学文网白细胞介素篇1
Induction of secretion of interleukin8 from lung epithelial cells by trypsin
【Abstract】 AIM: To investigate the actions of trypsin on the secretion of interleukin8 (IL8) from human lung epithelial cells. METHODS: A549 cells were cultured in a 12well culture plate. The challenge was performed by adding various concentrations of trypsin or trypsin inhibitor into each well， respectively. After 2 h， 8 h or 16 h， the reactions were terminated by removing the supernatant from each well. A sandwich ELISA was used to determine the levels of IL8 in supernatants. RESULTS: Following 16 h incubation， trypsin induced the secretion of IL8 in a concentration dependent manner. As low as 1 μg/L trypsin was able to induce IL8 release from epithelial cells and the maximum of accumulated release of IL8 was observed with 3 μg/L trypsin， which was 5fold more than the baseline release. However， when trypsin concentration increased over 3 μg/L， the extent of increased secretion of IL8 decreased. Soybean trypsin inhibitor (SBTI) and α1antitrypsin (α1AT) inhibited trypsin induced secretion of IL8. The time course showed that the actions of trypsin initiated at 2 h and reached their peak at 16 h. CONCLUSION: Trypsin is a potent secretogogue of IL8 release from cultured human lung epithelial cells， indicating that it is likely to be involved in the pathophysiological process of airway inflammation.
【Keywords】 trypsin；epithelial cells; interleukin8; lung
【摘要】 目的： 探讨胰蛋白酶对人上皮细胞白细胞介素8（IL8）分泌的影响. 方法： 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内，并分别用不同浓度的胰蛋白酶和/或胰蛋白酶抑制剂进行刺激. 刺激时间为2 h、8 h和16 h. 用ELISA方法检测上清液中的IL8水平. 结果： 经过16 h的培养，胰蛋白酶可引起浓度相关性IL8释放，胰蛋白酶在浓度1 μg/L时就可引起IL8的释放量增加，3 μg/L时诱导IL8的释放量达高峰，为基础分泌量的5倍，但随着胰蛋白酶浓度的增加，IL8的释放量反而下降. 胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导IL8释放的作用. 时间相关曲线表明，胰蛋白酶从2 h起即可引起IL8释放，16 h达高峰. 结论： 胰蛋白酶可促进人肺上皮细胞分泌IL8，表明它能积极参与呼吸道的炎症过程.
【关键词】 胰蛋白酶；上皮细胞；白细胞介素8；肺
0引言
蛋白酶激活受体（protease activated receptor， PAR）属G蛋白耦联受体家族中的亚类，目前有PAR14 4个成员组成，PAR2可在人呼吸道上皮细胞和多种呼吸道肿瘤上皮细胞系表面表达［1-5］. 胰蛋白酶主要由胰腺分泌，在体内主要参与肠道消化功能. 最近研究表明，胰蛋白酶还是PAR2的激动剂，胰蛋白酶在人PAR2的R34?S35LIGKV处切断受体的N末端暴露系锁配体SLIGKV，从而激活PAR2参与肺部炎症［6］，而PAR2的缺乏可以降低气道炎症反应［7］. 因此，我们利用人肺癌上皮细胞系A549细胞探讨胰蛋白酶对上皮细胞IL8分泌的影响.
1材料和方法
1.1材料
胰蛋白酶、大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)、α1抗胰蛋白酶(α1AT)、青、链霉素均购于Sigma公司，DMEM 培养液、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶EDTA消化液均购自Gibco公司.
1.2方法
1.2.1细胞培养人肺癌上皮细胞系A549细胞（购自中国科学院上海细胞研究所）接种于50 mL培养瓶内，用DMEM完全培养液（含100 g/L FBS， 10×104 U/L青霉素和100 mg/L链霉素），于37℃，50 mL/L CO2培养箱中培养.
1.2.2上皮细胞激发实验待细胞铺满瓶底后，用2.5 g/L胰蛋白酶EDTA消化液消化，将获得的细胞分种于12孔培养板各孔内，用1 mL完全培养液培养至细胞相互融合后，换无血清培养液培养16 h. 然后向每孔的细胞内加入不同浓度的胰蛋白酶和/或胰蛋白酶抑制剂进行激发实验. 胰蛋白酶抑制剂和胰蛋白酶加入细胞前在冰上孵育30 min，细胞培养2， 8和16 h后收集上清液，离心后于-80℃冻存. 全部实验为双样，每组实验均重复5次.
1.2.3细胞上清IL8水平检测用人IL8 ELISA检测试剂盒（Biosource）， 检测细胞上清液中的IL8水平，并用酶标仪 (Molecular Devices公司) 于450 nm波长处测定吸光度（A）.
统计学处理： 数据以x±s表示，采用SPSS(11.0版)软件进行单因素方差分析，组间方差不齐时采用非参数秩和检验. P
2结果
2.1胰蛋白酶对肺上皮细胞系IL8释放的影响经过16 h的培养，胰蛋白酶可引起浓度相关性IL8释放增加， 胰蛋白酶1 μg/L时就可引起IL8释放量增加， 3 μg/L时达高峰，为基础分泌量的5倍，但随着胰蛋白酶浓度的再增加， IL8的释放量反而下降 （Fig 1）. 时间关系曲线显示，胰蛋白酶引起A549细胞分泌IL8从2 h起就有所增加，16 h增加最显著（Fig 2）.
2.2胰蛋白酶抑制剂对胰蛋白酶诱导释放IL8的抑制作用胰蛋白酶抑制剂和胰蛋白酶与A549细胞共同培养16 h后结果显示：SBTI在浓度为10和30 mg/L时可分别抑制胰蛋白酶诱导的A549细胞释放IL8的作用（Fig 3）. α1AT在浓度为10 mg/L也能抑制胰蛋白酶引起的IL8释放（Fig 4）.
3讨论
研究表明，PAR2激活能介导气管平滑肌的收缩、促进炎症性细胞的游走和血管的通透性增加，介
n=5. bP
导嗜酸性粒细胞的浸润［8］，调节血管舒张与收缩，调节消化道和皮肤的功能等［9］. 呼吸道上皮细胞PAR2的激活还可导致基质金属蛋白酶（MMP9）［10］、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）［1，2］、酸性粒细胞趋化因子［4］、前列腺素E2（PGE2）、白细胞介素（IL）6等［4］细胞因子的释放，提示PAR2可能参与气道的炎症和重塑. 激活PAR2的蛋白酶主要有胰蛋白酶、肥大细胞类胰蛋白酶及凝血因子Ⅶa， Xa［11］.
我们的研究表明，胰蛋白酶对呼吸道上皮细胞IL8的分泌有显著促进作用，表明胰蛋白酶能通过激活PAR积极参与呼吸道的炎症过程，间接证明了PAR在哮喘和慢性阻塞性肺疾病的发病过程中起着一定的作用. 胰蛋白酶可引起肺上皮细胞高达5倍的IL8释放，表明它对IL8的释放促进作用是高效的. IL8的释放量高达1.7 μg/L，达到了IL8发挥其生理和病理生理功能的浓度. 胰蛋白酶抑制剂SBTI对胰蛋白酶诱导IL8释放的抑制作用，表明胰蛋白酶的作用是通过其水解活性实现的，也表明胰蛋白酶抑制剂可能有抗炎作用. α1抗胰蛋白酶对胰蛋白酶诱导的IL8释放也具有抑制作用，它作为机体内源性的胰蛋白酶抑制剂可能在呼吸道的抗炎反应机制中起一定作用.
从时间关系曲线上看，胰蛋白酶对IL8分泌的刺激作用是一个比较缓慢的过程，这可能表明分泌出的IL8是由上皮细胞新合成的，而不是原有贮存的IL8的单纯释放.
我们发现，A549细胞系可同时表达PAR14四种受体［12］，而胰蛋白酶既可酶切PAR2又可酶切PAR4从而激活受体，因此，胰蛋白酶引起的肺上皮细胞IL8的释放，是单纯由PAR2或PAR4介导还是PAR2与PAR4同时参与，值得进一步探讨.
【参考文献】
［1］ Vliagoftis H， Befus D， Hollenberg MD， et al. Airway epithelial cells release eosinophil survivalpromoting factors (GMCSF) after stimulation of proteinaseactivated receptor 2 ［J］. J Allergy Clin Immunol， 2001;107(4):679-685.
［2］ Sun G， Stacey MA， Schmidt M， et al. Interaction of mite allergens Der p3 and Der p9 with proteaseactivated receptor2 expressed by lung epithelial cells ［J］. J Immunol， 2001;167(2):1014-1021.
［3］ Asokananthan N， Graham PT， Fink J， et al. Activation of proteaseactivated receptor (PAR)1， PAR2， and PAR4 stimulates IL6， IL8， and prostaglandin E2 release from human respiratory epithelial cells ［J］. J Immunol， 2002; 168(7):3577-3585.
［4］ Cocks TM， Fong B， Chow JM， et al. A protective role for proteaseactivated receptors in the airways ［J］. Nature， 1999; 398 (6723):156-160.
［5］ Miotto D， Hollenberg MD， Bunnett NW， et al. Expression of protease activated receptor2 (PAR2) in central airways of smokers and nonsmokers ［J］. Thorax， 2002; 57(2):146-151.
［6］ Vergnolle N， Wallace JL， Bunnett NW， et al. Proteaseactivated receptors in inflammation， neuronal signaling and pain ［J］. Trends Pharmacol Sci， 2001; 22 (3):146-152.
［7］ Lindner JR， Kahn ML， Coughlin SR， et al. Delayed onset of inflammation in proteinaseactivated receptor2deficient mice ［J］. J Immunol， 2000; 165(11):6504-6510.
［8］ Schmidlin F， Amadesi S， Vidil R， et al. Expression and function of proteinaseactivated receptor 2 in human bronchial smooth muscle ［J］. Am J Respir Crit Care Med， 2001;164(7):1276-1281.
［9］ Macfarlane SR， Seatter MJ， Kanke T， et al. Proteinaseactivated receptors ［J］. Pharmacol Rev， 2001; 53(2):245-282.
［10］ Vliagoftis H， Schwingshackl A， Milne CD， et al. Proteinaseactivated receptor2mediated matrix metalloproteinase9 release from airway epithelial cells ［J］. J Allergy Clin Immunol， 2000; 106 (3):537-545.
白细胞介素篇2
因子及其他炎性介质,从而导致肾脏免***损害。白细胞介素-6与急性肾小球肾炎、原发性肾病综合征、IgA肾病、紫癜性肾炎、狼疮性肾炎、慢性肾炎等疾病有相关性,本文主要是对白细胞介素-6在肾小球疾病中的作用进行综述。
[关键词] 白细胞介素-6;肾小球疾病;炎性介质;免***损害
[中***分类号] R692.6 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2010)06(a)-014-02
白细胞介素-6主要由单核巨噬细胞合成,肾脏的固有细胞如系膜细胞、上皮细胞、内皮细胞亦可合成,其分子量为21～26 KD。白细胞介素-6是具有多种生物活性的细胞因子,是炎性反应的诱导者。白细胞介素-6在肾小球疾病中的表达与肾小球的数目呈正相关,还可刺激系膜细胞产生血小板活化因子及其他炎性介质,从而导致肾脏免***损害的进一步发展。
1 白细胞介素-6与急性肾小球肾炎(AGN)的关系
余建莉等[1]研究发现急性肾炎急性期和肾功能不全的患儿血清白细胞介素-6水平明显增高,认为白细胞介素-6对AGN患儿有无感染及病情轻重的评估有一定的意义,且白细胞介素-6参与了急性肾炎的病理过程,同时认为白细胞介素-6增高标志着免***系统的激活,可作为检测急性肾炎病情严重程度的指标。
2 白细胞介素-6与原发性肾病综合征的关系
原发性肾病综合征是以T细胞紊乱为主导致免***紊乱的一种肾小球疾病,细胞因子中白细胞介素-6是较具有代表性的TH2类的细胞因子,同时白细胞介素-6还可影响肾病综合征基底膜的结构和通透性,有研究发现激素敏感型血PBMC培养上清液中白细胞介素-6水平增高,而激素耐药型肾病综合征其白细胞介素-6水平不增高,所以康国贵等[2]研究认为检测白细胞介素-6水平可能对预测激素的疗效及调整***方案具有重要的意义。钟志敏等[3]发现细胞因子随病情的严重程度而变化,其中白细胞介素-6升高最明显,认为白细胞介素-6是判断肾病综合征疾病严重程度的敏感指标。
3 白细胞介素-6与IgA肾病的关系
白细胞介素-6可刺激肾小球系膜细胞增生,增加IgA的结合位点,可使IgA沉积增加从而导致肾脏损害,国外Bantis C[4]研究发现IgA肾病中白细胞介素-6基因G-174C表达具有多态性,并发现白细胞介素-6基因G-174C表达缺失导致IgA肾病的发生。另有Stangou M[5]研究发现尿白细胞介素-6水平较恢复期明显增高,与肾脏的病理损害呈正相关,并且为肾小管间质损害提供重要的信息。追踪8年的Harada K等[6]研究认为白细胞介素-6可预测肾脏疾病长期的进展,国内刘小平等[7]研究发现小鼠血清白细胞介素-6水平与IgA肾病的肾脏病理损害呈正相关,检测到血清白细胞介素-6与小鼠尿红细胞与尿蛋白的改变呈正相关,认为白细胞介素-6可间接反映肾组织病理损害程度。同时认为白细胞介素-6导致血IgA增多,从而导致肾脏免***复合物增加,最终导致肾脏损害。
4 白细胞介素-6与紫癜性肾炎的关系
白细胞介素-6作为前炎症因子对紫癜性肾炎肾小球起破坏作用。白细胞介素-6促使B细胞分化,使IgA分泌活跃,在肾脏沉积增加,导致肾脏损害。国外Watts RA等[8]研究发现紫癜性肾炎***前白细胞介素-6水平较***后增加。余振等[9]研究发现紫癜性肾炎血清白细胞介素-6水平急性期与缓解期均较对照组高,认为白细胞介素-6参与了紫癜性肾炎急性期的发病过程。且其活化的T细胞可分泌大量的白细胞介素、细胞因子如白细胞介素-6,炎性反应可加重血管内皮细胞的损害,而过敏性紫癜的病理改变为变态反应性小血管炎,主要是血管内皮功能障碍。
5 白细胞介素-6与狼疮性肾炎的关系
Hiroheta S等[10]发现狼疮性脑炎脑脊液中白细胞介素-6水平较血清中白细胞介素-6水平高。考虑系统性红斑狼疮病变时局部白细胞介素-6产生过多,认为狼疮性肾炎尿白细胞介素-6检测是较好的检测手段。白细胞介素-6抗体通过参与维持B细胞高活性状态的自分泌途径促使IgG自发性生成,而在狼疮性肾炎中表达。白细胞介素-6与狼疮性肾炎的活跃有关并被认为是狼疮性肾炎活动性的指标之一。Hash H等[11]减少MRL-Faslpr老鼠体内白细胞介素-6的生成,监测6个月白细胞介素-6水平,MRL-Faslpr老鼠白细胞介素-6的缺乏导致狼疮活跃性减低,减少了狼疮性肾炎的发病率。认为白细胞介素-6可导致未成熟的T细胞转化为毒性T细胞并抑制正常T细胞,且白细胞介素-6可使肾脏内皮细胞释放巨噬细胞,导致巨噬细胞浸润,故白细胞介素-6缺乏,导致狼疮性肾炎的发病率减少及狼疮的活跃性减低。
6 白细胞介素-6与慢性肾炎的关系
白细胞介素-6可促使系膜增生,导致肾脏血流动力学的改变,从而加速了肾小球的硬化过程,另外白细胞介素-6是肾小球细胞增殖自分泌信使,可促进肾小球系膜细胞的纤维化,肾衰竭患儿血白细胞介素-6水平显著升高,与患者是否接受血液净化无相关性,另有Panichi V等[12]研究发现25%的慢性肾衰竭患者出现血白细胞介素-6水平升高,其升高程度与肾功能呈负相关,Garibotto G等[13]研究发现外周组织骨骼肌释放白细胞介素-6在慢性肾炎中起了重要的作用。白细胞介素-6基因的多态性导致了慢性肾小球肾炎病情的进展,并且是加速病情进展至终末期肾病的***风险。并认为白细胞介素-6不仅是前炎性因子和炎性介质,还是具有多种作用的媒介,根据不同的疾病而表现出不同的炎性机制。
7 白细胞介素-6与其他肾小球损害
白细胞介素-6可作为急性胰腺炎肾损害的指标,原因是白细胞介素-6使血栓调节蛋白活性降低,加重肾缺血及血栓程度,还可导致其他炎性细胞分泌,直接导致肾脏损害。白细胞介素-6通过激活T、B细胞,加速细胞凋亡,促进胰岛细胞的破坏、系膜细胞的增殖导致糖尿病患者肾脏的损害。
总之白细胞介素-6是由肾小球固有细胞产生,同时又会加剧肾脏的损害,故希望通过减低血白细胞介素-6水平从而减轻肾小球疾病的损害,延缓病程,提高肾小球疾病患者的生活质量。
[参考文献]
[1]余建莉,张莲爱,黄壬秋,等.儿童急性肾小球肾炎血清白细胞介素-2,6,8变化及临床意义[J].广东医学,2001,22(1):47-48.
[2]康国贵,周江瑾,丁薇莎,等.原发性肾病综合征患儿血CD30阳性细胞和IL-6、IL-10的变化及其临床意义[J].浙江医学,2008,30(11):1185-1186.
[3]钟志敏,翁志媛,郝志宏,等.肾病综合征患儿血清中细胞因子测定的临床意义[J].江西医学检验,2004,22(1):17-19.
[4]Bantis C, Heering P, Aker S,et a1.Influence of Cytokine Gene Polymorphisms on IgA Nephropathy[J].Renal Failure,2008,30(2):135-140.
[5]Stangou M, Alexopoulos E, Papagianni A, et al.Urinary levels of epidermal growth factor,interleukin-6 and monocyte chemoattractant protein-1 may act as predictor markers of renal function outcome in immunoglobulin Anephropathy[J].Original Article,2009,14(6):613-620.
[6]Harada K, Akai Y, Kurumatani N,et al.Prognostic value of urinary interleukin 6 in patients with IgA nephropathy:An 8-Year follow-up study[J].Nephron,2002,92(4):824-826.
[7]刘小平,胡顺金,方琦.大鼠 IgA 肾病模型的建立及血清中IL-6、FN、NO 的检测[J].中国比较医学杂志,2008,18(1):5-8.
[8]Watts RA, Scott DG.Epidemiology of the vasculities[J].Current Opinion in Rheumatol,2003,15(1):11-16.
[9]余振,彭晓东.过敏性紫癜肾炎患儿血清IL-6 IL-8 MMP-9变化及意义[J].河北医学,2008,14(5):573-575.
[10]Hirohata S, Miyamoto T.Elevated levels of interleukin-6 in cerebrospinal fluid from patientswith systemic lupus erythematosus and central nervous system involement[J].Arthritis Rheum,1990,33(5):644-649.
[11]Cash H,Relle M,Menke J,et al.Interleukin 6(IL-6) deficiency delays lupus nephritis in MRL-Faslpr mice:The IL-6 pathway as a new therapeutic target in treatment of autoimmune kidney disease in systemic lupus erythematosus[J].The Journal of Rheumatology,2010,37(1):60-70.
[12]Panichi V,Migliori M,De Pietro S,et a1.Creactive pro-tein as a marker of chronic infl am mation in uremia patients[J].Blood Purif,2000,18(3):183-190.
白细胞介素篇3
关键词：肝素寡糖；人外周血T细胞；白介素-4；白介素-5
中***分类号：TQ464文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)11-0001-05
Effect of Heparin-Derived Oligosaccharides on Secretion of Interleukin-4 and Interleukin-5 from Human Peripheral Blood T Lymphocytes
JI Sheng-li1, ZHANG Yun-feng1, CUI Hui-fei1, SHI Feng1, CHI Yan-qing2, CAO Ji-chao1
(1. Institute of Biochemical and Biotechnological Drug, School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University, Jinan 250012, China; 2. Department of Pharmacy, Shandong Provincial Hospital, Jinan 250021, China)
Abstract：Objective To study the inhibitory effect of heparin-derived oligosaccharides (Oligs) on the secretion of IL-4 and IL-5 from human peripheral blood T lymphocytes (PBTLs). Methods Heparin was degraded by three different methods and low molecular weight heparins (LMWHs) were purified with gel-filtration chromatography in order to prepare Oligs. The PBTLs from ten patients with allergic eosinophilic gastroenteritis were treated with phytohemagglutinin (PHA) and Oligs, and the concentrations of IL-4 and IL-5 in the cell culture supernatant fluid were determined by ELISA. Results 5 μg/mL of Oligs samples could obviously inhibit the secretion of IL-4 and IL-5 from human PBTLs, while Oligs with different molecular weights（Mr）had different effects on the secretion of IL-4 and IL-5. A tetrasaccharide with Mr of 1 142 obtained by H2O2 degradation could most inhibit the secretion of IL-4, while a hexasaccharide with Mr of 1 806 obtained by beta-elimination could inhibit the secretion of IL-5 most. Conclusion The inhibitory effect of Oligs on the secretion of IL-4 and IL-5 from human PBTLs closely relates to their molecular structures and an essential structure exerts the inhibitory action. The most effective inhibitors on IL-4 and IL-5 secretion are tetrasaccharides and hexasaccharides, respectively.
Key words：heparin-derived oligosaccharides; human peripheral blood T lymphocytes; IL-4; IL-5
肝素是高度硫酸化的多聚阴离子糖胺聚糖，是由三硫酸双糖单位［-(IdoA2S)(14)-α-D- (GlcNS6S)-］聚合，兼有低硫酸化或多硫酸化的糖醛酸或氨基糖，平均相对分子质量（Mr）为12 000~15 000。肝素除有抗凝血作用外，还有抗炎作用，用于***溃疡性结肠炎和其它炎性肠病（inflammatory bowel disease, IBD）[1,2]。尽管有许多文献报道了肝素的抗炎活性，但很少有文献报道肝素分子的特殊结构对白介素-4（IL-4）和白介素-5（IL-5）的抑制作用。在过敏性嗜酸粒细胞性胃肠炎患者中IL-4和IL-5异常与IgE升高和嗜酸性细胞增多密切相关。提示以作用于T细胞的***策略可有效地***此类疾病。我们现试***研究Oligs的结构和它与抑制过敏性嗜酸粒细胞性胃肠炎患者外周血T细胞（PBTLs）分泌 IL-4和IL-5的关系。为此，以来源于10例过敏性嗜酸粒细胞性胃肠炎患者的PBTLs作为研究对象。
1材料与方法
1.1材料
肝素钠（东营天东生化工业公司）；30 %过氧化氢（莱阳经济技术开发区精细化学品公司）；亚硝酸钠（济南化学试剂公司）；苯索氯铵和4-氯-苄基氯（Sigma）；Superdex-30（Amersham UK）；人IL-4和IL-5试剂盒（Bender Medsystem USA）；植物凝集素（PHA上海依华医学科技公司）；RPMI 1 640（Gibco UK）。
1.2方法
1.2.1Oligs制备分别用过氧化氢氧化降解法、亚硝酸脱氨基断裂法和碱性β-消除降解法降解肝素。将降解产物用凝胶过滤色谱分离得Oligs。所用色谱柱为Superdex-30（26 mm×1 200 mm）。Oligs用0.25 mol/L 碳酸氢铵洗脱，冻干即得。
1.2.2Oligs Mr的测定用分子排阻高效液相色谱（HPSEC）[3]法在两个串联的Ultrahydroge l 250 (7.8 mm×300 mm) 柱上测定Oligs的Mr，以国际低分子肝素Mr标准品（Mr＝3 700）作对照，用示差检测器和紫外检测器串联（UV接柱，RI接UV）进行双检测器检测，流动相为pH 5.0的28.4 g/L硫酸钠，流速 0.5 mL/min。
1.2.3T细胞分离和培养25 mL过敏性嗜酸粒细胞性胃肠炎患者的外周血用EDTA抗凝，与25 mL PBS液（含5 %胎牛血清）混合。混匀后将稀释的外周血轻轻铺在50 mL淋巴细胞分离液面上。室温2 000 r/min离心20 min，收集外周血淋巴细胞（PBL），并用PBS液洗涤2次，将细胞悬于RPMI-1 640（含20 %胎牛血清）培养基中，1.0 mL PBL混悬液上尼龙棉柱（5 mm×16 mm），平放尼龙棉柱，加入0.2 mL含20 %胎牛血清的RPMI-1640封口，平置于37 ℃温箱中保温30 min。用RPMI-1 640（含20 %胎牛血清）液洗脱PBTLs，离心30 min（2 000 r/min）。 用RPMI-1 640（含20 %胎牛血清）培养基稀释至1×106 个/mL。0.2 mL 细胞稀释液加到96孔培养板中作空白对照，另一孔加含20 μg PHA的细胞稀释液作为PHA对照组，其它孔加入 含20 μg PHA细胞稀释液和1.0 μL 1. 0mg/mL肝素及Oligs。细胞在37 ℃，5 % CO2温箱中保温48 h。
1.2.4细胞因子的测定室温下收集细胞液，1 000 r/min离心10 min。根据ELISA试剂盒的说明书测定上层液体的细胞因子量。
1.3统计学分析
数据以x±s表示，用t检验和单因素方差分析处理。P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1Oligs的分离及其Mr
肝素降解后用凝胶过滤色谱分离得Oligs，结果见***1。标有数字的峰用于IL-4和IL-5的分泌抑制实验，其Mr见表1。
H、B和N 分别代表肝素用过氧化氢氧化降解法、碱性β-消除降解法和亚硝酸脱氨基断裂法降解的产品，进一步用Superdex-30分子排阻色谱（26 mm×1 200 mm）分离，用0.25 mol/L碳酸氢铵溶液洗脱，流速0.5 mL/min，流出液用咔唑法检测。
2.2Oligs抑制IL-4分泌的结果
Oligs抑制IL-4分泌的实验结果见***2、***3。
I、II和III分别代表空白对照组、PHA对照组和肝素组。3~8分别是表1的各寡糖组。a P
抑制作用最强的是OligH-5(P＜0.05)，a P＜0.05 vs OligH-4 组
***3Oligs的相对分子质量及它与抑制IL-4的关系
由***2、***3可见，所有的Oligs对IL-4分泌都有抑制作用。不同制备方法得到的Oligs和不同Mr的Oligs具有不同的抑制活性。（1）来自于过氧化氢降解的具有最强抑制活性的寡糖为OligH-5（Mr 1 142），该寡糖片段是一种四糖，能使IL-4含量由375.6±39.2 pg/mL（PHA 对照组）减至 12.5±5.7 pg/mL（P＜0.01）；（2）来自于β-消除 降解具有最强抑制活性的寡糖为OligB-5（Mr 1 344），一种四糖，能使IL-4含量减至54.4±6.3 pg/mL（P＜0.01）；（3）来自于亚硝酸降解的具有最强抑制活性的寡糖为OligN-5（Mr 1 107），一种四糖，使IL-4含量减至47.4±5.8 pg/mL（P＜0.01）。尽管它们都是四糖，其Mr不同是因它们结构中所含的硫酸基含量不同。与肝素组的抑制活性相比（IL-4 含量为152.4±17.9 pg/mL），上述寡糖都明显强于肝素。
2.3Oligs抑制IL-5分泌的结果
Oligs抑制IL-5分泌的实验结果见***4、***5。
I、II和III分别代表空白对照组、PHA对照组和肝素组。3~8分别是表1中的各寡糖组。a P＜0.05， b P＜0.01 vs PHA 对照组，c P＜0.05 vs OligH-4组（n=10）。
抑制作用最强的是OligB-4(P＜0.05)， a P＜0.05 vs OligH-4 组
***5Oligs的相对分子质量及它与抑制IL-5的关系
由***4、***5可见，Oligs抑制IL-5分泌的作用趋势与IL-4相似，但也有不同之处。（1）来自于过氧化氢降解的具有最强抑制活性的寡糖为OligH-4（Mr 1 786）和OligH-5（Mr 1 142），分别使IL-5的含量由89.2±33.4 pg/mL（PHA对照组）减至31.7±5.6 pg/mL和35.5±4.4 pg/mL；（2）来自于β-消除降解具有最强抑制活性的寡糖为OligB-4（Mr 1 804），一种六糖，使IL-5含量减至22.0±5.2 pg/mL (P＜0.01)；（3）来自于亚硝酸降解的具有最强抑制活性的寡糖为OligN-4（Mr 1 747），一种六糖，使IL-5含量减至69.2±6.3 pg/mL（P＜0.01）。它们的抑制活性都比肝素组强（P＜0.01）（***4），其中最强的是OligB-4（***5）。
3讨论
过敏性嗜酸粒细胞性胃肠炎的典型特征是IgE水平升高，IgE通过介导肥大细胞的高亲和性Fc受体（FcεRI）交联在过敏性IBD中发挥重要作用，进而导致许多前炎症调节因子（包括组胺、白三烯、细胞因子）释放（***6）。临床研究报道嗜酸粒细胞性胃肠炎患者的PBTLs分泌IL-4和 IL-5增多。而且，来源于嗜酸粒细-胞性胃肠炎患者十二指肠固有层的T细胞在受***蛋白刺激后，分泌以IL-4和IL-5为主的Th2细胞因子。IL-4可能在调节IgE依赖性过敏反应过程中起重要作用，因此，调节其产生或其作用可能在预防或者***急性超敏反应方面有用。IL-5对嗜酸粒细胞系特异性最强，并与嗜酸粒细胞选择性膨胀、从骨髓释放有关。嗜酸粒细胞颗粒包括一个主要碱性蛋白（MBP）组成的类晶体核和由嗜酸粒细胞阳离子蛋白（ECP）构成的基质[4]（***6）。这些阳离子蛋白质有共同的前炎症特性，但其他方面不同。MBP可以引发肥大细胞和嗜碱粒细胞脱颗粒。作为细胞因子、免***球蛋白和补体的受体触发嗜酸粒细胞可以产生许多炎症因子，包括IL-1、IL-3、IL-4、IL-5、IL-13、GM-CSF、转化生长因子(TGF)、TNF-α、RANTES、巨噬细胞炎症蛋白1α、血管内皮细胞生长因子和嗜酸细胞活化趋化因子-1， 表明这些因子有能力调节免***反应的多个方面。上述事实表明，调节IL-5的分泌和作用可能有助于预防***过敏综合征和炎症。
肝素除抗凝血和抗血栓外，还有其他生物活性如抑制补体激活、调节细胞增生、抑制新生血管生成和肿瘤生长以及抗病毒。在过去10年中，肝素和低分子肝素被广泛用于临床***IBD[5-8]。人们认为肝素能够***IBD的机制在于抑制中性粒细胞聚集[6]、减少前炎症细胞因子产生，恢复抗炎基因生长因子与其受体之间的高亲和性[2]。在IBD小鼠模型中也观察到肝素具有抑制中性粒细胞激活、黏附和趋化的作用，这意味着肥大细胞和中性粒细胞之间作用的平衡可能对IBD病程的发展非常重要。而且，未分级肝素具有潜在的免***调节功能，因此，将未分级肝素用于常规方法***无效的大肠炎或者局限性肠炎等疾病是有根据的。肝素的抗炎作用很可能归功于它可与许多肝素结合蛋白（如TNF-α、IL-4、IL-5、RANTES、分泌性白细胞蛋白酶抑制剂、中性粒细胞衍生的弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、嗜酸粒细胞衍生的MBP、L-选择素和P-选择素）[9]结合。此外，肝素还可特异性地抑制对一系列炎症细胞反应至关重要的三磷酸肌醇信号转导通路[10]。
当肝素用作抗炎药时，其出血副作用必须被有效控制。肝素的抗炎作用与其抗凝血作用无关[11，12]，尤其是用于***过敏性炎症时。用降解和部分脱硫酸基化等方法对肝素进行化学修饰的目的是获得肝素类衍生物的抗炎药。在此我们将肝素降解并用凝胶过滤色谱分离不同的片断，实验结果证明，这些寡糖片断用作抗炎剂具有发展前途[13]。我们还研究了肝素可能的抗炎机制（抑制IL-4和IL-5分泌），结果表明不同Mr的Oligs抑制IL-4和IL-5分泌的活性不同。抑制IL-4分泌活性最强的是四糖，但由于制备方法不同其Mr也不同，原因在于降解过程中脱硫酸基程度不同。在抑制IL-5分泌方面，亦有相同情况发生，不同的是活性最强的抑制因子是六糖，其原因有待进一步研究。
参考文献
[1]He S H. Key role of mast cells and their major secretory products in inflammatory bowel disease [J]. World J Gastroenterol, 2004, 10(3): 309-318 .
[2]Michell N P, Lalor P, Langman M J. Heparin therapy for ulcerative colitis? Effects and mechanisms [J]. Eur J Gastroenterol Hepatol, 2001, 13(4): 449-456.
[3]Guo X, Condra M, Kimura K, et al. Determination of molecular weight of heparin by size exclusion chromatography with universal calibration [J]. Anal Biochem, 2003, 312(1): 33-39.
[4]Gleich G J. Mechanisms of eosinophil-associated inflammation [J]. J Allergy Clin Immunol , 2000, 105(4):651-663.
[5]Head K A, Jurenka J S. Inflammatory bowel disease Part 1: ulcerative colitis-pathophysiology and conventional and alternative treatment options [J]. Altern Med Rev, 2003, 8(3):247-283.
[6]Alikhan R, Cohen A T, Combe S, et al. Prevention of venous thromboembolism in medical patients with enoxaparin: a subgroup analysis of the MEDENOX study [J]. Blood Coagul Fibrinolysis 2003, 14(4): 341-346.
[7]Papa A, Danese S, Gasbarrini A, et al. Review article: potential therapeutic applications and mechanisms of action of heparin in inflammatory bowel disease [J]. Aliment Pharmacol Ther, 2000, 14(11): 1403-1409.
[8]Koutroubakis I E, Sfiridaki A, Mouzas I A, et al. Resistance to activated protein C and low levels of free protein S in Greek patients with inflammatory bowel disease [J]. Am J Gastroenterol, 2000, 95(1): 190-194 .
[9]Fath M A, Wu X, Hileman R E, et al. Interaction of secretory leukocyte protease inhibitor with heparin inhibits proteases involved in asthma [J]. J Biol Chem, 1998, 273(22):13563-13569.
[10] Ahmed T, Syriste T, Mendelssohn R, et al. Heparin prevents antigen-induced airway hyperresponsiveness: interference with IP3-mediated mast cell degranulation?[J]. J Appl Physiol, 1994, 76(2): 893-901.
[11] Xie X, Rivier A S, Zakrzewicz A, et al. Inhibition of selectin-mediated cell adhesion and prevention of acute inflammation by nonanticoagulant sulfated saccharides. Studies with carboxyl-reduced and sulfated heparin and with trestatin a sulfate [J]. J Biol Chem, 2000, 275(44): 34818-34825.
[12] Kariya Y, Kyogashima M, Suzuki K, et al. Preparation of completely 6-O-desulfated heparin and its ability to enhance activity of basic fibroblast growth factor [J]. J Biol Chem, 2000, 275(34): 25949-25958.
白细胞介素篇4
1 il18生物学功能
1995年okamura等用热灭活的痤疮短棒菌苗致敏裸鼠，再注射脂多糖后从其肝细胞中分离出可诱导γ干扰素高水平表达的蛋白因子,曾命名为γ干扰素诱导因子。1996年，ushio等克隆出人类γ干扰素诱导因子的cdna，并于大肠埃希菌内成功表达，发现其氨基酸序列与已知任何蛋白质均不相同，故将其重新命名为白细胞介素（interleukin,il）18。多种器官、组织和细胞包括免***及非免***细胞均可产生il18，但主要由活化的单核巨噬细胞及肝枯否细胞等产生；在动脉粥样硬化（atherosclerosis, as）斑块内的巨噬细胞、内皮细胞及中膜平滑肌细胞中也有表达。il18具有复杂的生物学功能：最重要的是诱导辅助性t细胞、b细胞、单核细胞和nk细胞等多种细胞产生γ干扰素，而il12可显著加强该作用；il18单独可以促进th1淋巴细胞的分化及增殖，并产生il2及其受体、il8、单核细胞趋化蛋白1、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子等细胞因子；在有il2存在时，il18也可刺激原始t淋巴细胞转变为th2 淋巴细胞表型并产生il13、il4等因子；il18还可以诱导细胞毒性t淋巴细胞及nk细胞表达fas配体，促进nk细胞分泌穿孔素，增强细胞毒效应；此外，肥大细胞和嗜碱性粒细胞均有il18rα的表达，在il18和il3的刺激下可大量生成il4和il13。Www.133229.cOm
2 il18与as危险因素
在肥胖、糖尿病（diabetes mellitus, dm）、高血压、吸烟、代谢综合征（metabolic syndrome,ms）等as危险因素的发生发展中，均渗透着炎症反应。近年来研究已经证实，il18参与as的发生发展。同时还发现il18与as危险因素密切相关，可能参与他们的发生发展或伴随其中。
2.1 il18与肥胖、糖尿病
目前认为肥胖症和2型dm（t2dm）发生发展过程中均伴有慢性低度炎症反应，其患者血清c反应蛋白（creactive protein, crp）等炎症标志物上升。近年来的研究表明il18与肥胖、胰岛素抵抗（insulin resistance,ir）及dm密切相关。肥胖患者血清il18水平增高，并且其水平与脂肪组织的量相关，包括体质量、体质量指数、腰臀比［12］。而通过生活方式改变减肥［2］、手术减肥［3］或他汀类药物降脂***［4］后其水平下降。提示il18可能是人类肥胖的一个重要因素。目前已经证实il18在脂肪组织中的表达，从***房获得的人前脂肪细胞在体外培养分化的各个阶段均自发分泌il18及其mrna，从皮下及腹腔网膜获得的人脂肪细胞也能分泌il18，并且来自肥胖个体的人脂肪细胞分泌il18的量是非肥胖个体的3倍［5］。在hiv相关脂肪营养障碍患者的脂肪组织也发现有il18的表达［6］。深入的调查还发现，血清il18水平与血浆高密度脂蛋白胆固醇浓度呈负相关［67］，与血浆三酰甘油浓度正相关［78］。家族性高胆固醇血症患者血清il18显著较健康人升高，并且纯合子较杂合子高［9］。
目前发现，高血糖可诱导人il18的生成［10］，在给予奥曲肽抑制胰岛素分泌或直接静脉给予葡萄糖诱导高血糖的健康人及糖耐量受损患者中，均发现血清il18明显升高，而此作用可被抗氧化剂谷胱甘肽所抑制。提示高血糖可能通过氧化的机制升高血清il18水平。研究发现血清il18与空腹血糖水平［8］、hba1c［11］、空腹胰岛素水平及ir等密切相关［12］，提示il18与t2dm密切相关，可能参与后者的发生发展或伴随其中。确实，在t2dm患者中血清il18水平显著增高［7］。并且前瞻性队列研究证实血清il18的提高可增加未来发生t2dm的风险，并***于年龄、性别、收缩压、总胆固醇/高密度脂蛋白胆固醇比例、体力活动、dm家族史、吸烟及喝酒、il6和crp［12］。在1型dm患者中也发现血清il18水平明显升高［7］；在儿童1型dm患者中也证实其血清il18水平显著升高，并且在糖尿病酮症酸中毒患者中其水平更高［13］。此外，有多个研究证实血清及尿液il18水平随dm肾病病情的加重而上升；可作为未来t2dm患者发生肾功能不全的预测因子［14］。相关分析还显示血清il18与空腹血糖、餐后2 h血糖、三酰甘油、尿蛋白水平正相关［7，15］。
2.2 il18与高血压
大量的研究证实，高血压同样是一种慢性低度炎症或亚临床炎症状态。高血压患者较健康人血清il18水平显著增高，并随血压级别的递增而升高；而且其水平还与crp正相关，证实高血压患者存在免***功能紊乱［1617］。而在进行降压***2周后血清il18显著下降并接近正常［18］。提示il18可能参与高血压病的发病机制。进一步分析发现，原发性高血压危象患者较健康者血清il18增高，经***12 h后即明显下降，但仍高于健康者，***3 d后基本恢复至正常水平［19］。在妊娠高血压综合征患者中也发现，血清il18明显高于正常妊娠者，并且病情越重其值越高［20］。新诊断的高血压患者，如清晨血压高，比清晨血压不高者相对有较高的il18水平［21］。而清晨高血压的存在是高血压进展的一个重要原因，不仅与清晨心血管事件、脑卒中相平行，而且是清晨心脑血管事件的重要原因。表明il18可能还是高血压加重的一个重要原因。
2.3 il18与代谢综合征
上述研究均是在***的角度发现血清il18与肥胖、ir、dm或高血压等多项ms特征密切相关。evans等［22］在正常体质量和肥胖的非洲女黑人中均证实，il18水平与身体脂肪分数、内脏型肥胖、平均动脉压、空腹胰岛素水平、homa法胰岛素抵抗指数和三酰甘油呈正相关，而与高密度脂蛋白胆固醇负相关。提示il18可能在ms发生中起作用。为了进一步探讨il18与ms之间的关系，hung等［23］在955个无dm史的社区人口进行横断面调查，发现血清il18与ms的各项特征密切相关，包括：体重指数、腹围、收缩压、舒张压、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇（负相关）、空腹血糖、空腹胰岛素水平（p均<0.001），并且随着ms的各项特征的叠加，平均il18水平逐渐上升（p<0.001）。以ms为因变量进行logistic分析，在调整年龄、性别及胰岛素水平后，血清il18高、中三分位数组相对于低三分位数组的or值分别为2.28及1.42（p值接近0.007）。进一步把il6及crp引入回归模型，对上述or值无影响，分别为2.47及1.46（p值接近0.004）。得出il18为ms的危险因素，支持il18参与ms的发病机制。
2.4 il18与其他危险因素
aso等［24］在内科疾病患者中发现il18与高龄、男性、体重指数、收缩压、高密度脂蛋白胆固醇、吸烟、il6及hscrp呈正相关，并且它是颈动脉内膜中层厚度增厚的危险因素。进一步支持il18与ms各项特征的关系。同时还表明il18还与高龄、男性及吸烟等as危险因素密切相关。然而，有趣的是有报道吸烟可减少健康人及哮喘患者痰中的il18水平，其下降水平在两者间差异无统计学意义［25］。目前关于il18与吸烟、年龄、性别之间的研究较少见，确切的关系有待深入探讨。
研究发现，阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者较肥胖对照者有着较高的血清il18、il6、crp水平及颈动脉内膜中层厚度，并且il18与颈动脉内膜中层厚度正相关（r=0.45，p=0.005）［26］，提示il18等介导的炎症反应可能是阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者发生as的重要机制。此外，il18也与血浆同型半胱氨酸紧密联系。高血清il18的t2dm患者其同型半胱氨酸较正常血清il18的t2dm患者显著增高（p<0.001）［24］。在接受***动脉旁路移植的冠心病患者中也有相似的结果（p<0.02），并且血清il18与同型半胱氨酸显著相关（r=0.86，p<0.05）［27］。
综上所述，现有证据表明，il18与as危险因素密切相关，表明在as发生之前，il18已经开始发挥致as的作用。但il18与as危险因素之间确切的关系以及有关作用机制，尚有待进一步的研究。
【参考文献】
［1］escobarmorreale hf, botellacarretero ji, villuendas g, et al. serum interleukin18 concentrations are increased in the polycystic ovary syndrome: relationship to insulin resistance and to obesity. j clin endocrinol metab, 2004, 89: 806811.
［2］esposito k, pontillo a, ciotola m, et al. weight loss reduces interleukin18 levels in obese women. j clin endocrinol metab, 2002, 87: 38643866.
［3］vilarrasa n, vendrell j, sánchezsantos r, et al. effect of weight loss induced by gastric bypass on proinflammatory interleukin18, soluble tumour necrosis factoralpha receptors, creactive protein and adiponectin in morbidly obese patients. clin endocrinol (oxf), 2007, 67: 679686.
［4］leu hb, chen jw, wu tc, et al. effects of fluvastatin, an hmgcoa reductase inhibitor, on serum levels of interleukin18 and matrix metalloproteinase9 in patients with hypercholesterolemia. clin cardiol, 2005, 28: 423428.
［5］skurk t, kolb h, mullerscholze s, et al. the proatherogenic cytokine interleukin18 is secreted by human adipocytes. eur j endocrinol, 2005, 152: 863868.
［6］lindegaard b, hansen ab, pilegaard h, et al. adipose tissue expression of il18 and hivassociated lipodystrophy. aids, 2004, 18: 19561958.
［7］mahmoud ra, elezz sa, hegazy as. increased serum levels of interleukin18 in patients with diabetic nephropathy. ital j biochem, 2004, 53: 7381.
［8］olusi so, alawadhi a, abraham m. relations of serum interleukin 18 levels to serum lipid and glucose concentrations in an apparently healthy adult population. horm res, 2003, 60: 2933.
［9］el messal m, beaudeux jl, drissi a, et al. elevated serum levels of proinflammatory cytokines and biomarkers of matrix remodeling in nevertreated patients with familial hypercholesterolemia. clin chim acta, 2006, 366: 185189.
［10］esposito k, nappo f, marfella r, et al. inflammatory cytokine concentrations are acutely increased by hyperglycemia in humans: role of oxidative stress. circulation, 2002, 106: 20672072.
［11］esposito k, nappo f, giugliano f, et al. meal modulation of circulating interleukin 18 and adiponectin concentrations in healthy subjects and in patients with type 2 diabetes mellitus. am j clin nutr, 2003, 78: 11351140.
［12］thorand b, kolb h, baumert j, et al. elevated levels of interleukin18 predict the development of type 2 diabetes: results from the monica/kora augsburg study, 19842002. diabetes, 2005, 54: 29322938.
［13］dong g, liang l, fu j, et al. serum interleukin18 levels are raised in diabetic ketoacidosis in chinese children with type 1 diabetes mellitus. indian pediatr, 2007, 44: 732736.
［14］araki s, haneda m, koya d, et al. predictive impact of elevated serum level of il18 for early renal dysfunction in type 2 diabetes: an observational followup study. diabetologia, 2007, 50: 867873.
［15］李伟民, 陈婷, 傅祖植. 糖尿病肾病和尿中白细胞介素18含量检测意义. 实用老年医学, 2004, 18: 157159.
［16］陈宝峰, 徐新, 范文茂, 等. 原发性高血压患者血清白细胞介素18水平与颈动脉内膜中层厚度的相关性. 广东医学, 2007, 28: 14501453.
［17］许金成, 王淑斐, 刘华锋, 等. 高血压病患者血浆白细胞介素18水平的检测与分析. 广东医学院学报, 2004, 22: 331332.
［18］黎镇垣, 马中富, 甄慰菽, 等. 动态观察高血压患者血清白细胞介素18改变的临床意义. 标记免***分析与临床, 2003, 10: 13.
［19］李高松, 马中富, 黎镇垣, 等. il18在原发性高血压危象中改变的意义研究. 热带医学杂志, 2004, 4: 3436.
［20］王春, 尚涛, 侯文静. 妊娠高血压综合征患者白细胞介素18和内皮素1的变化研究. 中华围产医学杂志, 2002, 5: 264265.
［21］marfella r, siniscalchi m, nappo f, et al. regression of carotid atherosclerosis by control of morning blood pressure peak in newly diagnosed hypertensive patients. am j hypertens, 2005, 18: 308318.
［22］evans j, collins m, jennings c, et al. the association of interleukin18 genotype and serum levels with metabolic risk factors for cardiovascular disease. eur j endocrinol, 2007, 157: 633640.
［23］hung j, mcquillan bm, chapman cm, et al. elevated interleukin18 levels are associated with the metabolic syndrome independent of obesity and insulin resistance. arterioscler thromb vasc biol, 2005, 25: 12681273.
［24］aso y, okumura k, takebayashi k, et al. relationships of plasma interleukin18 concentrations to hyperhomocysteinemia and carotid intimalmedia wall thickness in patients with type 2 diabetes. diabetes care, 2003, 26: 26222627.
［25］mckay a, komaikoma m, macleod kj, et al. interleukin18 levels in induced sputum are reduced in asthmatic and normal smokers. clin exp allergy, 2004, 34: 904910.
白细胞介素篇5
[关键词] 创伤；肿瘤坏死因子；白细胞介素；乌司他丁
[中***分类号] R641 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）05（b）-0023-02
急性创伤可触发一系列全身炎症反应（SIRS）， 引起促炎性细胞因子如肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）、白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）释放，导致组织损伤。白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）作为抗炎因子有明显升高，有利于对机体的保护。乌司他丁（ulinastatin）为广谱的蛋白酶抑制剂，具有抑制炎性递质产生的作用。本资料旨在探讨乌司他丁对急性创伤患者促炎性细胞因子TNF-α、IL-8、IL-10的影响。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2008年9月~2009年10月收治的急性创伤患者46例，并将其随机分为A、B两组。A组23例，其中，男15例，女8例；年龄7~68岁，平均36岁；急性创伤部位分布：肺损伤5例，四肢损伤10例，肾损伤3例，胸部外伤2例，腹部外伤1例，头颅外伤2例。B组23例，男17例，女6例；年龄5~63岁，平均34岁；急性创伤部位分布：肺损伤4例，四肢损伤9例，肾损伤5例，胸部外伤1例，腹部外伤1例，头颅外伤3例。两组患者的性别、年龄、损伤部位分布及病情差异均无统计学意义（均P > 0.05），具有可比性。C组健康体检者共20例，其中，男10例，女10例；年龄16~50岁，平均31岁。本资料经医院伦理委员会通过，研究对象知情同意。
1.2 ***方法
A组患者给予清创缝合、抗感染等对症***。B组患者在A组***的基础上加用乌司他丁（广东天普生化医药有限公司生产，10万U/支）20万U，加入生理盐水250 mL静脉滴注，2次/d，连续***5 d。
1.3 观察指标
分别于***前及***后第1、3、5天清晨取外周静脉血，采用ELISA法检测血清中TNF-α、IL-8、IL-10。同时与C组的各指标进行比较。
1.4 统计学方法
采用SPSS 11.0统计软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，重复测量的计量资料采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
A、B两组患者血清中TNF-α、IL-8浓度在第3、5天显著高于C组（均P < 0.05），治疗前及第1天A、B两组患者血清中TNF-α、IL-8浓度与C组比较差异无统计学意义（均P > 0.05）。***前A、B两组患者血清中TNF-α、IL-8浓度比较差异无统计学意义（均P ＞ 0.05），***后第3、5天B组患者血清TNF-α、IL-8浓度明显低于A组（均P < 0.05）。B组患者血清IL-10浓度第3、5天明显高于A组，两组比较差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表1。
表1 三组研究对象各指标的比较（x±s，ng/L）
注：与C组比较，aP < 0.05，bP > 0.05；与B组同一时间段比较，cP > 0.05，dP < 0.05
3 讨论
急性创伤引起的全身炎症反应是导致患者出现多器官功能障碍综合征（MODS）的重要因素，急性创伤促发的TNF-α、IL-8、IL-10等多种炎性递质的瀑布样释放，导致全身炎症反应并引起组织损伤和器官功能障碍。
乌司他丁是从人尿中提取精制的一种糖蛋白，属蛋白酶抑制剂，具有抑制胰蛋白酶、磷脂酶A2、透明质酸酶、弹性蛋白酶等多种蛋白酶的活性[1]。乌司他丁降解形成的分子产物仍对上述各种蛋白酶有高效的抑制作用，且对溶酶体膜有稳定作用。乌司他丁还可以抑制炎性递质的释放，阻断细胞因子、炎性递质与白细胞之间的恶性循环，减轻上述各种蛋白酶对机体组织器官功能的损伤作用[2]。TNF-α主要由激活的巨噬细胞、内皮细胞、中性粒细胞及B淋巴细胞分泌，在炎症反应中具有启动和触发作用，导致组织器官损伤。IL-8由TNF-α、IL-1等因子激活的单核巨噬细胞、内皮细胞分泌，对中性粒细胞有趋化作用，也可以导致溶酶体释放及氧自由基产生加重脏器损害[3]。本资料中B组患者血清TNF-α、IL-8浓度在第3、5天明显低于A组（均P < 0.05），表明乌司他丁明显地抑制了炎性递质的瀑布效应，降低了体内TNF-α、IL-8等炎性递质的浓度，抑制炎症介质的过度释放，抑制机体过度炎症反应。IL-10是很强的抑炎因子，主要是由活化的巨噬细胞分泌，能够抑制单核巨噬细胞和中性粒细胞合成TNF-α、IL-8。应用乌司他丁治疗后B组患者血清中IL-10浓度在第3、5天明显升高，中断炎症激活的恶性循环，从而使急性严重创伤患者避免发生全身炎症综合反应，避免患者发生MODS[4]。
在人体血浆内存在较高浓度的乌司他丁，在机体受到损伤时被严重消耗，浓度明显下降，但随机体的恢复，其浓度又回升，这表明乌司他丁可能具有抵抗外来刺激，减少外界损伤因子对机体的损伤，维持人体内环境平衡的作用。因此在机体急性创伤时提供外源性的乌司他丁对于保护机体免遭炎性递质的损害是十分必要的[5]。乌司他丁不能单独作用于***急性创伤，因为他不具有杀灭病原微生物的作用，只有在积极清创、抗感染的基础上加用乌司他丁***，才能充分发挥其抑制机体过度炎症反应，保护与改善机体脏器功能，促进机体早期恢复[6]。
[参考文献]
[1] Pugia MJ，Takemura T，Kuwajima S，et al. Clinical utility of a rap idtest for uristatin [J]. Clin biochem，2002，35（2）：1052-1101.
[2] 旷昕，黄艳.乌司他丁对体外循环心脏病人血浆TNF-α.IL-6和Il-8的影响[J].中国医学工程，2004，12（5）：26-28.
[3] Hsul C. Current comcepts on the aclult respiratory distrcss syndrome [J]. J Cardiothorac Vascaneseh，1997，11（2）：376-378.
[4] 孙来芳，潘利伟.乌司他丁影响严重脓毒症大鼠IL-10、TNF-2、IL-1β水平的研究[J].临床外科杂志，2005，13（12）： 770-772.
[5] 林洪远.乌司他丁α1胸腺肽联合***严重脓毒症一种新的免***调记***方法的临床研究[J].中华医学杂志，2007，87（7）：451-457.
白细胞介素篇6
关键词 恶性胸腔积液 胸腔闭式引流 白细胞介素-2 顺铂
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2011.02.020
恶性胸腔积液是一种常见的肿瘤并发症，46%～64%的胸腔积液为恶性肿瘤所致【sup】［1］【/sup】。2009年2月～2010年2月采用白细胞介素-2联合顺铂***恶性胸腔积液患者50例取得满意疗效，现报告如下。
资料与方法
2009年2月～2010年2月收治恶性胸腔积液患者50例，男38例，女17例，年龄26～73岁。所有患者均经病理学或细胞学检查确诊。Karnofsky评分≥40分；预计生存期≥3个月。近1个月未行胸腔注射抗肿瘤药或硬化剂，随机分为***组27例，使用白细胞介素-2联合顺铂胸腔注射；对照组25例，胸腔内注射顺铂。两组患者性别、年龄、Karnofsky评分差异无显著性，见表1。
表1 两组一般资料
***前及***过程中检测血常规、肝肾功能，部分病人经适当处理，血象恢复正常，血浆白蛋白≥32g/L。恶性胸腔积液患者，经B超定位选择穿刺点，先采用一次性单腔中心静脉导管，进行胸腔穿刺置管并闭式引流胸水，再给予胸腔内注药，***组胸腔内注射白细胞介素2500万单位及顺铂40mg，对照组胸腔内仅注入顺铂40mg，每周注射1次，连续注射3周。同时静脉水化、碱化，并在用药前静脉推注托烷司琼5mg，地塞米松5mg，肌注苯海拉明20mg，以防肾毒性及恶心、呕吐。注射药物后让病人在床上变换，以利于药物与胸膜广泛接触。
胸腔积液疗效判定评价标准【sup】［2］【/sup】：①完全缓解（CR）：***后胸水完全消失，胸闷气急症状完全缓解，经X线、B超检查未见渗液，持续4周以上；②部分缓解（PR）：胸水减少超过50%，症状明显改善，持续4周以上；③无效（NR）：胸腔积液仍继续或减少不足50%，增加不多于25%，症状无改善或加重；④进展（PD）：胸腔积液增加超过25%。有效CR+PR。
结 果
***组有效率为85.2%（23/27），对照组为65.2%（15/25），两组疗效比较，差异有显著意义（P＜0.05），见表2。
不良反应：按WHO规定的急性与亚急性毒性分级标准【sup】［3］【/sup】，***组出现Ⅰ～Ⅱ级发热9例，Ⅰ～Ⅱ级恶心呕吐6例，1例胸痛反应，Ⅰ～Ⅱ级WBC减少2例。对照组Ⅰ～Ⅱ级发热6例，Ⅰ～Ⅱ级恶心呕吐5例，Ⅰ～Ⅱ级WBC减少4例，未出现胸痛，两组均未出现Ⅲ级以上不良反应。以上不良反应经过对症处理后均明显好转。两组均未出现肝肾功能损害及心电***改变。
讨 论
恶性胸腔积液的***主要包括全身***和局部***两个方面，全身***是指全身化疗，局部***包括周期性的胸腔穿刺或置管进行液体的引流以控制症状。胸腔内给药是目前***恶性胸腔积液简单安全有效的方法。传统的胸腔穿刺分为普通胸腔穿刺术和胸腔闭式引流术。前者反复穿刺增加了患者痛苦及气胸、胸膜反应等并发症的发生机会；后者用的引流管粗，增加了患者痛苦，而且活动受限。中心静脉置管闭式引流胸腔积液，则有穿刺时间段、穿刺次数少及并发症少等优点。顺铂是***常见肿瘤的一线药物，为周期特异性抗肿瘤药物，抗瘤谱广，能与DNA结合，破坏DNA功能，并能抑制细胞有丝***。顺铂注入胸腔中局部浓度高而其血浆浓度较低，减少了化疗的不良反应。同时顺铂与胸膜广泛接触不仅可以杀伤多种肿瘤细胞，而且可以刺激胸膜间皮细胞增殖纤维化，防止胸腔积液形成，有利于控制胸水【sup】［4］【/sup】。白细胞介素-2是一种免***增强剂，与白细胞介素-2受体特异结合而产生作用，是T淋巴细胞增殖分化所需的调控因子，对B细胞、NK细胞、抗体依赖性杀伤细胞和淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK细胞）等具有促进分化增殖的作用，也为体外维持激活的T细胞克隆的增殖所必须，可刺激许多细胞因子产生，在体内和体外均能增加肿瘤坏死因子、干扰素和白细胞介素的生成，增加抗肿瘤的作用。
胸腔内注入白细胞介素-2联合顺铂控制恶性胸水，不仅具有杀伤胸腔内肿瘤的作用，又能提高机体的免***功能，两者具有协同作用。本组有效率85.2%，不良反应轻，易为病人接受。
参考文献
1 孙燕.肿瘤内科学［M］.北京:人民卫生出版社,2001:257.
2 王东.肿瘤急症***学［M］.北京:人民***医出版社,2006:68-70.
3 孙燕,石凯远.临床肿瘤内科手册［M］.北京:人民卫生出版社,2007:142-143.
白细胞介素篇7
[关键词]白介素-1α；白介素-1β；黑素细胞
[中***分类号]R758 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2012）06-0952-04
黑素的合成是个极其复杂的过程,在体内受金属离子、细胞因子、激素等各种因素的调节。多种细胞因子对于黑素细胞的数量、形态、酪氨酸酶活性、细胞间粘附分子-1等均有不同程度的影响[1]。IL-1是一个多功能的促炎症细胞因子家族,几乎所有有核细胞均能产生IL-1。为了研究白介素-1（Interleutin-1, IL-1）对人表皮黑素细胞增殖及黑素合成的影响，为临床应用IL-1***色素性疾病提供实验依据，笔者建立了正常人表皮黑素细胞体外培养体系，采用不同浓度的白介素-1α及白介素-1β作用于体外培养的黑素细胞, 观察了IL-1α及IL-1β对表皮黑素细胞增殖及黑素合成的调节作用, 现将结果报道如下。
1 材料和方法
1.1 材料及仪器：MCDB-153培养基，牛胰岛素，人转铁蛋白，L-Dopa, IL-1α，IL-1β，DMSO，MTT 均购自美国Sigma公司。重组人表皮生长因子( rhEGF)购于美国Peprotech公司。牛垂体提取物(BPE)购于美国Invitrogen公司。10%新生小牛血清购自Hyclone公司。EDTA-Na2购自美国Gibco公司。氢化可的松0.5μg/ml，青霉素100IU/ml，链霉素100IU/ml，胰蛋白酶，苔盼兰均系国产。培养瓶、96孔板和6孔板均购于美国Corning公司；显微镜：观察细胞用的是OLYMPUS CK2型号；细胞计数用的是OLYMPUS CKX41型号， 照相用的OLYMPUS CH2型号；酶联免***检测仪；流式细胞仪。标本经患者知情同意后取自18～35岁行包皮环切术的正常人包皮。
1.2 方法
1.2.1 正常人黑素细胞的培养[2-3]：将上述包皮标本消毒、修剪,用含0.2g/L EDTA-Na2的0.25%胰蛋白酶消化和离心后,将获得的MC 进行培养。在倒置显微镜下观察, 细胞呈明显的两极或多极树突形态。
1.2.2 黑素细胞鉴定[4-5]
1.2.2.1 L-Dopa染色：将传代纯化后的黑素细胞，经含0.2 g/L EDTA- Na2的0.25%胰蛋白酶消化后接种于已预先放置盖玻片的 6 孔板内，待细胞贴壁并稳定生长后弃去培养液，并用预热的PBS液洗涤数次。用2.5g/L戊二醛固定后，加入用黑素细胞培养液配制的1g/L L-Dopa，37℃ 孵育4h，其间换液1次，风干后甘油封片，照相。
1.2.2.2 Fontana银染：在0.15%硝酸银溶液中加入适量氨水配制成氨银液，将传代纯化的黑素细胞用戊二醛固定后加入氨银液，避光浸染约30min，PBS液漂洗3次后置倒置显微镜下观察，照相。
1.2.2.3 S-100 蛋白免***组化染色：将传代纯化后的黑素细胞，经消化后接种于已预先放置盖玻片的 6 孔培养板内，待细胞贴壁后去掉培养液。用2.5g/L 戊二醛固定后，PBS液洗涤数次，加入3%的H2O2，室温30min，以去除内源性过氧化物酶；再次用PBS液洗涤数次，滴加1：20稀释的羊血清，室温下处理15min；加入1:200兔抗 S-100蛋白的多克隆抗体，4℃ 过夜；洗涤后加入生物素标记的羊抗兔抗体，37℃、湿盒孵育1h，再次洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素，37℃、湿盒孵育1h。洗涤后DAB染色，蒸馏水适时终止，苏木素复染后用加拿大胶封片，照相。
1.2.3 黑素细胞增殖的测定：采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）。 倒置显微镜下观察，细胞培养至80%汇合时，弃培养液上清，加入含0.2 g/L EDTA- Na2的0.25%胰蛋白酶共1～1.5ml，在75cm2的细胞培养瓶内37℃孵育3～5 min，镜下观察约80%脱落，加入5ml左右的含有10%新生小牛血清的MDCB-153培养基终止消化，转移细胞悬液到15ml离心管，1 500rpm离心3min，弃去上清，加入适量含有10%血清的MDCB-153培养基重悬细胞团块，吸取100μl到一个无菌的500μl的EP管中，加入等量的0.8%的苔盼兰溶液，室温下混匀5min，吸取100μl混合液于血细胞计数板计数。按20000个/ml接种到96孔板中，每孔150μl，37℃，5%CO2孵箱过夜培养。
第二天，弃去培养基上清，加入新鲜的MDCB-153培养基100μl /孔，备用。以无菌PBS配置的IL-1α，IL-1β溶液，其终浓度分别为50，100，200ng/ml，备用。无菌加入100μl相应浓度的IL-1α，IL-1β溶液，同时设立PBS和空白对照组，各个浓度各设5个复孔。处理后分别培养24h，48h，72h。相应处理时间后，分别弃去培养基上清，加入含MTT终浓度为0.5mg/ml的新鲜MDCB-153培养基继续培养4h，800rpm离心3min，弃去培养基上清，加入150μl的DMSO溶解甲瓒，37℃孵育15min，于波长为495nm处测吸光度值，记录数据，按公式计算其抑制率。抑制率=（对照组-实验组）/对照组x100%。
1.2.4 黑素合成的测定：采用NAOH法。将处理后的黑素细胞弃去上清液。PBS洗3次，用含0.2 g/L EDTA- Na2的0.25%胰蛋白酶消化3min后，分别计数后调整细胞数目，取等数量的细胞离心后重悬于100μl的0.5mmol/L的NAOH溶液中， 37℃孵育1h后，各管加入400μl的蒸馏水稀释后，分别于405nm处和450nm测量吸光度值，按公式计算其抑制率。黑素合成抑制率 =[1-(药物孔吸光度值÷药物孔细胞密度)÷(对照孔吸光度值÷对照孔细胞密度)]×100%。
1.2.5 流式细胞术检测：细胞培养，计数等如前，按2×105/孔接种到6孔板，浓度100ng/ml的IL-1α处理组，IL-1β处理组和PBS组，空白对照组设置如前，细胞处理72h后，分别收集培养基上清到离心管中，用不含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化贴壁细胞，消化终止如前。分别收集细胞悬液转到相应的已经收集有各自上清的离心管里，1500rpm离心3min，弃去上清，加入无菌的PBS重悬细胞团块，1500rpm离心3min，重复3次PBS清洗过程后，弃去上清，加入PI溶液，室温避光孵育30min，上机检测。
1.3 统计学处理：全部数据采用 SPSS 统计软件10.0版进行分析。
2 结果
2.1 形态学结果：体外培养的正常人黑素细胞为双极、 三极和多极的树突状细胞，细胞增殖良好,细胞树突之间交织成网 (见*** 1)。
2.2 黑素细胞鉴定
2.2.1 L-Dopa染色：第3代黑素细胞经0.1 %L-Dopa染色后镜下见黑素细胞胞质及树突均被染成灰黑色 (见***2)。
2.2.2 Fontana银染：第3代黑素细胞经氨银液避光浸染30min，细胞被染成黑色（见***3）。
2.2.3 S-100蛋白染色：黑素细胞胞质及树突呈棕黄色阳性着色,从而可以鉴定为黑素细胞(见***4)。
2.3 不同浓度IL-1α对人正常皮肤黑素细胞增殖率(%)的影响：黑素细胞增殖的测定结果见表1。各浓度IL-1α实验组对黑素细胞的抑制率较PBS对照组相比有统计学意义(P
2.4 不同浓度IL-1β对人正常皮肤黑素细胞增殖率(%)的影响：黑素细胞增殖的测定结果见表2。各浓度IL-1β实验组对黑素细胞的抑制率较PBS对照组相比有统计学意义(P
2.5黑素合成的测定结果：见表3。405nm处和450nm处分别测量吸光度值，按公式计算其黑素合成抑制率，均可见IL-1α及IL-1β作用后黑素合成抑制率增加，而且IL-1α及IL-1β组与PBS组比较统计学上均有显著性差异（P
2.6流式细胞术检测：浓度为100ng/ml 的IL-1α及IL-1β作用于黑素细胞72h后用流式细胞术检测的结果：空白对照组黑素细胞凋亡率为5.5%，溶剂PBS组黑素细胞凋亡率为6.7%，IL-1α（100ng/ml）组黑素细胞凋亡率为57.3%。IL-1β（100ng/ml）组黑素细胞凋亡率为56.6%。IL-1α（100ng/ml）组黑素细胞凋亡率与空白对照组及溶剂PBS组比较差异有统计学意义（P
3 讨论
IL-1 家族有3个主要成员, IL-1α、IL-1β和IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)。IL-1具有介导炎症反应、 促进 T细胞和B 细胞的增殖与分化 ,参与免***调节、 影响代谢、 刺激造血细胞及引起发热等多种生物学作用[6]。人类皮肤内的IL-1主要形式是IL-1α, IL-1β是次要形式[6-7]。Swope[8]等研究发现IL-1、 IL-6及TNF-α三种细胞因子可抑制培养黑素细胞的酪氨酸酶活性,其中IL-1最为明显,此外它们还能抑制黑素细胞的生长，但无细胞毒性作用,故认为它们可能是阻碍黑素细胞黑素生成的重要因素。本研究建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系后 , 用不同浓度的IL-1α和IL-1β作用于黑素细胞后也发现IL-1α、IL-1β对黑素细胞活力有抑制作用 ,能使细胞增殖力降低,两者存在明显的剂量和时间效应。浓度越高，抑制率越强，与 Swope等[8]的研究一致。本研究还发现IL-1α、IL-1β还可导致黑素合成减少，增加黑素细胞的凋亡率。顾劲松等[9]采用放射免***分析法测定白癜风患者血清细胞因子水平，泛发性患者血清IL-1β水平均显著高于对照组。Lu Y等[10]学者用角质形成细胞分泌的IL-1处理黑素细胞发现可以刺激括细胞间黏附分子-1的显著表达。LePoole等[11]观察到, 白癜风患者皮损处黑素细胞周围基质中, 细胞间黏附分子表达明显增高，高表达的细胞间黏附分子可以显著抑制黑素细胞与纤维粘连蛋白的黏附, 导致黑素细胞缺失。IL-1作为多功能的促炎症细胞因子,是否为参与引起炎症后色素脱失的主要因素，在白癜风的发病过程中起着怎样的作用， IL-1α、IL-1β究竟是通过什么通路和机制达到这些作用还有待进一步的深入研究。
[参考文献]
[1]李红,朱文元.细胞因子对黑素细胞生物学特性的影响[J].国外医学皮肤性病学分册,1996,22（4）:219-221.
[2]Tsuji T, Karasek M. A procedure for the isolation of primary culture of melanocyte from new born andhuman skin[J].J Invest dermal,1983,81（2）,179-181.
[3]项蕾红,郑志忠,祝绿川,等.黑素细胞体外纯培养及生物学特性鉴定[J].临床皮肤科杂志, 2001,30（3）:166-167
[4]杨壮群,王正辉,荔 鹏,等. 芦荟苦素对体外培养的黑素细胞影响的实验研究[J].中国美容医学,2003,12（5）:464-466.
[5]陈菊萍,冉玉平,魏大鹏,等.人黑素细胞培养最佳条件的选择和生物学鉴定[J].中国麻风皮肤病杂志,2007,23（3）:214-216.
[6]Dinarello CA.Biologic basis for interleukin-1 in disease[J].Blood,1996,87（6）:2095-2147.
[7]Kupper TS,Groves RW.The interleukin-1 axis and cutaneous inflammation[J].J Invest Dermatol,1995,105（1Suppl）:S62-S66.
[8]Swope VB,Abdel- Malek Z,Massem LM,et al. Interleukin 1 alpha and 6 and tumor necrosis factor-alpha are paracrine inhibitors of human melanocyte proliferation and melanogenesis[J].J Invest Dermatol,1991,96（2）:180-185.
[9]顾劲松,涂彩霞,谭雪晶,等.白癜风患者血清白介素、肿瘤坏死因子α及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子检测[J].中华皮肤科杂志,2003,36（2）:73-75.
[10]Lu Y,Zhu WY,Tan C,et al.Melanocytes are potential immunocompetent cells: evidence from recognition of immunological characteristics of cultured human mel anocytes[J].Pigment Cell Res,2002,15（6）:454-460.
白细胞介素篇8
慢性肾衰竭是由于各种肾脏疾病所导致的肾脏功能的减退。它发生在各种肾实质疾病的基础上，缓慢地出现肾功能减退至衰竭。IL-6是导致肾功不全发生、发展的一个重要的炎性介质。 本研究旨在发现慢性肾衰竭与IL-6的相关性为临床***提供思路。
1 资料与方法
1．1 试验对象 试验对象45例，经临床诊断为慢性肾功衰竭患者，且符合下述条件：肾小球滤过率（GFR）：＜20%，血肌酐＞450μmol/L,诊断标准符合第7版《内科学》（人民卫生出版社）。
1．2 试验分组
1．2．1 对照组（NC组）：20例，其中男8例，女12例，年龄23～59岁，平均41．6岁，哈尔滨市第一医院肾内科医护人员。
1．2．2 试验组：分两部分 A组:非透析慢性肾衰竭患者，Scr （405~803 μmol / L）,平均613 μmol/l,Ccr ( 4～20 ml / min),平均11 ml/min,患者24例，男11例，女13例，平均43．4岁；原发病为慢性肾小球肾炎16例，慢性肾盂肾炎5例，肾动脉硬化3例。B组（CRF血液透析组）：21例，Scr（503~916 μmol/L）,平均711μmol/L,Ccr(3～20 ml/min),平均9 ml/min，其中男12例，女8例，年龄29～71岁，平均40．3岁；原发病为慢性肾小球肾炎11例，慢性肾盂肾炎5例，肾动脉硬化5例。透析时间2～19个月，平均（M±A）（7．2±5．4）个月。
1．2．3 标本采集 研究对象空腹过夜后在清晨6:00-7:00处于卧床状态下采静脉血6 ml，分别为3 ml、2 ml、1 ml。2 ml分离血清后。-20°C保存备用检IL-6；3 ml分离血清后立即送生化检查；1 ml以10％ EDTA•Na2作抗凝剂送检血常规。
1．2．4 透析方法 每周透析15～18 ，血流量200 ml /min，透析流量500 ml /min。
1．2．5 测定方法 BUN，Scr的测定均采用常规生化方法；IL-6测定采用放射免***测定方法；血常规用常规化验。1．2．6 统计学方法 所有实验数据以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验及直线相关分析。P< 0．05为差异有统计学意义。
2 结果
2．1 透析组TNF-α血浆水平与非透析组比较。见表1。
IL-6与Ccr呈明显负相关(r= -0．684) ，IL-6 与SBP呈正相关（r=0．399），IL-6与DBP呈正相关（r= 0．356），IL-6与血红蛋白呈负相关 （ r= - 0．203）
3 讨论
IL-6是导致慢性肾功能衰竭发生、发展的一个重要炎性介质。本研究45例慢性肾功能衰竭的患者IL-6血浆水平与正常对照组比，明显增高，有统计学意义。C．Mrowka等研究表明，慢性肾衰竭非透析。血液透析患者血浆IL-6水平较正常对照组高，可能为产生增多或排泄障碍所致。本研究表明，HD组的血浆IL-6水平比非HD组明显增高，差异有统计学意义，表明HD不能很好的清除IL-6，反而增高，可能激活了细胞因子网络,机制尚不清楚，需进一步探讨。IL-6随肾功的恶化而逐渐升高，可作为病情监测的重要指标之一[1]。Witko等发现慢性肾功能衰竭患者IL-6及其受体与氧化应激的新标志物-终末氧化蛋白产物（Aopp）密切相关、提示CRF免***功能紊乱由炎性介质、氧化应激等多种原因引起。本研究45例CRF患者的Ccr与IL-6血浆水平呈负相关，与国外文献报道相符。CRF患者PBMC处于激活状态，证实PBMC产生增多是造成血浆IL-6水平升高的原因之一。但IL-6作为一种细胞因子均具有短期时间自限性的活动特点，如果只存在排泄障碍不能造成血浆IL-6持续升高。所以，在CRF晚期，IL-6仍然可由PBMC分泌增多，促进CRF的发展及起到十分重要的作用。IL-6可刺激FN（纤连蛋白），使其血浆水平增加[2]。FN的合成增加很可能是细胞外基质（ECM）产生过多的重要因素，而ECM合成和降解失衡是导致器官纤维化的重要因素。FN是ECM的重要成分，在正常组织基础表达较低，在炎症损伤中表达增高，具有明显结合纤维蛋白、纤维蛋白原及胶源的能力；通过与整合素结合，在介导细胞增殖和器官硬化中发生重要作用。
CRF患者增高的IL-6能抑制促红细胞生成因子生成（EPO）的生成，引起贫血。抗IL-6制剂可改善CRF患者的贫血状态[3]。
IL-6与血压呈正相关，血压高者IL-6也高，血管紧张素Ⅱ上调IL-6的表达[4，5，6]，血管紧张转换酶抑制剂，钙拮抗剂等抑制IL-6的产生。IL-6参与了高血压的病理改变：[7]血管平滑肌增生是高血压的主要病变之一。近年来发现IL-6可以通过调控血管内皮细胞的原癌基因C- sis表达来调节平滑肌细胞的增殖与分化，当内皮细胞受损时，C- sis基因大量表达。IL-6能促进内皮细胞C- sis基因的表达，产生血小板衍化生长繁殖[8]。也可通过内皮素调控细胞生长的C- fos和C- myc原癌基因表达，增加DNA合成，促进血管平滑肌细胞增殖，使血管壁增厚，血管腔变小，外周阻力增加。细胞因子不仅调节免***功能，而且调节细胞的增殖与分化。动物实验发现局部IL-6参与细胞因子介导的血压调节作用，有拮抗血管紧张素转换酶抑制剂的作用，增高血压。
参考文献
［1］ Navarro JF, Mora C, Garcia J, et al.Effects of pentoxifylline on the haematologic status in anaemic patients with advanced renal failure.Scand j urol nephrol, 1999,33(2):121-125.
［2］ Cottone S, Vadala A, Vella parison of tumour necrosis factor and endothelin-1 between essential and renal hypertensive patients.J Hum Hypertens,1998，12(6):351-354.
［3］ Klahr S．Mechanisms of progression of chronic renal damage.J Nephrol, 1999; 12(Supp12):53-62.
［4］ Panichi V, De Pietros, Andreini B, et al．Calcitriol modulates in vivo and in vitro cytokine production:A role for intracellular calcium.KidneyInt，2005，54(5):1463-1469.
［5］ Vanhoutte PM, Endothelium and control of vascular function Hy-pertension.Clin Med, 2002, 13:658.
［6］ Komurol, et al.Endothelin stimulates c-fos and c-my c expnession and pro liferation of vascular smooth muscle cells, FEB Slett, 2004, 238:249.
白细胞介素篇9
【摘要】 【目的】 探讨白细胞介素-17(il-17)在中重度儿童哮喘发病、气道中性粒细胞炎症反应中的作用。【方法】 中重度持续哮喘发作期儿童45例，其中中度持续组(20例)与重度持续组(25例);以健康儿童20例为对照组。以酶联免***吸附法(elisa)检测两组患儿外周血单个核细胞(pbmc)在cd3和cd28单克隆抗体刺激下分泌的il-17水平，检测诱导痰中性粒细胞数量;对以上病例进行联合***3个月后随访，达到临床缓解的病例20例纳入哮喘缓解组，复查其il-17水平。比较不同病情间il-17的表达水平，了解il-17与儿童哮喘临床病情、气道炎症反应的关系。【结果】 哮喘患儿pbmc表达il-17水平显著高于正常对照组(2 685 ± 1 081) pg/ml，其中哮喘发作组 (5 355 ± 813) pg/ml显著高于哮喘缓解组(4 504 ± 687) pg/ml (p均 < 0.05);重度持续组患儿pbmc表达il-17水平(5 830 ± 807) pg/ml显著高于中度持续组(4 962 ± 751) pg/ml (p < 0.05);急性发作期哮喘患儿il-17水平(5 355 ± 813) pg/ml与诱导痰中性粒细胞比例(xmin = 0， xmax = 98.8， m = 44.73)%、血中性粒细胞比例(51.72 ± 13.43) %成正相关(r = 0.820、0.736， p < 0.001)。【结论】 中重度哮喘患儿外周血单个核细胞il-17表达水平升高，并与哮喘临床病情、气道炎症反应密切相关。
【关键词】 哮喘; il-17; 中性粒细胞
abstract： 【objective】 to investigate the effect of interleukin-17 (il-17) on the pathogenesis of moderate to severe children asthma and on the airway neutrophil inflammation reaction. 【methods】 forty-five patients (20 patients with moderate persistent asthma， 25 patients with severe persistent asthma)， as well as 20 normal control subjects， were included in this study. elisa was used to measure il-17 concentration in peripheral blood mononuclear cells (pbmc) from 65 children. pbmc were stimulated by anti-cd3 monoclonal antibody (okt3) (0.2 mg/l) and anti-cd28 monoclonal antibody (anti-cd28) (1 mg/l). the sputum specimens were assayed for cellular differential count. then the asthmatic children received combined treatment for 3 months， 20 cases were relieved， their il-17 concentration in pbmc were measured again. the correlation between the il-17 levels and the percentage of eosinophil， neutrophil in the induced sputum was analyzed. il-17 levels were compared between moderate persistent group and severe persistent group， between the acute group and the remission group. the relationship between il-17 and the disease severity and airway inflammation was analyzed. 【results】 the il-17 levels of asthmatic group were significantly higher than that of control group (2 685 ± 1 081) pg/ml， and the level of acute group (5 355 ± 813) pg/ml were also significantly higher than that of remission group (4 504 ± 687) pg/ml (p < 0.05). the il-17 levels of severe persistent group (5 830 ± 807) pg/ml were significantly higher than those of moderate persistent group (4 962 ± 751) pg/ml (p < 0.05). the il?鄄17 level (5 355 ± 支气管哮喘是由多种炎症细胞、细胞因子及炎症介质参与的气道慢性炎症性疾病。th1/th2平衡理论、嗜酸性粒细胞炎症学说的炎症机制已经广为接受。而近年研究显示中性粒细胞在哮喘，尤其是重型哮喘发病中起着重要的作用[1]。新发现的th17[2-3]通过分泌白细胞介素-17(interleukin-17，il-17)，可能介导中性粒细胞募集，参与哮喘的慢性气道炎症，并可能与气道重塑有关。有研究[4-7]显示il-17参与成人重度哮喘与激素抵抗型哮喘的发病，并有可能参与气道重塑的发生。但在儿童中重度哮喘中il-17的地位如何尚无报道。本实验拟结合临床哮喘患儿的临床病情及其血液、痰液标本中以上炎症细胞及因子的改变进行分析研究，从而了解il-17及中性粒细胞在中重度儿童哮喘中的作用，为探索哮喘的新***手段提供基础。
1 材料与方法
1.1 研究对象
中重度持续发作哮喘儿童45例(男27例，女18例)，其中中度持续组(20例)与重度持续组(25例)，平均年龄6.9(s = 2.4)岁。于其急性发作期取血及痰液标本，并行肺功能检测。经联合***后(***方案参照2007gina方案)病情缓解儿童20例，纳入缓解组研究对象(男13例，女7例)，平均年龄6.7(s = 2.3)岁。诊断、分级、分期标准参照中华医学会儿科分会2008年制定的儿童支气管哮喘防治常规[8]。剔除标准：①近2周口服或静脉使用过糖皮质激素或免***调节剂;②第一次喘息发作;③哮喘合并其他免***性疾病如结核病、系统性红斑狼疮、幼年类风湿性关节炎等;④心肺功能衰竭者。正常对照组：来自同期本院健康体检儿童共20例(男12例，女8例)，平均年龄5.9(s = 1.5)岁，对照组儿童无特应性疾病及免***性疾病史。急性发作组、缓解组及对照组三组儿童性别(?字2 = 1.029，p > 0.05、年龄(f = 1.933，p > 0.05)经统计学处理差异无统计学意义，具有可比性。
1.2 主要试剂
淋巴细胞分离液购自达科为生物技术公司，pbs、rpmi1640培养液、二硫苏木糖醇(ddt)购自威佳公司，胎牛血清购自杭州四季青公司，鼠抗人cd3单克隆抗体(okt3)、鼠抗人cd28 单克隆抗体(anti-cd28)购自bd/pharmingen公司，il-5、il-17 elisa试剂盒购自武汉中美科技有限公司。
1.3 实验方法
1.3.1 诱导痰的采集和处理
由喷射式雾化仪吸入3%高张盐水10 ～ 15 min，将咳出的痰液收集至约1 ml，取0.5 g左右黏稠痰液，加入适量的裂解液(0.1%dtt)，混匀后37 ℃水浴10 min并振荡10 min。将痰液用40 μm滤网过滤，1 500 × g离心10 min，细胞沉渣置于pbs中涂片，以甲醇固定，经white giemasa染色，如痰样镜检中鳞状上皮细胞占有核细胞比例 < 20%，则认为样本合格。计数200个非上皮细胞进行细胞分类，分类计算中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的百分比。
1.3.2 外周血单个核细胞(pbmc)的分离和培养
所有急性期患者于***前静脉采血2 ml，edta抗凝，pbs等体积稀释，缓慢加入淋巴细胞分离液上，1 500 × g离心20 min。吸取中间白膜层，以pbs充分洗涤2次，1 000 × g离心10 min，加入rpmi1640培养液重悬pbmc，调整细胞密度为1 × 109/l。将pbmc1 × 109细胞/l培养于96孔培养板中，加入anti-cd3(okt3) (0.2 mg/l) + anticd28(1 mg/l)共培养。培养板置于37 ℃，体积分数5%co2，饱和湿度培养箱中培养，72 h后收集上清存放至-80 ℃冰箱。
1.3.3 外周血单个核细胞(pbmc)培养上清il-17的测定
按照elisa试剂盒说明书测定pbmc培养上清il-17水平，单位为pg/ml。
1.3.4 血细胞形态的测定
血细胞形态：静脉采血1 ml涂片后，经he染色和white giemasa染色，分类计算中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞的百分比并观察各细胞的形态。
1.4 统计学方法
实验数据采用spss 16.0统计软件进行数据整理和分析，符合正态分布连续性计量资料用均数符合正态分布连续性计量资料用均数 ± 标准差(x ± s)表示，两组均数比较采用***样本t检验，多组均数比较采用方差分析，采用配对样本t检验进行组间比较;非正态分布计量资料用全距(中位数)表示，双变量相关分析采取变量间spearman相关分析，检验水准α = 0.05。
2 结 果
2.1 哮喘患儿il-17水平的变化
体外与抗-cd3单克隆抗体与抗-cd28单克隆抗体共培养支气管哮喘患儿pbmc，产生的il-17水平，哮喘组显著高于正常对照组(2 685 ± 1 081)pg/ml，而哮喘急性发作组(5 355 ± 813) pg/ml又明显高于临床缓解组(4 504 ± 687) pg/ml，差异具有统计学意义(f = 52.387，p < 0.05)。在急性发作组中，重度持续组的il-17水平(5 830 ± 807) pg/ml显著高于中度持续组(4 962 ± 751) pg/ml，差异具有统计学意义(f = 0.954，p < 0.05)。
2.2 支气管哮喘患儿外周血、诱导痰中性粒细胞比例与il-17水平的关系
将急性发作期支气管哮喘患儿外周血、诱导痰中性粒细胞比例(%)分别与il-17水平(pg/ml)进行相关分析，发现哮喘患儿外周血中性粒细胞比例(51.72 ± 13.43)%、诱导痰中性粒细胞比例(xmin = 0， xmax = 98.8， m = 44.73)%与il-17水平(5 355 ± 813) pg/ml成正相关，rp分别为0.736、0.820，p < 0.001 (***1) 。
3 讨 论
支气管哮喘是一个慢性气道炎症伴气道重塑的过程，涉及嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜碱性粒细胞等。目前的th1/th2平衡理论及嗜酸性粒细胞炎症学说并不能完全解释哮喘的发病过程。有学者将哮喘按不同的炎症机制分为非嗜酸细胞型及嗜酸细胞型[9]。研究非嗜酸细胞型哮喘通过il-17驱动的中性粒细胞炎症机制对发展新的***措施有重要的意义。目前研究[1，10]提示难治性哮喘、哮喘持续状态、吸入激素过快减量等病人诱导痰中性粒细胞明显增高，肯定了中性粒细胞在难治性哮喘中的作用，但中性粒细胞和il-17在儿童中重度哮喘的具体作用未明。
本研究发现哮喘病人的il-17水平显著高于正常对照者，急性发作组的中性粒细胞比例及il-17水平明显高于缓解组，外周血、诱导痰中性粒细胞比例与il-17水平成显著正相关，表明il-17及中性粒细胞在哮喘的急性发作、加重中起着重要作用，il-17与哮喘炎症中性粒细胞活化、趋化过程密切相关[11]。
bullens等[12]发现中重度持续哮喘病人诱导痰中il-17mrna与cd3γmrna以及痰中性粒细胞计数成正相关，中重度持续的哮喘病人中均可发现高il-17amrna水平表达，但并未对两组不同病情的il-17amrna水平进行比较。我们对急性发作组病人不同病情(中度持续组与重度持续组)间il-17水平进行了比较，发现重度持续组的il-17水平显著高于中度持续组，提示相对高的il-17可驱动更严重的中性粒细胞炎症反应。
综上所述，支气管哮喘的慢性炎症过程中，中性粒细胞发挥了重要作用，其活化体系中的炎症因子及细胞因子形成复杂的网络结构，进一步研究这些炎症细胞及其活化过程中的细胞因子的相互关系有助于探索新的哮喘***手段，以更好地控制儿童支气管哮喘的发生发展。
【参考文献】
廖竞，农光民，蒋敏，等. 儿童重症哮喘气道中性粒细胞凋亡的研究 [j]. 中华儿科杂志，2009，47(8)：628-631.
traves sl， donnelly le. th17 cells in airway diseases[j]. curr mol med， 2008， 8(5)： 416-426.
hung ly， velichko s， huang f， et al. regulation of airway innate and adtaptive immune responses： the il-17 paradigm[j]. crit rev immunol， 2008， 28(4)： 269-279.
wilson rh， whitehead gs， nakano h， et al. allergic sensitization through the airway primes th17-dependent neutrophilia and airway hyperresponsiveness [j]. am j respir crit care med， 2009， 180(8)： 720-730.
mckinley l， alcorn jf， peterson a， et al. th17 cells mediate steroid-resistant airway inflammation and airway hyperresponsiveness in mice[j]. j immunol， 2008， 181(6)： 4089-4097.
lindén a. interleukin-17 and airway remodelling [j]. pulm pharmacol ther， 2006， 19(1)： 47-50.
ai-ramli w， prefontaine d， chouiali f， et al. t(h)17-associated cytokines (il-17a and il-17f) in severe asthma [j]. j allergy clin immunol， 2009， 123(5)：1185-1187.
中华医学会儿科分会呼吸学组. 2008年修订儿童支气管哮喘防治常规 [j]. 中华儿科杂志，2008，46(10)： 745-753.
baines kj， simpson jl， bowden na， et al. differential gene expression and cytokine production from neutrophils in asthma phenotypes [j]. eur respir j， 2010， 35(3)： 522-531.
maneechotesuwan k， essilfie-quaye s， kharitonov sa， et al. loss of control of asthma following inhaled corticosteroid withdrawal is associated with increased sputum interleukin-8 and neutrophils [j]. chest， 2007， 132(1)： 98-105.
白细胞介素篇10
【关键词】 白介素-22； 乙型肝炎； 肝疾病
Expression and Significance of Interleukin-22 in HBV Related Liver Diseases/ZHAO Xiao-rong，WU Ji-zhou.//Medical Innovation of China，2015，12（12）：001-003
【Abstract】 Objective：To explore the expression and significance of IL-22 in HBV related liver diseases.Method：Whole vein blood was obtained from healthy control（HC）（n=25）and experimental groups including the patients with asymptomatic carrier（ASC）（n=30），chronic hepatitis B（CHB）（n=40），liver cirrhosis（LC）（n=45），hepatocellular carcinoma（HCC）（n=30）.The level of serum IL-22 were analysed by ELISA.Statistical analysis of the relevance of IL-22 levels and AFP was performed.Result：IL-22 level in the CHB group，LC group， and the HCC group were higher than that in the healthy control （P=0.010，0.003，0.000）.IL-22 levels had no correlation with AFP.Conclusion：IL-22 may contributed to the occurrence and the development of liver fibrosis and hepatocellular carcinoma.
【Key words】 Interleukin-22； Hepatitis B； Liver diseases
First-author’s address：The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530021，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.12.001
长期的慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus， HBV）感染是肝纤维化、肝硬化、肝功能失代偿及肝癌的高危因素。HBV相关性肝病发病机制复杂，机体的免***调节紊乱导致病毒不能有效清除，引起慢性炎症。白细胞介素22（Interleukin-22，IL-22）可由辅T细胞17（T help cell 17，Th17）及Th22细胞、自然杀伤细胞等产生。IL-22与IL-19、IL-20、IL-24、IL-26、IL-28及IL-29同属IL-10细胞因子家族，是Th22、Th17等活化后的重要效应分子[1]。既往已有诸多研究表明[2]，IL-22可能在多种炎症性疾病或自身免***性疾病中具有双重作用。本研究针对HBV相关性慢性乙型肝炎无症状携带者（asymptomatic carrier，ASC）、慢性乙型病毒性肝炎活动期（CHB）、乙肝肝硬化（LC）、原发性肝癌（HCC）患者血清IL-22的变化以及甲胎蛋白（AFP）的指标进行初步研究，探讨IL-22与乙肝病毒感染相关性肝病的表达及意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2012-2014年在本院门诊就诊及住院的乙肝表面抗原（HBsAg）阳性患者145例，其中ASC 30例，CHB 40例，LC 45例，HCC 30例。诊断标准符合《慢性乙型肝炎防治指南》（2010年）、《WHO消化系统肿瘤病理学和遗传学》（2010 年）、《原发性肝癌诊疗规范》（2011年）。同时排除合并有自身免***性疾病或HBV以外的其他病毒感染，且无慢性病史。排除6个月内接受抗病毒及免***调节***的患者。另外随机抽取25例健康体检者作为本次试验的健康对照组（health control，HC）。各组研究对象的一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。
1.2 方法
1.2.1 标本采集和处理 采集研究对象空腹外周静脉血5 mL，于室温放置2 h后予离心，并分装血清置于-80 ℃低温冰箱冻存，待集中检测。同步留取血清标本测定AFP。
1.2.2 应用酶联免***法（ELISA）检测血清中IL-22水平 采用ELISA试剂盒（武汉华美生物技术有限公司）检测血清中IL-22水平，严格按照说明书要求操作，使用美国Themo Electron Corporation的Multiskan MK3全自动酶标仪监测检测OD值，经Curve Expert软件分析测得样本水平。使用全自动生化仪检测AFP。
1.3 统计学处理 应用SPSS 16.0软件进行统计学分析，计量资料如呈正态，以（x±s）表示，多组均数比较用单因素方差分析（one-way ANOVA），进一步进行组间比较，采用LSD-t检验法；相关分析采用spearman检验，计量资料如呈偏态分布，以中位数M（P25，P75）表示，以P
2 结果
各组外周血清IL-22水平及与肿瘤标记物AFP的相关性分析：（1）与正常对照组相比，HBV相关的不同肝病患者之间，IL-22水平比较差异有统计学意义（F=4.740，P=0.001）。组间比较发现CHB组、LC组、HCC组外周血IL-22水平均高于对照组（P=0.010、0.003、0.000），ASC组IL-22水平与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05），见表2。（2）通过对各组患者IL22水平与肿瘤标记物AFP的相关性分析发现：外周血清IL-22水平与AFP之间均无相关性（P>0.05），见表2。
3 讨论
IL-22，一开始被命名为IL-10相关的T细胞来源的诱导因子（IL-10-related T cell derived inducible factor， IL-TIF）。IL-10R2与IL-22R1组成的异源二聚体受体复合物，IL-22与之结合，进一步激活下游信号传导通路，从而完成信号系统的传导[3]。当前，IL-22在肝脏各类疾病中的作用已在动物模型中得到广泛研究，有多篇研究证明，IL-22在肝损伤中具有直接的保护及协助再生作用，并且IL-22受体在肝脏中高表达，提示肝细胞是IL-22的重要效应细胞[4-5]。多项实验研究表明，IL-22在急性乙型病毒性肝炎（acute hepatitis B）和慢性乙型病毒性肝炎患者的肝内表达是增高的[6-7]。杨智等[8]发现肝硬化患者外周血清IL-22的表达水平升高，推测其原因是IL-22升高从而导致患者清除病毒的能力下降，从而使病情进入慢性迁延期。在体外试验中，IL-22可以促进肝细胞分泌能够启动、促进肝细胞再生的细胞因子IL-6及TNF-α[9]。而IL-22的保护作用，考虑与抗氧化、抗炎以及诱导肝细抗凋亡有关，其机制可能包括上调表达红素氧合酶1、氧化还原因子1以及显著增强STAT3（转录活化蛋白）的激活[10]。本研究中ASC组IL-22水平与健康对照组比较，差异并无统计学意义（P>0.05），原因可能为机体尚处于免***耐受期，不发生免***应答有关；HBV相关性肝病中，CHB患者、LC患者、HCC患者外周血IL-22表达水平依次增加，HCC患者最高，与健康对照组相比，差异具有统计学意义（P=0.001）。这表明在慢性HBV感染时IL-22参与了肝脏的免***及病理过程，考虑到动物模型中IL-22中的护肝作用，本研究推测CHB患者体内血清IL-22含量升高可能具有一定的保护作用。由于IL-22能够间接促进肝细胞的修复及再生，促进损伤肝细胞的存活，从而起到保护肝脏的作用， 但是IL-22的长期刺激有可能促进肝炎向前发展，LC患者体内血清IL-22含量升高则在肝脏慢性纤维化方面可能起一定作用。另有动物研究显示，注射IL-22致使细胞周期蛋白D1的升高从而造成肝细胞再生能力的增强，对二乙基亚硝胺（DEN）诱导HCC的易感性增加，而IL-22基因敲除小鼠形成HCC的易感性明显降低，那些在炎症损伤过程中存活的肝细胞则有可能成为原发性肝癌的前体细胞[6，11-12]。本研究通过检测外周血血清IL-22水平，发现HCC组外周血中IL-22水平确实高于正常对照组。同时也提示在肝癌患者体内IL-22参与了肿瘤免***机制的调节。
有研究发现在人类肝脏癌细胞株中，IL-22能诱导急性期蛋白质的表达，参与体内炎性反应[13]。进一步在动物细胞体外培养研究中发现，IL-22能上调Bcl-2、Bcl-xL和细胞周期蛋白D等促进小鼠肝干细胞系BMOL的增殖并抑制其凋亡[14]。但有学者发现IL-22可调节肿瘤细胞周期，使其细胞周期停滞在G2/M期，抑制肿瘤细胞增殖[15-18]。故IL-22在肝癌中的作用具体机制仍待进一步研究。因HCC组外周血中IL-22水平高于健康对照组，且IL-22对肝癌发生发展可能起一定作用，故本研究将HBV相关性肝病各组肿瘤标志物AFP与外周血IL-22水平进行相关性分析，得出IL-22与AFP无相关性的结果。但由于本研究中各组样本量较少，仍需要搜集大量样本进行深入研究。这些研究提示，IL-22参与HBV感染及病程进展的各个过程中发挥重要作用，LC、HCC患者IL-22含量升高可能在肝脏慢性纤维化、肝癌发生方面可能起一定作用，其机制尚需进一步研究。IL-22有可能成为***HBV相关性疾病的一个新靶点。
参考文献
[1] Dumoutier L， Louahed J， Renauld J C.Cloning and characterization of IL-10-related T cell-derived inducible factor （IL-TIF）， a novel cytokine structurally related to IL-10 and inducible by IL-9[J].J Immunol，2000，164（4）：1814-1819.
[2] Zhang N， Pan H F， Ye D Q.Th22 in inflammatory and autoimmune disease：prospects for therapeutic intervention[J].Mol Cell Biochem，2011，353（1-2）：41-46.
[3] Xie M H， Aggarwal S， Ho W H， et al.Interleukin （IL）-22， a novel human cytokine that signals through the interferon receptor-related proteins CRF2-4 and IL-22R[J].J Biol Chem，2000， 275（40）：31 335-31 339.
[4] Xiang X， Gui H， King J N， et al.IL-22 and non-ELR-CXC chemokine expression in chronic hepatitis B virus-infected liver[J].Immunol Cell Biol，2012，90（6）：611-619.
[5] Ki S H， Park O， Zheng M， et al.Interleukin-22 treatment ameliorates alcoholic liver injury in a murine model of chronic-binge ethanol feeding：role of signal transducer and activator of transcription 3[J].Hepatology，2010， 52（4）：1291-1300.
[6] Park O， Wang H， Weng H， et al.In vivo consequences of liver-specific interleukin-22 expression in mice：Implications for human liver disease progression[J].Hepatology，2011，54（1）：252-261.
[7] Zhang Y， Cobleigh M A， Lian J Q， et al.A proinflammatory role for interleukin-22 in the immune response to hepatitis B virus[J].Gastroenterology，2011， 141（5）：1897-1906.
[8]杨智，陈洪涛，张毅，等.IL-22和IL-17 mRNA在慢性HBV感染者PBMCs中的表达及其意义[J].世界华人消化杂志，2012，20（34）：3380-3384.
[9] Brand S， Dambacher J， Beigel F， et al.IL-22-mediated liver cell regeneration is abrogated by SOCS-1/3 overexpression in vitro[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2007，292（4）：G1019-1028.
[10] Xing W W， Zou M J， Liu S， et al.Hepatoprotective effects of IL-22 on fulminant hepatic failure induced by d-galactosamine and lipopolysaccharide in mice[J].Cytokine，2011， 56（2）：174-179.
[11] Wang Z， Yang L， Jiang Y， et al.High fat diet induces formation of spontaneous liposarcoma in mouse adipose tissue with overexpression of interleukin 22[J].PLoS One，2011， 6（8）：e23 737.
[12] Jiang R， Tan Z， Deng L， et al.Interleukin-22 promotes human hepatocellular carcinoma by activation of STAT3[J].Hepatology，2011， 54（3）：900-909.
[13] Dumoutier L， Van Roost E， Colau D， et al.Human interleukin-10-related T cell-derived inducible factor：molecular cloning and functional characterization as an hepatocyte-stimulating factor[J].Proc Natl Acad Sci USA，2000， 97（18）：10 44-10 149.
[14] Feng D， Kong X， Weng H， et al.Interleukin-22 promotes proliferation of liver stem/progenitor cells in mice and patients with chronic hepatitis B virus infection[J].Gastroenterology，2012， 143（1）：188-198.
[15] Wolk K， Kunz S， Witte E， et al.IL-22 increases the innate immunity of tissues[J].Immunity，2004， 21（2）：241-254.
[16]童庆东，陈菊梅.干扰素***长期肝酶正常肝组织病理改变明显HBV感染疗效观察[J].中国医学创新，2012，9（31）：98-99.
[17]杨兰艳，刘海，郑盛.慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝纤维化指标的相关性研究[J].中国医学创新，2011，8（14）：45-46.