新，薛海燕，杨大庆，等.抗风疹病毒卵黄免***球蛋白的间接酶联免***法检测的研究[J].中华检验医学杂志，2004，27（4）：249-250.
[4]苗春艳.孕前巨细胞病毒与风疹病毒检测分析[J].中华综合临床医学杂志，2003，5（3）：59-59.