学文网摘 要：目的：建立大雪枣中环磷酸腺苷的含量测定方法，并与金丝小枣进行对比。方法：采用DiamonsilTMC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为：0.05 mol/L KH2PO4-甲醇（90∶10）；流速：1mL/min；检测波长：254nm。结果：环磷酸腺苷在0.1 ~1.0 μg范围内呈良好线性关系(r=0.9990)，平均回收率为98.04%，RSD为1.79%（n=6）。结论：本方法快捷简便、结果准确可靠，可作为大雪枣中有效成分的质量控制方法，大雪枣中环磷酸腺苷含量与金丝小枣相当，产量更大更适合于开发利用。
关键词：大雪枣；金丝小枣；环磷酸腺苷；高效液相法
中***分类号：R284.2
文献标识码：A文章编号：
1673-7717（2008）05-1021-02
Comparison of cAMP Content in Big Snow Jujube and Zizyphus Jujube
HAN Liwen, LIU Kechun, DANG Li, WANG Sifeng, WANG Xue, HOU Hairong（
Biology Institute of Shandong Academy of Sciences, Drug Screening
Platform of Shandong Academy of Sciences, Jinan 250014, Shandong，China
）
Abstract：Objective:To determine and compare the content of cyclic adenosine-3',5'-monophosphospate(cAMP) in Big Snow Jujube and Zizyphus Jujube by HPLC. Methods: cAMP was separated on DiamonsilTMC18（250mm×4.6 mm,5μm）, the moble phase consisted of 0.05 mol/L KH2PO4-methol（90∶10）at a flow rate of 1.0 mL/min,the detective wavelength was 254 nm. Results：The average recovery of cAMP was 98.04%( RSD=1.79%,n=6). Conclusion:The method is reproducible, accuracy,and suitable for the quality evaluation of Big Snow parative of Zizyphus Jujube, the Big Snow Jujube was more suitable for development and utilization.
Keywords：Big Snow Jujube; Zizyphus Jujube; cAMP; HPLC
通讯作者：刘可春（1964-），男，研究员，博士，研究方向：天然药物筛选及新药开发。
环磷酸腺苷（cyclic adenosine-3',5'-monophosphospate，简称cAMP）是细胞内参与调节物质代谢和生物学功能的重要物质，是生命信息传递的“第二信使”，对细胞内多种代谢途径产生影响，主要表现为抑制DNA合成，诱导细胞的分化和凋亡等。临床医学研究外源性的环磷酸腺苷制剂具有改善心肌缺氧、扩张冠脉、增强心肌收缩力、增加心排血量等作用，可用于心绞痛、急性心肌梗死的辅助***。
环磷酸腺苷也是枣果中最重要的生物活性物质之一，但是不同品种的枣含量差异较大。大雪枣属鼠李科枣属，无刺枣树种的一个晚熟树种，主要分布在山东省的平邑、蒙阴、沂水三县，是一个特大型、晚熟、质优、珍贵的地方良种。因其成熟期在“立冬”至“小雪”之间，故名雪枣。大雪枣果实个大，色艳，又耐贮藏，产量大，经济价值也很高。为配合当地开发利用这种宝贵资源，笔者建立了高效液相法测定大雪枣中环磷酸腺苷的测定方法，并将大雪枣和著名的金丝小枣进行了比较，考察大雪枣的开发利用价值。
1仪器与试药
美国安捷伦1100型高效液相色谱仪(含四元梯度泵、***真空脱气机、柱温箱、紫外检测器、色谱工作站)。
环磷酸腺苷对照品（ACROS公司,225805000）；大雪枣（产自山东沂水县）；金丝小枣（产自山东无棣县）；甲醇
为色谱纯；水为超纯水；磷酸二氢钾为分析纯。
2色谱条件
DiamonsilTMC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为：0.05 mol/L KH2PO4-甲醇（90∶10）；流速：1mL/min；检测波长：254nm。环磷酸腺苷在该条件出峰时间为23.9min，样品色谱***中环磷酸腺苷分离度良好，见***1。
3方法与结果
3.1对照品溶液的制备精密称取环磷酸腺苷对照品1.0mg，置10mL刻度试管中，先加少量水溶解，再定容至刻度，制备成每毫升溶液中含有0.10mg的对照品溶液。
3.2样品供试液的制备取新鲜大雪枣切片，精密称取10g，用100mL沸水提取3次，提取时间分别为30、20、10min，合并提取液，离心（5000r/min）15min，取上清液减压浓缩至25mL，过0.45μm微孔滤膜即得。
3.3线性关系考察精密称取对照品环磷酸腺苷1.0mg用水溶于容量瓶中，并定容至10mL，分别精密吸取对照品溶液10、20、40、60、80、100μL并加入水90、80、60、40、0μL稀释至100μL，取10μL注入高效液相色谱仪，测定环磷酸腺苷峰面积，以进样量(X,μg)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，计算得回归方程为：Y=18999X-4570，相关系数r=0.9990。表明环磷酸腺苷在0.1 ~1.0μg范围内呈良好线性关系。
3.4精密度试验取浓度为0.06mg/mL的环磷酸腺苷对照品溶液，重复进样5次，每次进样10μL，测定环磷酸腺苷峰面积，计算RSD为0.9%（n=5）。
3.5重复性试验称取雪枣样品，按照“3.2”项下平行制备样品供试液5份，分别进样 10μL，测定环磷酸腺苷峰面积，样品中环磷酸腺苷平均含量为0.035mg/g，RSD为2.2%（n=5）。
3.6 稳定性试验将“3.2”项下新制备的样品供试液1份，在室温下放置，于0、0.5、1、1.5、2d分别进样 10μL，测定环磷酸腺苷峰面积，计算RSD为2.0%（n=5）。表明样品供试液中环磷酸腺苷在2天内基本稳定。
3.7回收率试验采用加样回收法，称取已知环磷酸腺苷含量的样品6份,每份5g，精密称定，分别按照80%、100%、120%的比例加入环磷酸腺苷对照品，按“3.2”项下方法制备供试液，分别进样分别进样 10μL，测定环磷酸腺苷峰面积，结果见表1，平均回收率为98.04%，RSD为1.79%（n=6）。
3.8样品含量测定称取新鲜大雪枣样品，按照“3.2”项下平行制备样品供试液，分别进样 10μL，测定环磷酸腺苷峰面积，同时取浓度为0.06mg/mL的环磷酸腺苷对照品溶液进样10μL，按照上述条件测定，以外标一点法计算鲜枣样品中环磷酸腺苷的含量。同时取新鲜雪枣样品按照2005版《中华人民共和国药典》一部“附录ⅨH水分测定法”中烘干法测定样品中含水量[1]，得到雪枣干品中的环磷酸腺苷含量。另取新鲜金丝小枣，同上法处理，结果见表2。
4讨论
枣中含有大量糖分，用沸水提取时所得提取液非常黏稠，无法直接注入液相进行分析，所以将提取液进行离心处理，考察转速和离心时间，确定为5000r/min离心15min可满足高效液相测定要求。
大雪枣是近几年沂蒙山区新培育的一个优良枣品种，与金丝小枣相比，单果重达52g，而且产量大，盛果期亩产一般可达3000kg以上。有研究报道金丝小枣中环磷酸腺苷在各类枣中含量相对较高[2]。对于大雪枣，从鲜枣的含量来看，环磷酸腺苷与金丝小枣基本相同，而由于鲜金丝小枣含水量较大，所以在去除水份后的绝干枣中，大雪枣环磷酸腺苷含量低于金丝小枣。由于大雪枣产区主要集中在山东沂蒙山区，生食口感较差，远远不及山东本地的金丝小枣或冬枣，所以当地***府正在加大力度对大雪枣进行开发利用。本文对大雪枣中环磷酸腺苷含量进行了考察，含量测定方法学考察全面合理，并与山东本地著名的金丝小枣进行对比研究，结果表明大雪枣中环磷酸腺苷含量与金丝小枣相当，而且产量大，非常有利于开发利用，可制成富含环磷酸腺苷的各类制剂，甚
至环磷酸腺苷单体制剂，这将为提高雪枣产品附加值，带动当地经济，增加当地农民收入起到重要作用。
参考文献
[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典•一部[S].北京：化学工业出版社，2005：附录47.
[2]史红梅,尹卓容,蒋文强.高压液相色谱法测定金丝小枣环磷酸腺苷的含量[J].食品科学,2006,27(5):216-218
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