学文网摘要：目的 建立高效液相色谱法测定肺宁合剂中的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法。方法 色谱柱为Hedera ODS2柱（4.6 mm×200 mm，5 ?m），流动相为0.1%磷酸溶液-乙腈（95∶5），测定波长为207 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃。结果 盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分别在0.008 064～0.096 77 ?g和0.004 112～0.049 34 ?g范围内呈良好的线性关系，r分别为0.999 1和0.999 5。平均加样回收率盐酸麻黄碱为97.51%，RSD=1.87%（n=6）；盐酸伪麻黄碱为96.30%，RSD=2.91%（n=6）。结论 该法结果准确，重现性好，可用于肺宁合剂的质量控制。
关键词：肺宁合剂；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱；高效液相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.12.020
中***分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）12-0054-02
Determination of Ephedrine and Pseudoephedrine in Feining Mixture by HPLC YANG Xiu-zhen （Jiangsu Provincial Hospital of TCM， Nanjing 210029， China）
Abstract：Objective To establish a method for determining ephedrine and pseudoephsdrine in Feining mixture by HPLC. Methods The Column was Hedera ODS-2 column （200 mm×4.6 mm， 5 ?m）. The mobile phase was 0.1% phosphate and acetonitrile （95∶5）. Detection wavelength was 207 nm and flow rate was 1.0 mL/min， the column temperature was 30 ℃. Results The ephedrine and pseudoephsdrine had good linear relationship in the range of 0.008 064-0.096 77 ?g （r=0.999 1） and 0.004 112-0.049 34 ?g （r=0.999 5）. The average recovery was 97.51% and 96.30% and RSD was 1.87% （n=6） and 2.91% （n=6） respectively. Conclusion The result was accurate， and reproducibility was good. The method can be used for the quality control of Feining mixture.
Key words：Feining mixture；ephedrine hydrochloride；pseudoephsdrine hydrochloride；HPLC
肺宁合剂是由炙麻黄、苦杏仁、前胡等中药组成的院内制剂，具有止咳化痰、宣肺平喘之效，临床主要适用于上呼吸道感染、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作、肺炎等引起的咳嗽。方中炙麻黄为君药，主要含有盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱[1]两种生物碱活性成分，均是发挥药效的有效成分，其中麻黄碱具有止咳作用，伪麻黄碱具有抗炎镇痛作用[2]。为控制药品的质量，保证临床用药的安全性和有效性，本试验采用高效液相色谱法（HPLC）测定麻黄碱和伪麻黄碱两种有效成分。
1 仪器与试药
LC-10AD高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-10A检测器，C-21色谱工作站；AG135型电子天平（瑞士梅特勒）。
盐酸麻黄碱对照品（批号171241-200506，供含量测定用）、盐酸伪麻黄碱对照品（批号171237-200806，供含量测定用）均来自中国药品生物制品检定所；供试品和阴性样品均来自江苏省中医院；甲醇（批号20100413162）、乙腈（批号AS1122-001）为色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Hedera ODS2柱（200 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：0.1%磷酸溶液-乙腈（95∶5）；进样量：10 ?L；流速：1.0 mL/min；检测波长：207 nm；柱温：30 ℃。
2.2 混合对照品溶液的制备
精密称得盐酸麻黄碱对照品10.08 mg和盐酸伪麻黄碱对照品10.28 mg，分别置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取以上盐酸麻黄碱对照品溶液2 mL和盐酸伪麻黄碱对照品溶液1 mL置于同一个50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每1 mL含盐酸麻黄碱8.064 ?g、盐酸伪麻黄碱4.112 ?g）。
2.3 供试品溶液的制备
准确量取样品合剂10 mL于100 mL量瓶中，加80 mL甲醇，超声处理（功率180 W，频率42 Hz）20 min，放冷，用甲醇定容至刻度，再精密吸取4 mL于25 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，0.45 ?m微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例和制法，制成缺炙麻黄的阴性样品，再按“2.3”项下方法操作，即得阴性对照溶液。
2.5 系统适应性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 ?L，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果供试品溶液色谱***中，呈现与对照品保留时间相同的峰，并且能达到基线分离；阴性对照溶液在对应的保留时间处无吸收峰，表明其他几味药对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的测定无干扰，表明该方法专属性较好，结果见***1。
2.6 线性关系考察
精密吸取上述混合对照品溶液1、2、4、8、10、12 ?L进样，依法测定。以各对照品进样量（?g）为横坐标，相应的对照品峰面积积分值为纵坐标，进行回归处理。回归方程分别为：盐酸麻黄碱Y=2 031 011X+1 099，r=0.999 1；盐酸伪麻黄碱Y=2 078 553X+98.11，r=0.999 5。结果表明，盐酸麻黄碱在0.008 064～0.096 77 ?g、盐酸伪麻黄碱在0.004 112～0.049 34 ?g范围内线性关系良好。
A
B
C
注：A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.盐酸麻黄碱；2.盐酸伪麻黄碱
***1 肺宁合剂HPLC***
2.7 精密度试验
精密取混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，进样量10 ?L，记录色谱***，结果盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱峰面积RSD分别为1.92%、1.04%，均小于3%，表明仪器的精密性良好。
2.8 稳定性试验
精密取同一批供试品（批号20110118）溶液分别于0、1、2、5、6、8 h进样10 ?L，按上述色谱条件测定，结果盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD值分别为1.75%、1.63%，表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.9 重复性试验
取同一批样品（批号20110118）共6份，精密称定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果测得盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD值分别为1.12%、1.56%，均小于3%，表明重复性良好。
2.10 加样回收率试验
精密吸取同一批（批号20110118）已知含量的样品5 mL共6份，置锥形瓶中，各精密加入浓度为0.530 3 mg/mL的盐酸麻黄碱对照品溶液1 mL和浓度为0.203 5 mg /mL的盐酸伪麻黄碱对照品溶液1 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，然后按照色谱条件测得样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，并计算加样回收率，结果见表1、表2。表明盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱在该试验条件下，加样回收率良好，符合测定要求。
表1 盐酸麻黄碱加样回收率试验结果
测得量
（mg） 原有量
（mg） 加入量
（mg） 回收率
（%） 平均回收率
（%） RSD
（%）
1.045 3 0.541 6 0.530 3 95.00
1.052 3 0.541 6 0.530 3 96.30
1.058 3 0.541 6 0.530 3 97.42 97.51 1.87
1.066 3 0.541 6 0.530 3 98.91
1.073 1 0.541 6 0.530 3 100.14
1.057 7 0.541 6 0.530 3 97.32
表2 盐酸伪麻黄碱加样回收率试验结果
测得量
（mg） 原有量
（mg） 加入量
（mg） 回收率
（%） 平均回收率
（%） RSD
（%）
0.397 7 0.203 6 0.203 5 95.38
0.400 5 0.203 6 0.203 5 96.75
0.404 5 0.203 6 0.203 5 98.70 96.30 2.91
0.387 5 0.203 6 0.203 5 90.31
0.397 8 0.203 6 0.203 5 95.36
0.397 7 0.203 6 0.203 5 95.37
2.11 样品含量测定
取3批肺宁合剂样品各10 mL，按照供试品溶液制备的方法制备，每份进10 ?L，测定其中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，结果见表3。
表3 样品含量测定结果（mg/mL）
批次 盐酸麻黄碱 盐酸伪麻黄碱
20110118 0.108 3 0.040 72
20110426 0.110 2 0.042 91
20110630 0.109 0 0.040 11
3 讨论
由于样品溶液为水提醇沉的混合物，杂质基本除去，所以，可以采用甲醇超声处理即可，处理方法简便。HPLC测定时，发现盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的液相色谱峰相邻，考察了0.1%磷酸-乙腈不同比例（92∶8、89∶11、86∶14）的液相条件，发现效果均不佳，两峰分离度不好，运用本试验色谱条件（0.1%磷酸∶乙腈=95∶5）能够使两峰的分离度达到1.5以上。
HPLC测定麻黄碱和伪麻黄碱的文献很多[3-4]，本试验建立的HPLC含量测定方法，可在同一色谱条件下同时测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱两种指标性成分，方法简便、准确、重复性好，为肺宁合剂质量控制提供了依据，同时可为含有相同药材的中药复方制剂定性定量方法的确定提供参考。
参考文献：
[1] 李俐，陈坚.麻黄及其有效成分的研究进展[J].***医科大学学报， 2003，26（6）：606-608.
[2] 刘惠***，陈睿，王娟.HPLC测定宣肺清热合剂中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱含量[J].华西药学实践杂志，2010，28（3）：199-200，205.
[3] 张丽，吴凌.HPLC法测定肺炎合剂中盐酸麻黄碱的含量[J].陕西中医学院学报，2011，34（3）：75-76.
[4] 朱春健.RP-HPLC法测定镇咳合剂中盐酸麻黄碱的含量[J].药学与临床研究，2007，15（2）：160-162.
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