学文网摘要 目的：比较分析自配萋-纳氏氏冷染法、贝索结核菌染色液热染法、贝索染液结核菌染色液冷染法三种抗酸染色法的优缺点。方法：抽取68例确诊肺结核患者晨痰，分别进行三种抗酸染色，比较结核分枝杆菌阳性检出率。结果：配萋-纳氏染色法检出的阳性例数为65例（95.6%）;贝索结核菌染色液热染法检出阳性例数67例（98.5%）;贝索结核菌染色液冷染法阳性例数为65例（95.6%），经x2 test R×C table 检验，x2值：P值均>0.05，差异无统计学意义;做x2 test R×C table 检验各级结果阳性P值均>0.05，，差异无统计学意义。结论：贝索结核菌冷染法对痰标本查抗酸杆菌有良好的实用价值，值得临床推广。
关键词 萋-纳氏氏冷染法;贝索结核菌染色液热染法;贝索染液结核菌染色液冷染法;结核分枝杆菌
结核病目前已经成为全球严重的公共卫生问题和重大的经济社会问题。据世界卫生组织估计，全球每年新发结核病患者880万例，其中传染性结核病患者390万例，每年因结核病死亡的患者约200万人。我国患者人数仅次于印度居全球第二。目前抗酸染色常为碱性复红法既称萋-纳氏（Zieh1-Neelsen）法。我实验室于去年将沿用自配萋-纳氏氏染液换为市售珠海贝索生物技术有限公司结核菌染色液（冷染法），该试剂也可用于加热染色，遂将两种试剂三种方法进行比较，优缺点报道如下。
1 材料
1.1 标本来源 我县各区县级医68例确诊肺结核患者晨痰。
1.2实验试剂 严格按照第三版《全国临床检验操作规程》自配痰均质化液，自配萋-纳氏染液， 珠海有限公司贝索结核菌染色液（冷染法），
1.3 显微镜：日本OLYMPUS CHK2-F-GS显微镜
2 方法
2.1 痰前处理 每份标本加入等体积1%胰酶消化液，放置37℃孵箱静置90分钟后涡旋充分震荡1分钟。3000ri/min离心5min，取底层痰液30ul涂布于3张洁净玻片，面积约10×20mm椭圆形痰膜。紫外线消毒三十分钟。自然干燥后火焰固定。
2.2 自配萋-纳氏氏冷染法 1）放置玻片架，滴加石炭酸复红液覆盖痰膜以不溢出玻片为限。酒精灯置于玻片架下20cm处徐徐加热，至蒸汽出现。若染液蒸发减少，续加染液。加热5分钟，待标本冷却后，水洗。加脱色液3%盐酸酒精摇动玻片至无红色脱出为止，水洗;吕氏美兰溶液复染1分钟，水洗。
2.3 贝索结核菌染色液热染法 1）滴加R1石碳酸复红溶液，同2.2法加热。2）R2酸性酒精溶液脱色至无红色脱出，水洗。3）R3亚甲基蓝溶液复染30秒，水洗。
2.3贝索染液结核菌染色液冷染法：1）滴加R1石碳酸复红溶液15分钟。2）R2酸性酒精溶液脱色至无红色脱出。3）R3亚甲基蓝溶液复染30秒，水洗。
2.4 镜检 日本OLYMPUS CHK2-F-GS显微镜，100倍油镜镜检。蓝色背景下结核分枝杆菌呈红色，其他细胞及细菌均为蓝色。
2.5 报告方式
阴性：观察300个视野未查见抗酸杆菌
弱阳性：1-2条/300个视野
阳性（1+）：3-9条/100个视野
阳性（2+）：1-9条/10个视野
阳性（3）：1-9条/每个视野
阳性（4+）：≥10条/每个视野
2.6 统计方法
采用spss19.0统计软件，做x2 test R×C table 检验，P>0.05无统计学意义。
3 结果
三种方法染色后镜检结果如下：
3.1三种方法总体检出率对比 自配萋-纳氏染色法检出的阳性例数为65例，阳性率：95，6%。贝索结核菌染色液热染法检出阳性例数67例，阳性率：98.5%。贝索结核菌染色液冷染法阳性例数为65例，阳性率：95.6%。经x2 test R×C table 检验，x2值：P值均>0.05，差异无统计学意义。
3.2三种方法各级阳性结果对比 做x2 test R×C table 检验各级结果阳性P值均>0.05，，差异无统计学意义。详见表1
表1三种方法各级阳性结果对比
结果
自配萋-纳氏染色液
贝索结核菌染色液
x2
P
热染法
冷染法
例数
阳性率
例数
阳性率
例数
阳性率
弱阳性
2
2.9
3
4.4
2
2.9
0.30
0.86
+
5
7.4
7
10.3
5
7.4
0.51
0.77
++
16
23.5
15
22.1
13
19.1
0.41
0.82
+++
28
41.2
26
38.2
29
42.6
0.28
0.87
++++
14
20.6
16
23.5
16
23.5
0.22
0.89
合计
65
95.6
67
98.5
65
95.6
1.18
0.55
4 讨论
目前结核分枝杆菌鉴定方法有萋-纳氏抗酸染色涂片显微镜检查、 发光二极管荧光显微镜检查、交叉引物恒温扩增结核病诊断技术 、夹层杯结核病诊断方法、环介导等温扩增诊断技术、结核分枝杆菌培养等方法。而基层医院最常开展的是萋-纳氏抗酸染色显微镜检查法。因分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，影响染料的穿入。传统萋-纳氏染色需要加温，才能让其作色。改良萋-纳氏抗酸染色液使用碱性品红加苯酚 ，易与抗酸菌酸形成复红-抗酸菌酸复合物，一但着色，由于菌壁脂质的存在即是强脱色剂也不易脱色。本实验通过对68例肺结核患者的标本均质化离心后分别做传统萋-纳氏染色，贝索结核菌染色液热染法，贝索结核菌染色液冷染法，从实验数据可看出三种方法的各级结果并无统计学差异。但传统萋萋-纳氏染色加热时温度不易精准掌控，易出现脱片，产生的酚气对实验者健康有危害等问题。而冷染法操作简便，褪色时间短，如市购还可减少试剂配制环节可能的误差，节省时间精力。综合上述，从本实验结果看只要标本前处理得当贝索结核菌冷染法对痰标本查抗酸杆菌有良好的实用价值，可代替我科沿用自配萋-纳氏染色剂。
参考文献 中国防痨协会基础委员会.结核病诊断实验规程[M].北京：中国教育文化出版社，2006：29-30. 路德源.医学微生物学（第五版）[J].北京：人民卫生出版社，2001：157. 蒙在杨，黄培胜.两种抗酸染色法对麻风分枝杆菌和结核分枝杆菌染色结果分析[J].国际检验医学杂志，2012，33（7）：85-86.
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