学文网[摘要] 目的 探讨胃癌患者外周血中CD3+CD4-CD8-（DNT）细胞及T淋巴细胞亚群的表达及临床意义。 方法 利用流式细胞仪对43例胃癌、36例健康人外周血中的DNT细胞及T细胞亚群进行检测，并对比分析两者的差异。 结果 胃癌患者DNT细胞百分比（9.11±5.56）%明显高于正常对照组（4.84±1.43）%（P ＜ 0.01），胃癌患者CD4+%、CD4+/CD8+比值低于正常对照组（P均＜ 0.01），CD8+%高于正常对照组（P ＜ 0.01）。 结论 胃癌患者DNT细胞百分比显著升高及T淋巴细胞亚群比例改变，提示胃癌患者免***功能异常，为胃癌发病机制研究及免******提供理论依据。
[关键词] 胃癌；DNT细胞；T淋巴细胞亚群
[中***分类号] R735.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）21-0088-02
胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，占消化道肿瘤的首位，在消化道恶性肿瘤死亡病例中，约有半数死于胃癌[1，2]。其发病率和死亡率不断上升，但其发病机制目前仍不清楚，因此早期诊断胃癌并及时选择合适的***方法非常重要。近年来的研究表明，细胞免***是机体抗肿瘤免***的主要方式，而T淋巴细胞及其亚群是细胞免***中的主要效应细胞。CD3+CD4-CD8-（double negative T cell，DNT）细胞是近年来新发现的一群免***调节性T细胞，它和CD4+CD25+调节T细胞一样，在免***调节和抑制、抗病毒、抗肿瘤、自身免***等方面都具有非常重要的作用[3，4]。为探讨细胞免***在胃癌患者发病过程中的作用，我们利用流式细胞仪对43例胃癌患者、36例健康人外周血中的DNT细胞及T细胞亚群进行检测，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
研究标本来源于2010年6月～2011年6月我院新入院的43例胃癌患者，男24例，女19例，年龄31～86岁，平均65岁；另选正常体检者36例作为健康对照组。两组性别、年龄经统计学处理差异无统计学意义，具有可比性。病例选择标准：所有胃癌患者均经病理确诊，未经放疗或化疗，近期无明显感染史，肝肾功能正常。
1.2 方法
1.2.1 试剂 PerCP-anti-CD3/FITC-anti-CD4/PE-anti-CD8三标记单克隆抗体购自美国贝克曼库尔特有限公司。
1.2.2 仪器 流式细胞仪为美国贝克曼库尔特有限公司生产的FC500型。
1.2.3 检测方法 选取胃癌患者及健康者外周静脉血1 mL，EDTA-K2抗凝。严格按照三标记单克隆抗体PerCP-anti-CD3/FITC-anti-CD4/PE-anti-CD8的使用说明书进行染色，染色后上流式细胞仪检测10 000个淋巴细胞。
1.3 统计学处理
采用SPSS 18.0统计学软件和Microsoft Excel 2003进行数据统计分析，各组资料测量结果以（x±s）表示。样本符合正态分布，其差异采用***样本t检验进行分析，P ＜ 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 胃癌患者DNT细胞分布
胃癌患者DNT细胞比例（9.11±5.56）%高于正常对照组（4.84±1.43）%，差异有统计学意义（P ＜ 0.01），见***1。胃癌患者DNT细胞流式散点***见***2C、2D，正常健康对照组DNT细胞流式散点***见***2A、2B。
***1 胃癌患者和正常对照组DNT细胞分布情况
注：以CD3/SSC设门圈定T淋巴细胞（***A，C）并应用于CD4-FITC/CD8-PE双参数散点***（***B，D）分析DNT细胞
***2 CD3+CD4-CD8-（DNT）细胞典型流式散点***
2.2 T细胞亚群分布
胃癌患者CD8+比例高于健康对照组，差异有统计学意义（P ＜ 0.01），胃癌患者CD4+比例、CD4+/CD8+比值均低于健康对照组，差异均有统计学意义（P ＜ 0.01）。见表1。＼
表1 胃癌患者T细胞和健康对照组T细胞亚群分布（x±s）
3 讨论
近年来CD4+CD25+调节T细胞广泛受到人们的关注，它在免***调节和抑制自身免***性疾病等方面都发挥了非常重要的作用，而DNT细胞这群新发现的免***调节细胞也具有免***抑制功能，有报道称它的免***调节作用强于CD4+CD25+调节T细胞[4，5]，DNT细胞可针对性地清除具有同样TCR特异性的已激活的CD8+细胞，并诱导抗原特异性免***耐受[6-8]。
本文实验结果显示胃癌患者DNT细胞比例明显高于健康对照组，这与徐利***等[9]在小鼠中的研究结果一致，提示DNT细胞的异常表达可能参与了胃癌疾病的发生、发展过程，它可能通过抑制CD8＋T淋巴细胞的抗肿瘤排斥反应，从而在体内起到了抑制抗肿瘤免***作用，但确切的作用机制目前还不清楚，有待于进一步研究。
胃癌的发生发展与机体的免***功能密切相关，当机体的免***功能下降时，机体的免***清除以及免***监视能力下降，使得肿瘤的发病率增高。
本实验结果显示胃癌患者组CD8+比例高于健康对照组，而CD4+比例、CD4+/CD8+比值均低于健康对照组，这与国内外报道一致[10-12]，这可能是机体内的免***平衡失调，造成恶性肿瘤患者的免***功能减退或受到抑制。
综上所述，DNT可能参与了胃癌的发病机制，深入研究DNT细胞在胃癌发病机制中的作用，不仅可为胃癌发病机制研究提供新的思路，并能为胃癌的免***学***提供新的方法。
[参考文献]
[1] Persson C，Canedo P，Machado JC，et al. Polymorphisms in inflammatory response genes and their association with gastric cancer: A HuGE systematic review and meta-analyses[J]. Am J Epidemiol，2011，173（3）：259-270.
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