学文网蛋白酶体篇1
[摘要] 泛素-蛋白酶体通路（UPP）是细胞内重要的蛋白质降解系统。研究表明UPP参与恶性肿瘤多种细胞生物学过程的调节，影响其发生、发展。蛋白酶体抑制剂通过阻断UPP，可抑制肿瘤细胞生长，成为肿瘤***的新方法。肺癌在人类癌症死亡原因中居于首位，蛋白酶体抑制剂对肺癌的疗效研究仍在进行，其作用机制复杂，与NF-κB的下调、细胞周期调控、PTEN/PI3K/Akt通路和P53的调节等有关。本文对蛋白酶体抑制剂在肺癌***的新进展进行综述。
[关键词] 蛋白酶体抑制剂；泛素-蛋白酶体通路；肺癌；作用机制
[中***分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）08（b）-0038-04
[Abstract] The ubiquitin-proteasome pathway is the principle pathway for intracellular protein degradation. Research shows that ubiquitin-proteasome pathway plays a significant role in the genesis and progression of malignancy by regulating many processes of cellular biology. Proteasome inhibitors targeting the ubiquitin-proteasome pathway can inhibit tumorous cellular growth， becoming a novel class of potent and effective antitumor agents. Lung cancer is the leading cause of cancer-related deaths globally. The study about the effect of proteasome inhibitors on lung cancer is ongoing. The mechanisms are complicated， relating to the down-regulation of NF-κB， cell cycle control， PTEN/PI3K/AKT pathway， the regulation of P53 and others. The recent advances about proteasome inhibitors in the treatment of lung cancer is going to be reviewed in this paper.
[Key words] Proteasome inhibitor； Ubiquitin-proteasome pathway； Lung cancer； Mechanism
泛素-蛋白酶体通路（ubiquitin-proteasome pathway，UPP）是生物体内蛋白质降解的重要通路，此通路选择性降解细胞内受损及错误折叠的蛋白质，并对各种短寿命的功能蛋白具有快速降解作用。80%～90%的细胞内蛋白均通过此途径降解，其中包括细胞周期调控因子、基因转录因子、癌基因蛋白等[1]。UPP通过对上述蛋白的降解，调节细胞增殖、分化、存活和凋亡，在人体诸多生理过程中发挥重要作用，如信号转导、细胞周期调控、细胞凋亡调节、转录调控等，对维持细胞的稳态具有十分重要的意义，其功能的改变和异常能直接导致或诱发人类的许多重要疾病[2]。蛋白酶体抑制剂通过抑制蛋白酶体活性而阻断UPP，具有抑制多种肿瘤细胞增殖及诱导肿瘤细胞凋亡的作用，目前已成为抗肿瘤***的研究新热点。本文就UPP、蛋白酶体抑制剂在肺癌***中的进展综述如下：
1 泛素-蛋白酶体通路的组成
UPP由泛素、泛素活化酶E1、泛素结合酶E2、泛素连接酶E3、26S蛋白酶体、去泛素化酶等组成。此途径的核心是26S蛋白酶体，它是一个多催化复合物，由20S核心蛋白酶和两端各一的19S调节亚基组成。20S核心蛋白酶是蛋白酶体复合物的水解核心，具有胰蛋白酶、糜蛋白酶和胱天蛋白酶活性。UPP在降解靶蛋白时，首先要实现靶蛋白的泛素化，即若干泛素经E1、E2、E3的作用与靶蛋白相连[3]。只有泛素化的靶蛋白方可被19S调节亚基识别，进而进入20S核心蛋白酶体内部，被降解成3～22个氨基酸的小肽段，在细胞内回收利用。泛素分子则被泛素解离酶从靶蛋白上解离下来，重复利用[4]。
UPP通过上述过程，上调或下调某些抑癌基因、转录因子和细胞周期素等的表达以及改变MHC-Ⅰ限制性抗原肽的生成[5]，参与恶性肿瘤多种细胞生物学过程的调节，从而参与恶性肿瘤的发生和发展。
2 蛋白酶体抑制剂
蛋白酶体抑制剂按其不同的末端亲电基团可以分为硼酸肽类、环氧酮肽类、醛基肽类和乙烯基砜肽类等多种类型，以上均属于合成化合物，此外还有天然蛋白酶体抑制剂如***胞素、3，4-二氯异香豆素（DCI）、阿克拉霉素（Aclacinomycin）、PR-39等。按其作用方式不同，蛋白酶体抑制剂又可分为可逆性和不可逆性两种。醛基肽类是第一个被发现并广泛应用的蛋白酶体抑制剂，如MG132，是可逆性蛋白酶体抑制剂，其进入细胞速度快，能抑制ChT-L活性、半胱氨酸和丝氨酸蛋白酶活性，但醛基肽类化合物是非选择性的，会抑制其他酶类，且稳定性较差，易被氧化。
目前临床上研究最多、最完善的是硼替佐米，它属于硼酸肽类，是一种具有高选择性、可逆性的蛋白酶体抑制剂。硼替佐米（PS341、万珂）于2003年被美国食品药品监督管理局（FDA）批准上市，具有较广的抗肿瘤谱，除了用于***多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤外，它对其他肿瘤细胞，如肺癌、结肠癌、***癌、前列腺癌等均具有细胞毒性，可引起肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长[6]。近年来，研究者对硼替佐米进行结构改造，得到了新型硼酸肽类蛋白酶体抑制剂YSY-01A，研究表明，它在多种肿瘤细胞中均具有抑制增殖的作用[7]，其LD50值高于硼替佐米3倍，且毒副作用更低，有望成为新的研究热点。此外，环氧酮肽类化合物卡非佐米也于2012年被FDA批准用于多发性骨髓瘤的***。
3 蛋白酶体抑制剂与肺癌
肺癌在人类癌症死亡中居于首位，严重危害人类健康。据世界卫生组织统计，2008年，世界范围内有160万人被诊断为肺癌，同年有140万人死于此病。我国每年大约超过60万人死于此病。而其中非小细胞肺癌（NSCLC）大约占肺癌所有患者的80%。因此，为了使这个庞大的患者群体得到更好的***，能否制订出有效的抗肿瘤方案尤为重要。蛋白酶体抑制剂对多种血液系统肿瘤及实体瘤均有疗效，有关蛋白酶体抑制剂对肺癌，特别是NSCLC***研究亦不在少数，但其作用机制仍不完全明确。
3.1 作用机制
3.1.1 下调核因子κB 核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）普遍存在于真核细胞中，对超过200种基因具有调节作用，其中包括细胞黏附分子、血管内皮生长因子、凋亡调节基因如Bcl-2、Bcl-xL等，这些基因与肿瘤生长和转移息息相关。故而NF-κB的下调对抑制肿瘤的生长或促进肿瘤细胞凋亡发挥重要作用[8]。通常情况下，NF-κB以二聚体形式与其抑制蛋白IκB相结合，以无活性状态存在于细胞中。但当细胞受到细胞因子、生长因子、细菌、病毒、应激状态等刺激时，IκB被UPP降解，NF-κB从而被游离、激活[9]，发挥对其下游转录基因的调控作用，最终发生肿瘤生长因子表达增多，血管生成，细胞凋亡减少，诱发肿瘤可能[10]。蛋白酶体抑制剂可抑制IκB降解，从而阻止上述过程，调控细胞周期进程，控制细胞凋亡，抑制血管生长，对肿瘤***的各方面靶点均有作用。
3.1.2 对细胞周期的调控 在真核细胞中，细胞周期由细胞周期蛋白和细胞周期依赖性激酶（CDKs）调节。不同的CDK对应相应的细胞周期蛋白，调节细胞周期的各个阶段。而CDKs的抑制物（CKIs）则限制CDKs活性及细胞周期进程。P21WAF1/Cip1是众多CKIs中的一种，其在细胞周期G2/M期阻滞中发挥作用。P27Kip1是另一种CKI，可以阻止细胞从G1期到S期，上述二者都是UPP的降解底物[11]，当蛋白酶体被抑制时，CKIs不能被降解，使细胞***停止于各个不同时期，导致细胞凋亡而抑制肿瘤生长[1]。Ling等[12]在PS341作用于NSCLC H460细胞的研究中发现，在PS341作用下G2/M期细胞增多，研究中亦发现G2/M期阻滞与周期蛋白A1、周期蛋白B及其激酶的增加有关。
抗凋亡基因Bcl-2与肿瘤细胞凋亡抑制及化疗抑制有关，蛋白酶体抑制剂能克服Bcl-2介导的凋亡抑制，同时上调Bcl-2家族中的促凋亡分子Bax，降低Bcl-2/Bax的比值，促使肿瘤细胞凋亡。Ling等[13]在PS341作用于NSCLC的另一项研究发现，G2/M期细胞的数目与Bcl-2的磷酸化程度相一致，提示蛋白酶体抑制剂通过磷酸化作用下调NSCLS细胞中的Bcl-2水平，这也是癌细胞凋亡的机制之一。
3.1.3 P53的调控 抑癌基因P53在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。当细胞受到化学或电离辐射，DNA发生损伤时，P53经磷酸化或其他途径活化，从其抑制物MDM2中脱离，P53蛋白大量积累，诱导P21WAF1/CIP1转录，使细胞周期停滞，并阻止DNA合成，同时修复损伤的DNA。许多肿瘤中都存在P53基因突变，使P53不能表达或无法诱导下游的转录活动，DNA无法修复，异常的DNA传递给子代细胞，逐步积累，最终导致肿瘤的发生。P53通过UPP降解，故而蛋白酶体抑制剂可使P53积累，且有稳定P53的作用[14]。既往研究认为，P53诱导NSCLC停滞于G2/M期[15]，从而阻止肿瘤的发生。但有研究通过使用除P53外，其余基因完全相同的人类癌细胞，重新评估P53在PI诱导的肿瘤细胞凋亡中的作用[16]，该研究发现，硼替佐米和MG132诱导癌细胞凋亡均不依赖P53。Ling等[12]在NSCLC的研究中也发现，蛋白酶体抑制剂对细胞生长的抑制作用仅部分依赖P53功能，而细胞周期发生G2/M期停滞并不依赖P53。
3.1.4 PTEN/PI3K/Akt 通路 PI3K/Akt信号转导通路是肿瘤生长的重要通路，PI3K的激活是此通路的基础，活化的PI3K可将信息传递给通路的第二信使PIP3，接着活化Akt及PDK1，通过刺激其下游作用因子，促进肿瘤细胞的生长、增殖、浸润和转移。PTEN基因是与肿瘤发生关系密切的抑癌基因，它可通过PIP3去磷酸化拮抗PI3K/Akt通路[17]。Sherwood等[18]在硼替佐米致结肠癌SW480细胞凋亡的研究中发现，PTEN蛋白表达水平与硼替佐米作用时间正相关，随PTEN蛋白表达增加，Akt蛋白表达降低，从而抑制通路活性。Sun等[19]在YSY-01A抑制NSCLC A549细胞生长的作用机制的研究中亦发现，A549细胞增殖抑制时，PTEN的表达增加，PI3K表达减少。
3.1.5 抑制血管生成 肿瘤直径达到1～2 mm后，若无新生血管生成来提供营养，则不能继续生长[20]。新生的血管不仅可以为肿瘤输注养分、排除废物，还提供了肿瘤细胞的转移途径。实验证明，蛋白酶体抑制剂通过阻碍NF-κB入细胞核的过程，降低其活性，进而下调缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达，使血管内皮生长因子（VEGF）减少，抑制血管生成[21-22]，从而抑制肿瘤生长和转移。
3.1.6 其他 蛋白酶体抑制剂的抗肿瘤机制复杂，除上述机制外，蛋白酶体抑制剂还可促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导的凋亡[23]，此过程与蛋白酶体抑制剂下调NF-κB，诱导caspase-8和caspase -9活化，上调死亡受体DR4/DR5有关。此外，PIs还可逆转化疗药物的耐药性、增加放化疗敏感性，缓解肿瘤恶病质，这些均为蛋白酶体抑制剂对肺癌的***提供了基础。
3.2 联合***
放化疗是肺癌***中的重要手段，但肺癌细胞对化疗药物的耐药性、毒副作用以及放疗过程的辐射及患者耐受性是***过程中的一大难题。上文陈述了蛋白酶体抑制剂在肺癌中的抗肿瘤机制，为肺癌的***提供新思路。目前关于硼替佐米对肺癌***的临床研究较多见，硼替佐米耐受良好，但单一用药效果较温和。Li等[24]在硼替佐米对初次化疗的已发生癌细胞转移的NSCLC患者***的研究中发现，虽然患者耐受良好，但未见疾病客观缓解，其疗效并不明显。另一些研究也表明，患者对硼替佐米耐受良好。Piperdi等[25]在硼替佐米联合标准剂量的卡铂及贝伐单抗***晚期NSCLC的研究中发现，硼替佐米剂量分为1.3、1.6、1.8 mg/m2三组，在前3周中，三组中所有16例患者均未出现与硼替佐米剂量相关的不良反应，硼替佐米与当前化疗方案相结合，则显示出令人惊喜的疗效。Davies等[26]在硼替佐米联合吉西他滨/卡铂***晚期NSCLC的临床研究中发现，患者生存受益，中位生存期为11个月，1年和2年生存率分别为47%和19%。Zhao等[27]在硼替佐米联合紫杉醇、卡铂及胸部放疗的***研究中也提示该方案可潜在获益，其中位存活期为25个月，12个月生存率为73%，但血液系统方面的副作用，如白细胞减少、中性粒细胞减少等有所增加。
4 小结与展望
蛋白酶体抑制剂对肺癌的***作用已经取得了一定的研究成果。许多体内外实验证实蛋白酶体抑制剂对肺癌细胞的杀伤作用，目前的临床实验已证实蛋白酶体抑制剂对肺癌的***具有很高的可行性。随着蛋白酶体抑制剂的作用机制以及在临床应用方面研究的不断深入，在肺癌方面的作用也会进一步明确，可能成为***肺癌的新方法。
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（收稿日期：2016-05-12 本文编辑：程 铭）
蛋白酶体篇2
摘 要：泛素蛋白酶体途径由泛素、蛋白泛素化相关酶、26S蛋白酶体等成分组成，通过高度有序的降解过程，将细胞内错误折叠、衰老、损伤、突变的蛋白和修饰酶等分解成小分子肽，维持胞内蛋白质水平。目前发现，一次运动可引起骨骼肌途径活性升高，而重复运动可以降低途径活性，其机制尚不明确，大致可通过不依赖途径的信号通路（FOXO，p38）和依赖途径的信号通路（MyoD，NF-κB）上调可诱导的途径成分（泛素、E2/E3、蛋白酶体亚基），激活途径，引起蛋白质降解，但还需要更进一步去证实。
关键词：泛素蛋白酶体途径；运动；骨骼肌；研究进展
中***分类号：G804.2
文献标识码：B
文章编号：1007-3612（2012）09-0085-07
The Progress of the Research on Ubiquitin-Proteasome Pathway of Skeletal Muscle in Movement
ZHU Rong
（School of Sports Science， Wenzhou Medical College， Wenzhou 325035，Zhejiang China）
Abstract： Components of ubiquitin-proteasome pathway （UPP） include ubiquitin， protein ubiquitination enzymes and 26S proteasome. The misfolding， aging， damage， mutation protein， and modification enzymes broke into small peptides through its highly ordered process， which maintain the intracellular protein level. The Activity of UPP could be increased in skeletal muscle after once exercise， but could be decreased after repetitive exercises. The mechanism is not clear. It could act via pathway independent signals （FOXO， p38） and pathway dependent signals （MyoD， NF-κB） to upregulate inducible pathway elements （ubiquitin， E2/E3 proteins and proteasome subunits）， to active pathway， which cause protein degradation. But the detailed regulatory mechanism requires further study.
Key words：
ubiquitin-proteasome pathway； movement； skeletal muscle； research progress
骨骼肌是适应能力很强的器官，废用可以发生肌肉萎缩，增加运动可以使肌肉肥大，肌肉适应这种使用改变的最终结果依赖蛋白质合成和分解的平衡。蛋白质从头合成是一个比较缓慢的过程，而蛋白质降解速度不一，有的半衰期是几分钟，而有的却需要几天。研究表明，肌肉蛋白质降解可以通过四种途径来完成，溶酶体途径、calpain途径、caspase途径和泛素蛋白酶体途径。溶酶体途径主要负责降解膜蛋白和内吞的蛋白［1］，在运动后一段时间组织蛋白酶高升，参与与肌肉损伤［2］。calpain和caspase途径能劈开肌原纤维，释放肌丝到胞浆中［3］，启动肌纤维的降解，但不能降解蛋白质成氨基酸。而泛素蛋白酶体途径是基因和蛋白质功能的主要调节者和终结者，负责细胞内80%～90%的蛋白质周转，有着广泛的生物学意义，如细胞周期的调控、抗原递呈、免***应答、细胞表面受体和离子通道的调控、DNA的修复等［4］。由calpain和caspase途径解离的肌丝，包括actin和myosin可以被泛素蛋白酶体途径降解［5］，可见该途径在肌纤维蛋白分解代谢很重要。本文就泛素蛋白酶体途径的组成、作用机制、与运动骨骼肌蛋白降解间的关系作一综述，以利于运动骨骼肌蛋白质代谢的更深入研究。
1 泛素蛋白酶体途径的组成
泛素蛋白酶体介导的细胞蛋白质降解途径是一个复杂、缜密的过程。其组成成分包括泛素、蛋白泛素化相关的酶、降解泛素化蛋白的蛋白酶体，它们相互作用，共同完成细胞内蛋白降解，参与细胞进程。
1.1 泛素 泛素（ubiquitin，Ub）是76个氨基酸组成的8.5-kDa多肽，序列高度保守，呈紧密的球形结构，存在于细胞内或共价结合在各种胞浆、核及膜蛋白上。编码泛素的基因有两种，一种是核糖体蛋白上的泛素基因，编码融合蛋白，蛋白合成后，由泛素C末端水解酶切割掉融合蛋白；另一种是多聚泛素基因，形成的蛋白是由多个泛素单体首尾相连而形成的多聚泛素。不同生物体中多聚泛素基因的拷贝数以及不同拷贝的多聚泛素基因所包含的泛素基因单体数目相差很大。泛素通过第76个甘氨酸的α-羧端与底物蛋白赖氨酸的ε-氨基以共价键连接，多聚泛素链也以相似结构彼此相连接。一般情况下，至少要有4个泛素单体连成的多肽链才能激活26S蛋白酶体。发生在赖氨酸残基上的多聚泛素化是非常重要的，第48位赖氨酸和第29位赖氨酸泛素化是蛋白质降解的信号，前者引起26S蛋白酶体降解［6］，后者则被送到溶酶体中降解［7］。蛋白单泛素化是一个重要的调节修饰，不引起蛋白质降解，主要负责内吞作用、病毒出芽、组蛋白和转录因子的调节等。例如，赖氨酸63位点的泛素化参与DNA修复、内吞、信号转导等功能的调节［8］。不管泛素以何种形式连接到底物上，其共同特点是需要ATP水解提供能量。
1.2 蛋白泛素化相关的酶
1.2.1 泛素活化酶 泛素活化酶（ubiquitin-activating enzyme，E1）是催化泛素结合底物蛋白所需要的第一个酶，存在于细胞浆和细胞核中，由两个亚基E1a （117 kDa） 和E1b （110 kDa） 组成，生物体（酵母、植物、人类）内高度保守。它不仅与泛素形成泛素-AMP中间物而激活泛素单体，还可直接催化第48位赖氨酸连接的多聚泛素化链的延长［9］。研究发现当缺乏酶E1时，可导致酵母死亡［10］，可见E1在细胞生存中是非常重要的。
1.2.2 泛素结合酶 泛素结合酶（ubiquitin-conjugating enzyme，E2）将E1传递过来的泛素在活性位点半胱氨酸上以硫酯链相结合，发挥其载体功能，因此又被称为泛素载体蛋白，是泛素蛋白酶体途径底物特异性的第一个决定因子。不同的E2间约有35％的同源性。酿酒酵母基因组中，有13种基因编码 E2类的蛋白，起命名为Ubc家族；哺***动物基因组中，至少有25种E2。所有E2拥都有一个保守的150个氨基酸左右（14～16 kDa）的核心结构域，其内含有与泛素结合所需的半胱氨酸残基［11］。E2还有N-或C-末端的延伸，这与识别泛素连接酶（ubiquitin-protein ligating enzyme，E3）和E2自身活性以及底物识别有关。E2与泛素结合力非常低，这有利于泛素转移到底物蛋白上去。E2可直接将泛素传递给底物蛋白的或另一泛素链的赖氨酸上，也可通过转硫醇作用将泛素转移到E3的半胱氨酸上。
1.2.3 泛素连接酶 E3负责底物蛋白选择性识别和促进泛素转移到底物蛋白上。酶E1只有1种或几种，E2有数十种，而E3有上千种，使蛋白泛素化更加高度专一，它是蛋白质泛素化过程的限速酶，其活动受到严格调节。根据E3亚基组成和作用机制，可分为两大家族［12］： HECT（homologous to E6-AP C-terminus，E6相关蛋白羧基端的类似物）型E3和RING finger 型E3。1）HECT型E3有个保守的半胱氨酸残基催化区域（HECT），呈L形，能催化泛素的硫酯键形成Ub-E3过渡复合物，再将泛素转移到底物蛋白上。2）RING finger 型E3有个由40～100个氨基酸组成的RING区域，该区域含有8个半胱氨酸、组氨酸以及两个螯合的锌离子保守环指结构序列，它含有相似的E2结合结构域，可作为桥梁直接将活化的泛素从E2转移到底物蛋白上，而不用形成多余的硫酯链。RING finger 型E3大部分是多分子的复合物，如SCF复合体、VHL-CBC复合体和APC复合体等，其中SCF复合体数量最多。
骨骼肌中存在两种特殊的E3，MuRF（Muscle RING Finger）和MAFbx（Muscle atrophy F-box protein，也称为Atrogin-1）。MuRF由3部分构成， RING finger结构（E3的活性区、B-box结构和卷曲螺旋结构；已知MuRF有三种类型：MuRF1，MuRF2，MuRF3。MuRF1与巨大的肌节蛋白titin结合，连接于其激酶区域，维持M线和粗肌丝完整性，Titin缺失激酶区和MuRF1连接区将导致小鼠肌节解体、肌无力［13］；过表达MuRF1，又可引起titin与MuRF1的结合部分被破坏 ［14］。MuRF1还与泛素相关修饰因子-3、转录因子、糖皮质激素受体元件结合蛋白-1、蛋白激酶C的受体等结合，参与肌细胞蛋白泛素化、信号转导、基因转录、分化、形态形成。研究表明，在去神经、损伤、关节固定、卧床休息、糖皮质激素***、脓毒症、癌症和衰老等引起的肌肉萎缩中，MuRF1表达上调，而缺失MuRF1基因的小鼠却能抵抗骨骼肌萎缩［15］。可见，MuRF1参与肌原纤维的结构维持和蛋白质周转，在肌肉质量控制中发挥重要作用。MuRF2作为微管、中间丝（包括desmin、vimentin、paranemin、synemin、cytokeration）、肌节M线的瞬间接头者，影响肌原纤维的形成［16］；MuRF3主要负责微管的组装和分解，对肌肉的分化很重要［17］。MAFbx是典型的SCF型E3家族成员，肌肉萎缩MAFbx基因表达也上调。最近研究发现心肌中的神经钙蛋白是MAFbx的底物，MAFbx在心肌中过表达能阻止神经钙蛋白引起的心肌肥大［18］。另外，MAFbx参与转录因子MyoD（Myocyte differentiation factor，肌细胞分化因子）的分解［19］，而这种转录因子在肌肉的发育和分化中非常重要。鉴于MuRF1、MAFbx在肌肉萎缩中的明显变化，将它们作为骨骼肌萎缩的标志物以及干预***的可能靶点是为之不过的。
1.2.4 去泛素化酶 在蛋白质被泛素化时，同样存在反向过程，即去泛素化，以调节蛋白质泛素化水平和泛素化蛋白质的降解。去泛素化酶主要有两大类： 泛素羧基末端水解酶家族（ ubiquitin C-terminal hydrolases， UCHs）和泛素特异性修饰酶家族（ ubiquitin- specific processing enzymes，UBPs）。一般来说，UCHs从泛素上移除加合物，恢复自由单体泛素，而UBPs是将从多聚泛素化蛋白上移除泛素。基因分析表明，在大多数生物体内编码UBPs的基因多于编码UCHs的基因。去泛素化酶能促进泛素前体转化成活性泛素分子，维持游离泛素的浓度；可以将底物蛋白的泛素化链修饰到能被26S蛋白酶体识别的长度，以调节泛素化蛋白的降解速度；将多聚的泛素分子拆散成单个泛素分子，以便重新利用和维持泛素蛋白酶体途径；能够识别并移除错误结合到底物蛋白质上的泛素分子，阻止该蛋白质的降解［20］。
1.3 26S蛋白酶体 26S蛋白酶体（26S proteasome）是一个巨大的胞浆蛋白酶复合物，约2.5MDa，占细胞内总蛋白质的1%左右。26S蛋白酶体由圆桶状的20S蛋白酶体和多种调节复合物组成，常见的有19S调节复合体，也称PA700。
19S调节复合体分为基底和盖子两部分。在ATP存在下，19S调节复合体结合到20S蛋白酶体一端或两端，盖子中去泛素化酶，将底物去泛素化，以利于进入20S蛋白酶体腔内；基底中与泛素化蛋白结合的酶与底物蛋白的多聚泛素结合，利用ATP酶活性，将底物蛋白扭转展开，进入20S蛋白酶体的狭隘孔隙［21］。
20S蛋白酶体是由两个α环和两个β环叠加在一起形成的筒状结构，两个α环在外侧，两个β环在内侧。真核生物的α环和β环各由7个不同的亚基组成，其基本结构可表示为α1～7/β1～7/β1～7/α1～7。α亚基比β亚基保守，在催化腔和细胞质之间形成选择性屏障，主要用于底物识别，而β亚基含有催化位点，负责底物降解，可以将19S调节复合体送来的底物蛋白降解成6～8个氨基酸长度的片断［22］。α环的中心在不工作时几乎是密闭的，这可以阻止蛋白穿过含有催化中心的β环内表面。大多数β亚基都有一个N端前导序列（N-terminal prosequence），这个保守性不高的肽段在20S装配过程中被切除，对引导真核生物20S蛋白酶体β亚基的正确折叠和β与α亚基的组装非常重要。20S蛋白酶体的催化部位含有多种蛋白酶活性：1）类糜蛋白酶活性，水解疏水性氨基酸的肽键，是限速酶；2）类胰蛋白酶活性，水解碱性氨基酸的肽键；3）谷氨酰水解酶活性，水解酸性氨基酸的肽键；4）支链氨基酸肽酶活性，水解支链氨基酸的肽键；5）中性氨基酸切割活性。研究表明各活性部位之间可以互相调节。已经知道，β5亚基具有类糜蛋白酶活性位点，β2具有类胰蛋白酶活性位点，β1具有谷氨酰水解酶活性位点［23］。
26S蛋白酶体还具有不依赖泛素化的水解功能［24］：1）切割大分子无活性蛋白前体，使之转变为活性形式。如转录因子NF-κB亚基P50的前体蛋白P105 c端部分被26S蛋白酶体降解后，残余的N端部分即成为有活性的P50；2）抗原提呈过程中，抗原分子被蛋白酶体降解为小的肽段，而后转运到内质网上与组织相容性复合体I类分子结合。蛋白酶体还与许多重要的生理功能密切联系，对它结构与功能的研究会有助于阐明机体的一些生理和病理机制。
2 泛素蛋白酶体途径作用机制
泛素蛋白酶体途径贯穿于整个细胞，涉及了众多的底物和体内反应过程。一个完整的蛋白质经泛素蛋白酶体途径降解可分成两个连续的步骤（***1）：1）底物蛋白泛素化；2）泛素化蛋白的降解。
2.1 底物蛋白泛素化 泛素化调节细胞内蛋白质水平，与磷酸化一起参与着生物信号转导调控，但是泛素化的酶学机制要比磷酸化复杂得多，因为泛素化需要对信号进行识别，如一定的氨基酸序列、底物蛋白的磷酸化、接头蛋白的结合或由于断裂、氧化和衰老等引起的蛋白质损伤等。泛素化信号识别的同时，泛素被活化，进而底物蛋白泛素化，这一过程受前面所述E1、E2、E3催化作用高度调控。E1首先通过ATP依赖性反应将一个游离的泛素激活，活化的泛素随即被转到E2，而后在E3的催化作用下，活化的泛素与底物蛋白的赖氨酸残基共价结合，完成底物蛋白的泛素化。体内存在多种泛素化模式：单个泛素分子与相应底物上的单个赖氨酸残基结合，称为单泛素化；多个泛素分子与相应底物上的多个赖氨酸残基结合，称为复合的单泛素化；多个泛素分子以共价键相互连接形成聚泛素链后与底物上的单个赖氨酸残基结合，称为多聚泛素化。只有经过多聚泛素化的底物蛋白才能被蛋白酶体识别、降解。
2.2 泛素化蛋白在26S蛋白酶体中的降解 在ATP存在的情况下，19S调节复合物与20S蛋白酶体组装成有活性的26S蛋白酶体。调节复合物首先识别、结合泛素化蛋白，利用依赖ATP的酶打开折叠结构，改变构象，去除泛素，主动转运展开的蛋白到20S蛋白酶体。蛋白在20S蛋白酶体里以不依赖ATP的形式降解成小分子肽及氨基酸［26］。去除的泛素并不被降解而是重新进入泛素蛋白酶体途径。蛋白酶体对蛋白质的选择性降解，受到精确的调节，以避免水解扩大化引起的细胞损伤。这种调节可分为三个方面：1）20S自身的结构， 即中央腔内孤立的活性中心和环的狭窄人口，只允许完全伸展或线性化的蛋白质进入降解，有效地减少了胞内成分的非特异性降解；2）蛋白酶体自身所固有的调节性质以及各种细胞抑制因子可使它维持无活力状态；3）在真核生物中，19S复合物是20S蛋白酶体重要活化因子。
3 泛素蛋白酶体途径生物学功能
大量研究证实，泛素蛋白酶体途径是细胞内环境稳定的关键调节因素之一，在机体的许多生理功能中起了很重要的作用。如抗原递呈、细胞周期的调控、免***应答和炎性反应、转录的调控、细胞对应激和细胞外效应剂的应答、细胞表面受体和离子通道的调控、DNA的修复、生理节奏的控制、发育和分化、凋亡肌肉萎缩等等［27］，目前还不断有新的作用被发现。泛素蛋白酶体途径降解细胞内蛋白的机制，已成为近年来国内外研究的热点问题。
4 运动骨骼肌中泛素蛋白酶体途径活性变化及机制
4.1 一次运动对骨骼肌泛素蛋白酶体途径活性的影响 多数研究表明，各种类型的一次性运动都使泛素蛋白酶体途径活性增加。Thompson［28］发现一次损伤性离心运动后2 d，肱二头肌泛素蛋白含量比不运动的对照组增加了55%，同时泛素化蛋白也相似增加。Willoughby ［29］让健康志愿者做离心伸膝运动，也发现运动后6、24 h，泛素、E2、20S蛋白酶体的mRNA水平、蛋白含量增加；运动后24、48 h肌四头肌DN***断、肌纤维蛋白含量、肌力减少，疼痛增强，表明离心运动造成的肌纤维损伤，与泛素蛋白酶体途径活性激活、蛋白质降解增强有关。Sandri ［30］让小鼠转轮一夜后，腓肠肌DNA断裂，泛素蛋白含量增加。Wakshlag［31］发现在狩猎季节高峰期，猎狗骨骼肌中泛素化蛋白、帽子调节亚基P31蛋白含量增加。Louis［32］也发现抗跑步后4 hMuRF-1、MAFbxmRNA含量增加分别是3.6倍和1.6倍。我们在大鼠一次大强度上坡跑运动后，也发现MuRF1、MAFbx、26S蛋白酶体C2 基因表达、泛素化蛋白浓度升高，26S蛋白酶体活性增强，骨骼肌收缩蛋白降解增强［33，34］。可见，向心运动同样增加途径中某些组分的表达。Reid［35］认为一次性运动中泛素蛋白酶体途径的反应是多相的和时间依赖的（***2）。最初的泛素化蛋白增加有利于运动刺激的信号转导；超过几小时至几天，因途径中重要成分基因表达的升高再次使泛素化蛋白增加，以调节后期蛋白质的降解。
4.2 重复运动对骨骼肌泛素蛋白酶体途径活性的影响 研究表明，重复运动有抑制泛素蛋白酶体途径活性的效果。Willoughby ［29］让健康志愿者做两次离心伸膝运动，其中间隔3周，发现第二次运动后股四头肌肌力的减少、疼痛的增强，以及泛素、E2、20S蛋白酶体的蛋白、mRNA含量的增加都小于第一次；并且肌纤维蛋白含量不再减少。Mascher等［36］也发现第二次抗阻运动后24 h，青年男子肱二头肌MuRF1 mRNA含量比第一次降低30%，运动后48 hMAFbx mRNA含量也比第一次下降了30%。于是人们将运动训练或是运动训练结合营养补充应用于肌萎缩患者的***中，帮助康复和减少萎缩。例如，Suman［37］让烧伤儿童进行12周的康复训练，肌力和瘦体重明显比不运动恢复的患者有所改善。Hespel等［38］让废用性萎缩患者进行10周的康复训练并补充肌酸，发现股四头肌肌力比单纯康复训练恢复更快。Willoughby等［39］让脊髓损伤患者做12周被动腿部自行车运动进行康复，发现骨骼肌中MHC（myosin heavy chain，肌球蛋白重链）IIa、MHC IIx mRNA含量增加，同时泛素、E2和20S蛋白酶体的mRNA水平下降，说明长期运动可以降低泛素蛋白酶体途径活性，以利于改善肌萎缩状况。不过，Ordway［40］发现持续28 d的运动神经元刺激，大白兔胫骨前肌蛋白酶体、两个调节复合体19S、11S蛋白含量以及亚基C3 mRNA水平增加，认为蛋白酶体活性增加有利于清除代谢产物，保护胞质蛋白正常功能，并有助于肌肉的重塑和适应应激。
4.3 骨骼肌泛素蛋白酶体途径活性的调节机制 Reid［35］认为泛素蛋白酶体途径对肌肉使用改变的反应，随肌肉使用强度和持续时间的变化而变化。当刺激蛋白降解信号（ROS、激酶、磷酸酶）时，途径活性增加，蛋白质降解加强。途径活性的调节可通过不依赖途径的信号通路（FOXO，p38）和依赖途径的信号通路（MyoD，NF-κB）上调可诱导成分（泛素、E2/E3、蛋白酶体），改变活性（***3）。
4.3.1 不依赖泛素蛋白酶体途径的信号调节
4.3.1.1 FOXO对泛素蛋白酶体途径活性的调节 FOXO家族是转录调节因子，也是INS/IGF-1信号通路中的关键分子，对细胞增殖、细胞凋亡等生理过程具有重要调节作用。Sandri［41］发现肌萎缩中PI3K/AKT （磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B）途径减弱， FOXO转录因子激活，诱导MAFbx mRNA表达。一次抗阻运动后4 h，老年人股外侧肌MuRF1和FOXO3A的mRNA含量都增加［42］。跑步后，腓肠肌活检发现MuRF-1、MAFbx和FOXO3a的mRNA含量分别增加3.6倍、1.6倍 和 1.9倍［33］。而抑制FOXO3a的表达可阻碍MAFbx和MuRF1启动子的激活［43］。这些都说明运动时MuRF-1、MAFbx mRNA的表达受转录子FOXO3a的调节。
4.3.1.2 P38 MAPK对泛素蛋白酶体途径活性的调节 MAPK（mitogen-activated protein kinase），即丝裂原活化蛋白激酶，是细胞内的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，可将细胞外刺激信号转导至胞质内或胞核内，在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥关键作用。目前发现多条并行的MAPK信号通路，其中ERK、JNK/SPAK、p38MAPK研究最多。研究表明，结扎大鼠左***动脉的心力衰竭模型中，心肌TNF-α增加，介导p38MAPK信号通路提高MuRF1、MAFbx mRNA表达［44］。尽管MAPK在肌肉蛋白质降解方面研究较少，但是，运动激活MAPK信号通路的事实大量存在，通过对它的研究或许能揭示胞质中蛋白质合成和降解上游信号的复杂关系。
4.3.2 依赖泛素蛋白酶体途径的信号调节 依赖途径的信号系统不仅调节该途径的活性，同时还受该途径活性调节，这使得泛素蛋白酶体途径的调控错综复杂。
4.3.2.1 MyoD与泛素蛋白酶体途径活性的调节 生肌转录因子MyoD是肌肉特异性的调节生长因子，与泛素蛋白酶体途径降解蛋白的作用相对立。MyoD为短寿命调节蛋白，受泛素蛋白酶体途径调节。DNA与 MyoD结合，能掩盖泛素化序列，稳定MyoD；然而当MyoD结合第二生肌调节因子Id1时，将抑制MyoD与DNA的相互作用，暴露泛素的识别位点，促进MyoD降解。MyoD泛素化发生在G1期，当丝氨酸200位点或赖氨酸1333位点磷酸化，前者将受cyclin E-Cdk2调节［45］，后者受atrogin1/MAFbx调节［19］。肌肉的使用激活泛素蛋白酶体途径活性，使肌肉易缺失MyoD。MyoD净丢失又被MyoD基因表达上调而得以补偿，这可能是肌萎缩的反馈作用，促进肌萎缩的反相——生肌作用加强，以抵抗萎缩，维持肌肉蛋白质平衡。MyoD对泛素蛋白酶体途径影响的研究还见报道，但是两者一起共同作用，完成肌肉萎缩、重塑过程。
4.3.2.2 转录因子NF-κB对泛素蛋白酶体途径活性的调节 NF-κB是一类核转录因子，存在于每个细胞中，是许多信号途径的连锁点。其家族有五个成员（***2-8），包括p50、p52、Rel（p65）、RelB和C-Rel，但必须两种蛋白形成二聚体才能与DNA结合并调节基因转录，因此通常以同源或异源二聚体的形式存在，最常见的形式为p50/p65组成的二聚体。细胞在非刺激状态下，NF-κB与它的抑制物IκB蛋白结合，在哺***动物内有7种，IκBα、IκBβ、IκBε、IκBγ、Bcl-3、p105、p100。这种未被激活的形式存在于细胞浆，当细胞受到损伤等刺激后，NF-κB被激活。例如激活IκBα激酶（IκK），可引起IκBα在32和36位点上丝氨酸磷酸化，引发IκBα多聚泛素化，并通过蛋白酶体降解。解离了IκB抑制因子，NF-κB才能转移进入核内，发挥它的调节功能［46］。研究表明，NF-κB是肌肉分解代谢的调节因子，在骨骼肌代谢调节中发挥一定作用。因为长期不负重使小鼠比目鱼肌萎缩，NF-κB活性提高［47］。进一步观察，发现肌细胞培养中加入TNF-α，可使NF-κB激活，UbcH2 转录加强，泛素结合能力增强［48］，而抑制NF-kB的活性，可抑制C2C12肌管蛋白分解［49］。此外，NF-κB还能调节MuRF1、MAFbx、20S蛋白酶体亚基C3和Foxo3a基因的转录［50-52］。但是，Durham［53］发现离体小鼠膈肌体外10 min强直疲劳收缩，NF-κB活性降低；12 d无负重小鼠比目鱼肌NF-κB活性的增加可因疲劳运动而减少；青年男子蹬自行车疲劳运动后，股外侧肌运动即刻的NF-κB活性比运动前和运动后1 h低，认为疲劳运动降低NF-κB活性。不过，Ji ［54］仍发现跑台力竭运动后大鼠腓肠肌NF-κB活性增加。这种不同的结果可能是因为研究对象、取样部位、运动方式不同，这需要更多的研究去验证。
5 小 结
综上所述，依赖ATP的泛素蛋白酶体途径是细胞内蛋白质降解的主要方式。骨骼肌蛋白质降解过程，泛素、MuRF1、MAFbx、蛋白酶体基因表达以及蛋白质的增加，表明途径在肌蛋白代谢中有着重要作用。由于航天失重、卧床休息以及疾病引起的代谢性消耗症等都会引起骨骼肌蛋白质减少，肌肉萎缩，影响正常生活，甚至威胁生命，这使得肌肉中泛素蛋白酶体途径变化机制成为研究热点，以期能改善疾病、恢复健康。但是运动中骨骼肌的细微结构变化、以及肌肉损伤是否也是由于途径激活造成的呢？已经知道病理过程中激素、细胞因子、氧化应激等因素变化可激活多个信号通路，改变途径活性，运动中也有这些变化的因素，借此深入研究，可能会揭示运动引起肌肉功能障碍、肌肉疲劳和肌肉损伤产生的原因，为肌肉重塑提供了分子理论基础，为疾病***和运动训练提供可能的调控措施。
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蛋白酶体篇3
[摘要] 泛素-蛋白酶体途径是真核生物中非溶酶体蛋白降解的主要系统，主要包括泛素，26S蛋白酶体和酶系统E1、E2、E3。泛素-蛋白酶体参与调节细胞周期进程、抗原递呈、转录和信号转导等多种细胞生理过程。研究发现，病毒可以利用泛素系统调控病毒的基因转录、抑制细胞凋亡、降解抗病毒蛋白、促使病毒出芽和释放等逃避宿主的免***监视。深入理解泛素-蛋白酶体在病毒感染中的作用可以为抗病毒***提供新思路。
[关键词] 泛素-蛋白酶体途径；病毒；感染
[中***分类号] R373 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2014）02（c）-0191-03
人体组织细胞中存在多种蛋白降解途径，目前研究最多的是溶酶体降解途径和泛素-蛋白酶体降解途径，溶酶体降解途径无需能量，主要降解细胞外和细胞膜蛋白质；泛素-蛋白酶体降解途径是一种耗能的高效、特异的蛋白质降解过程，控制细胞内大多数蛋白质特别是膜蛋白的降解。泛素-蛋白酶体系统主要由泛素、泛素启动酶包括泛素激活酶（ubiquitin-activating enzyme）E1、泛素载体蛋白（ubiquitin-carrier protein）E2和泛素连接酶（ubiquitin ligase）E3、26 S蛋白酶体和去泛素化酶组成[1-2]。泛素蛋白酶体系统在高等真核生物细胞中的功能主要体现在两个方面：一方面降解细胞内的蛋白质；另一方面是非降解作用，调节细胞内不同蛋白的定位和活性。泛素-蛋白酶体途径（ubiquitin-proteasome pathway，UPP）调控高等真核生物细胞内几乎所有的生命活动，包括细胞增殖、分化、凋亡，DNA复制和修复、转录和蛋白质质量控制等，并参与病原体的入侵、致病和人类机体的免***应答等过程。另外，泛素介导的蛋白质降解还参与环境有害物质的致病过程以及机体的解毒机制[3]。
泛素是一个广泛分布在真核细胞中的小分子球状蛋白质，其序列高度保守。细胞内需降解的靶蛋白在ATP的作用下被一系列酶催化，其Lys侧链连接到泛素分子的C-末端Gly侧链，而后其他泛素分子以Gly连接到泛素分子的Lys侧链上而形成多泛素化链，这个过程称为泛素化。泛素化是由泛素激活酶E1、泛素载体蛋白E2和泛素连接酶E3等介导的多酶级联反应，在此过程中E3的作用尤为关键，它决定了底物泛素化的时间性和特异性[4-5]。泛素化蛋白被转运到蛋白酶体中被完全降解，蛋白酶体是一种具有多个亚单位组成的蛋白酶体复合体，蛋白酶体沉降系数为26 S，故又称26 S蛋白酶体[6]，这个体系称为泛素-蛋白酶体系统或 UPP[7]。研究发现，许多病毒可以利用UPP通过促使病毒出芽、调控病毒转录、下调细胞表面免***分子、降解抗病毒蛋白、抑制细胞凋亡等方式在宿主内生存、增殖，现就这五种方面综述如下。
1 促使病毒出芽、释放
泛素及泛素连接酶在病毒的出芽及释放过程中有重要作用，泛素与病毒结构蛋白的具体链接形式不是很清楚，但是很多病毒结构蛋白的出芽及释放需要泛素连接酶的作用。HBV核心蛋白包括两个赖氨酸残基（K7和K96），将K96上的氨基酸残基突变为丙氨酸阻止HBV与泛素结合，可以抑制病毒的出芽并且泛素连接酶的过表达明显促进HBV的出芽[8]。Chung等[9]研究发现，人类免***缺陷病毒1型（HIV-1）感染宿主细胞释放病毒颗粒主要由HIV-1 Gag蛋白C端与肿瘤易感基因101蛋白或宿主蛋白ALG-2相互作用蛋白X结合来介导完成，HECT类泛素连接酶NEDD4L的过表达可以激活与缺少TSG101和ALIX结合的L结构域的HIV-1子代释放，且去除内源的NEDD4L能抑制这些缺陷病毒出芽，提示病毒出芽的激活依赖于NEDD4L的泛素蛋白酶体活性。Wang等[10]将蛋白酶体抑制剂MG132加入到感染HBV的细胞中，发现经过6 d MG132的处理，蛋白酶体活性较正常对照组降低，并且乙肝病毒表面抗原、核心抗原及HBV-DNA的水平较对照组明显降低，提示蛋白酶体抑制剂通过阻断UPP能有效地抑制乙肝病毒的复制。Bandi等[11]向感染HBV病毒的小鼠注射目前已用于临床的蛋白酶抑制剂硼替佐米，发现应用硼替佐米6 d后病毒复制减少，同时病毒RNA和蛋白表达量明显降低，提示蛋白酶抑制剂在体内的应用可以明显抑制病毒的复制。
2 调控病毒转录
HIV-1反式激活因子Tat蛋白的泛素化能将19 S复合物引向HIV-1启动子，进而调控病毒转录[12]。王晓菊等[13]通过检测HBV感染者外周血淋巴细胞泛素mRNA的表达与正常组对照发现，慢性HBV感染并有炎症活动者均存在外周血淋巴细胞泛素mRNA表达水平低，病情越重，表达水平越低，提示外周血淋巴细胞泛素mRNA的低表达与HBV感染有关。Bhuvanakantham等[14]发现虫媒病毒如西尼罗病毒可通过泛素化降解等方式逃逸人Sec3蛋白的抗病毒作用。Robek等[15]发现，干扰素抑制HBV复制的过程是通过泛素-蛋白酶体降解病毒或者细胞的相关蛋白实现的。
3 下调细胞表面免***分子
细胞毒性T淋巴细胞（CTL）识别与组织相容性复合物（MHC）Ⅰ类分子连接的病毒蛋白内多肽表位，目前认为MHC由泛素-蛋白酶体降解途径介导[16]。人巨细胞病毒编码的US2和US11糖蛋白泛素化后，可促使新生成的MHC重链从内质网易位到胞质，被蛋白酶体降解，清除MHC分子使病毒抗原决定簇不能提呈而逃避免***监测[17]。卡波西肉瘤相关疱疹病毒通过泛素连接酶K5使宿主细胞分泌编码的C-型凝集素DC-SIGN及密切相关的DC-SIGNR下调[18]。病毒编码的类似泛素连接酶E3可以促进宿主细胞表面MHC分子降解，如人疱疹病毒8型编码的K3和K5蛋白可作为泛素连接酶E3促进宿主细胞表面的MHCⅠ类分子泛素化[19]。病毒可以通过不同方式利用泛素系统抑制MHC的呈递作用进而逃避免***检测。
4 降解抗病毒蛋白
载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G（APOBEC3G）是机体固有的抗病毒因子，HIV-1的病毒感染因子（Vif）的氨基端能与APOBEC3G氨基端结合，Vif招募形成泛素连接酶E3复合体并介导APOBEC3G多聚泛素化，随后APOBEC3G经26 S蛋白酶体途径降解，从而拮抗其抗HIV-1的活性[20]。Nathans等[21]通过RNA干扰技术抑制Vif，在Vif形成泛素连接酶E3复合体在蛋白酶体降解APOBEC3G之前，使Vif泛素化被26 S蛋白酶体降解，同时使更多的APOBEC3G掺入到病毒颗粒中，发现可以明显降低病毒的感染力，也证实Vif经UPP介导APOBEC3G降解在HIV病毒感染过程中起重要作用。
5 抑制细胞凋亡
p53是病毒拮抗细胞凋亡过程中的重要靶基因。人***瘤病毒E6蛋白与细胞泛素连接酶E6相关蛋白作用形成复合物，使p53多泛素化及溶酶体降解，进而抑制细胞凋亡[22-23]。Wang等[24]通过检测猪流感病毒感染的细胞p53分子mRNA水平，病毒感染没有使p53转录水平升高，但是p53稳定性较对照组明显上升，提示病毒通过提高p53稳定性来抑制细胞凋亡；加用蛋白酶抑制剂MG132处理病毒感染的细胞并且检测泛素化p53，发现病毒感染组p53泛素化水平较对照组明显减少，提示病毒是通过减少p53泛素化水平，抑制p53的通过泛素-蛋白酶体降解来抑制细胞凋亡的。此外，腺病毒及卡波西肉瘤病毒也可以通过降解p53，抑制细胞凋亡[25-26]。
6 总结
目前抗病毒的药物主要针对病毒酶（包括蛋白酶和逆转录酶）和病毒连接物。虽然抗逆转录病毒的疗效显著，但是抗逆转录病毒药物最大的缺点是使病毒出现高突变率，尤其是逆转录药物仅仅抑制病毒复制，病毒可以以低水平在感染的细胞内潜伏。许多病毒可以利用UPP而促使病毒出芽、调控病毒转录、下调细胞表面免***分子、降解抗病毒蛋白、抑制细胞凋亡等方式在宿主内生存、增殖，因此，从UPP角度探讨抗病毒***药物，为降低病毒突变率提供了新思路。
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（收稿日期：2014-01-10 本文编辑：许俊琴）