学文网癌细胞篇1
最近，有一种安全、有效的新法――温热胸腔循环灌注法（简称胸腔灌注热疗）被用于***癌性胸腔积液。其原理是：由于肿瘤细胞的耐热能力比正常人体细胞差，43℃左右的温热即能有效杀伤肿瘤细胞，而人体正常组织细胞不会被烫伤。因此，受43℃温热作用1小时后的癌细胞会像“秋风扫落叶”似的“凋谢枯萎”，医学上称“细胞凋亡”。热疗后胸膜癌组织病理检查亦证实，癌细胞确实被“活活烫死”。
胸腔灌注热疗法能把胸腔内覆盖在胸膜的癌组织表面的纤维素冲刷干净，使广泛转移到胸膜的癌细胞直接、全面、均匀地暴露在43℃温热液体中。该疗法只需一次完成。优点主要有:①创伤小，从热疗开始到结束，患者的体温一般只上升1℃左右，脉搏上升10～20次/分，而且在热疗结束后1小时内均可恢复正常。②不会烫伤皮肤，也不会像化疗那样引起恶心、呕吐、肝肾功能损害、骨髓抑制等不良反应。③热疗后胸腔积液一般在数天内被控制，且不易复发。④热疗后许多肺癌伴癌性胸腔积液患者的肺部肿瘤病灶出现缩小或不继续长大，说明对肺部原发肿瘤也有一定的抑制作用。⑤热疗后患者的自觉症状明显改善，例如呼吸困难得到缓解或消失，咳嗽减轻，食欲增强，精神好转，体力得到恢复，患者的生活质量有了显著提高。
胸腔灌注热疗法主要适用于***非小细胞肺癌伴发的癌性胸腔积液或胸膜转移。同样的原理，温热心包灌注法也可应用于***肺癌伴发的癌性心包积液，对食管癌伴发的癌性胸腔积液或癌性心包积液、恶性间皮瘤伴发的癌性胸腔积液也有一定疗效。随着研究的深入，该疗法可望用于******癌、卵巢癌等其他肿瘤伴发的癌性胸腔积液，造福于更多的肿瘤患者。
不过，使用胸腔灌注热疗法也有严格的适应证，尤其需要注意以下两点。
癌细胞篇2
M3受体激动剂及阻滞剂对RBE细胞凋亡的影响取对数生长期的RBE细胞，以不同浓度匹罗卡品及硫酸阿托品进行处理，对照组以未加药干预的正常RBE细胞。培养48h后，胰酶消化，收集细胞，用冷磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤2次，1×结合缓冲液重悬细胞，制成单细胞悬液,使其浓度为1×106/ml。取100μL细胞悬液，加入5μLAnnexinV-FITC和10μL碘化丙锭（PI）溶液，混匀后室温避光孵育15min；再加入400μLPBS。采用流式细胞仪（BD公司，FACSCaliber）CellQuest软件进行分析。应用SPSS17.0统计软件进行分析，数据以±s）表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD法检验，率的比较采用x2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1RBE细胞中毒蕈碱型受体M3蛋白的表达情况
对照组、匹罗卡品组及匹罗卡品加阿托品组均出现M3受体蛋白条带（***1），以M3与GADPH的灰度比值来表示M3受体蛋白的相对表达数值（表1）。单用匹罗卡品组差异有统计学意义（F=61.86，P＜0.05）。匹罗卡品+硫酸阿托品组差异有统计学意义（F=54.51，P＜0.05）。正常对照组与阿托品组相比差异无统计学意义（F=1.45，P＞0.05）。
2.2毒蕈碱型受体M3对RBE细胞增殖作用的影响
匹罗卡品对胆管癌细胞的增殖具有抑制作用，且其抑制作用呈浓度依赖。1mmol/L匹罗卡品组及0.5mmol/L匹罗卡品组与阴性对照组相比抑制作用明显（P＜0.05），而0.1mmol/L匹罗卡品组与阴性对照组相比抑制作用不明显（P＞0.05）。且随抑制作用呈时间依赖性，随作用时间延长抑制作用逐渐减弱（1mmol/L匹罗卡品组及0.5mmol/L匹罗卡品组抑制作用在24h、48h、72h时，呈减弱趋势（P＜0.05），而0.1mmol/L匹罗卡品组随时间延长，抑制作用无差别（P＞0.05）阿托品+匹罗卡品组的吸光值明显高于相应匹罗卡品组的吸光值，即阿托品可以阻滞匹罗卡品对胆管癌细胞增殖的抑制作用。而阿托品组的吸光值与阴性对照组几乎无差别（P＞0.05），即阿托品本身对胆管癌的增殖无抑制作用。
2.3毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3对RBE细胞凋亡的影响
匹罗卡品组G1期细胞数与对照组相比，差别有明显统计学意义（P＜0.05），并且凋亡率也明显升高（P＜0.05）。匹罗卡品与阿托品共同作用于细胞后，G1期细胞数所占比例及凋亡率的升高明显受抑制。阿托品单独作用于细胞后，G1期细胞数所占比例及凋亡率与对照组相比无明显差异（P＞0.05）。（表3）。
3讨论
癌细胞篇3
在你们很多讽刺画中，我是一个面目丑陋、头上长角、手里拿叉的恶魔。其实，我一出生就住在你们的身体里，我并不丑陋，只是整天在沉睡。但你们呼吸的空气、喝的水、吃的食物、每天的生活习惯等等，让我在逐步苏醒，并变得丑陋。你们怕我、恨我，我又何曾不讨厌这样的自己？今天，我想跟你们讲讲我的心里话，但愿能为你们的“抗癌之路”提供有用的启发。
我是如何横空出世的
你们的身体，就像一个庞大的“细胞共和国”，里面住着近一千万亿个子民。每分钟就有3亿个同胞死亡，然后新的同胞又生长出来。开始，我也只是其中再普通不过的一个，日子过得平淡无奇，直到有一天，我发现自己越来越不像自己。
首先是我的样子变得越来越怪异。和那些大小差不多、规规矩矩站成一排的兄弟们相比，我变得奇形怪状、大小不一。这丑陋的样子吓了我一跳，但更可怕的事还在后面。我开始***了，由1个变成2个，2个变成4个，就这么一直没完没了地长下去。
原本我很苗条，直径只有大约10微米，用显微镜才能看到，但这些从我身体里跑出来的子子孙孙和我紧紧地贴在一起，成了一大团。当我***到100万个时，这一团体直径也只有1毫米，你们用任何医学检查仪器都发现不了；长到10亿个时，直径到了1厘米，医院里的B超、CT、核磁、PET等终于能发现我了。但是，你们很可能因为没有任何不舒服而不去检查，任我就这样疯狂地生长下去；当你们终于能在自己的身体上摸到一个包块时，我的数量早就超过了10亿个。这是一个漫长的“潜伏”过程，最少需要5年，也可能是10年、30年。
自从变丑以后，我的心也越来越狂野，总按捺不住想到外面的世界去闯一闯。这是我们癌细胞和良性肿瘤细胞的一个重大区别。它们总是老老实实地待着，任人宰割；我们却狡猾多了，顺着你们的循环系统，淋巴也好、血液也好，扩散到全身。我们会破坏你身体里各组织、器官的结构和功能，让你痛苦不堪，最后离开人世。
“变丑”并不是我的错
我知道我夺去了很多人的生命。中国每5个死亡的人里，就有一个跟我们有关。但是请你们想一想，是谁把本是正常的我，变成了这个丑陋的样子？
在第12届国际癌症大会上，有一位美国专家说，80%的癌症来自人类呼吸的空气、喝的水和吃的食物。其实，癌症中35%与饮食有关，30%与吸烟有关，10%与感染有关，饮酒、污染等也是重要因素。不要再责怪我是“杀人凶手”了，很大程度上，正是你们的生活方式创造了我。
吃致癌食物的你。烤肉，发霉的食物，咸熏制品，油炸食物……当你吃这些东西时，其中的苯丙芘、黄曲霉素、亚硝酸盐等就悄悄潜入了我的生活。它们是世界上公认的三大最强烈的致癌物质。中国疾控中心营养与食品安全所食品科学技术室主任霍***生说，黄曲霉毒素B1的毒性是氰化钾的10倍，是砒霜的68倍，最容易诱发肝癌。苯丙芘和亚硝酸盐会导致食管癌、胃癌、鼻咽癌、肺癌。另外，大鱼大肉，粗粮吃得太少，纤维素摄入不足、吃得太多等都会导致“癌从口入”。
抽烟喝酒的你。每当你抽烟的时候，真希望你能看看我脸上的惊恐。专家说：“每抽一支烟，你就可能丧失5分半钟的生命！”肺癌、膀胱癌、食道癌、口腔或喉部肿瘤等，都与抽烟密切相关。一个每天吸15～20支烟的人，患肺癌、口腔癌或喉癌致死的几率比不吸烟的人大14倍。英、德等8个欧洲国家在调查了36万人后发现，得癌的男人中10%都和饮酒有关，女人中也有约3%与饮酒有关。
不开心的你。如果你每天都阴沉着一张脸，正常细胞的日子也好过不到哪去，对我们癌细胞来说，更是生长扩散的机会。古罗马人就说过“抑郁容易致癌”。食道癌的患者十有八九都是固执、急性子的人；***癌和中年患胃癌的人多爱生闷气、自我压抑、不擅表达。
“被污染”的你。说实话，生活在一个被污染的环境里，算不上你的错。可反过来想想，环境受到污染，还不是人类自己造成的？天空越来越不干净，PM2.5成了肺癌的诱因之一；生活污水和工业废水污染了水循环系统，造成了消化道肿瘤；不合格装修建材中的甲醛、氡等导致白血病和肺癌……
我们能不能好好相处？
出于对我的恐惧，你们发明了“谈癌色变”这样的词，但千万别忘了，我曾经就是你的一部分，是你的千万亿分之一。正因有每天被“不正常”生活包围的你，才有了同样“不正常”的我。我挚爱的人类朋友们，在我还没发生癌变之前，我们就好好相处好吗？下面这些，就是阻止我从一个正常细胞变坏变丑的最佳武器。
吃点黄绿色食物。国际抗癌联盟一份报告说，全球每年有1200万新发癌症病例，其中高达四成是可以预防的。富含维生素C的黄、绿色蔬菜和水果，能让胃癌、肠癌、肺癌、子宫癌、前列腺癌等发病危险性大幅下降。此外，多吃生蒜能让人得胃癌的风险降低60%。
每天走路1小时。美国哈佛大学公共卫生学院针对7万人的长期研究发现，每天只要走路1小时，就可以降低一半患大肠癌的几率。运动后出汗，还可使体内的铅、锶等致癌物质随汗水排出体外，从而起到防癌作用。运动能提高免***力，能预防多种癌症。
晒15分钟太阳。人体内维生素D不足会增加患***癌、结肠癌、前列腺癌、卵巢癌及胃癌的风险。身体吸收阳光中的紫外线合成维生素D，能起到防癌作用。不过，为避免暴晒增加皮肤癌的风险，每天晒太阳15分钟就可以了。
睡够7小时。当你睡觉时，不少免***力因子会在此时产生，它们犹如一个屏障保护着你。睡饱了免***力增强了，我们癌细胞想要“进攻”人体的难度就大多了。午睡是中国人很好的习惯，中午1点是人类的一个睡眠高峰，这时打个小盹，也能增强体内免***细胞的活跃性，起到一定的防癌作用。
少吃点糖。作为一个癌细胞，我最喜欢的“食物”就是糖，你的血液里57%的糖分都用来滋养我，让我无法控制地越***越多。研究发现，你每天只要喝两杯甜饮料，患胰腺癌的风险就会比不喝的人高出90%。所以，含糖食品，还是少吃或不吃得好。
癌细胞篇4
现在，研究人员从通过定型祖细胞突变而患白血病的老鼠身上提取出了一组白血病干细胞。通过观察和研究发现，白血病干细胞大体上能够保持定型祖细胞的基因表达特点，同时激发正常情况下在造血干细胞中表达的一组亚基因。至少这些基因中有些对白血病千细胞的自我更新是重要的。对研发一种选择性地瞄准癌症干细胞的药物前景来说，白血病干细胞和正常血液干细胞之间的差别也许还是好消息。
摘自《自然》
2006年8月17日
氢和恒星的秘密
在形成后不久，宇宙中就充满了氢原子，但在今天，星系之间弥漫的氢几乎都是电离的。计算机模拟该变化得出的某个解释表明，离子化并不完全，而且最初在太空中密集的区域发生。
如果恒星要通过核聚变燃烧氢，它们必须得超过一定的大小。利用哈勃太空望远镜对银河系中的球状星团进行深入的调查，加拿大的里歇尔等人已经确定了这一基本质量阔值。他们还探测到星团中白矮星颜色的变化的一个特征，是由白矮星大气层中氢分子的开始形成而致。这两个效应都被理论家预测过，该实验验证能帮助人们更好地理解低质量恒星和白矮星的物理性质。
摘自《科学》
2006年8月18日
格陵兰冰川堪忧
人们最害怕的事情之一――全球变暖――已经得到证实。格陵兰岛的冰层正在融化得比过去更快。到本世纪末之前，这个融化过程会达到极限点，使海平面升高到灾难的地步。而指望南极降雪量增加减轻这―问题也无济于事。
格陵兰岛如果完全融化了，全球的海平面将升高6．5米。今年初，美国加州理工学院的埃里克・里格诺特及其团队利用卫星雷达干涉测量法测定了格陵兰的冰川每年融化得越来越多，2005年的融化就达约220立方千米。现在，美国得克萨斯大学的陈建力(音译)及其同事利用从双子卫星得到的***数据证实了冰川融化的量。
摘自《新科学家》
2006年8月19日
步履维艰的环保
敌敌畏，或称DDVP，是一种家用杀虫剂，它与第二次世界大战时期的神经毒剂有关。尽管有相当多的证据表明它致癌并对大脑和神经系统有害，尤其是对儿童，但在5月份美国环保署还是提议继续销售敌敌畏。有几次机会，该机构近乎禁用清除害虫和农业中使用的杀虫剂，但最终总是逐步退让。环保人士和工会指责最近的决议是工业和***治冲突的幕后交易――正如他们25年前曾做过的那样，那时是环保署第一次考虑禁用DDVP及其他类似的杀虫剂。
自然资源保护委员会的律师艾伦・科兰杰洛对此表示了极大的不满，他就杀虫剂一事了环保署，并指责该机构在保护公众健康上违法和行动不力。
癌细胞篇5
以往，我们认为癌细胞之所以能够疯狂肆虐，是因为它们有这样一套让人类难以降服的魔法：正常细胞能够启动自然凋亡程序，但癌细胞把这个基因程序搞乱了，所以能够长生不老；正常细胞在与邻近细胞碰撞后，会自动抑制自身生长，但癌细胞非常“抗挤压”，所以有能力扩张；正常细胞不会游离原生长地，但癌细胞能够逃离生长地，到处扩散……
近些年，科学家通过不断深入细致的研究，发现先前人类破解的这些所谓癌细胞的魔法其实似是而非，癌细胞真正的魔法其实非常神奇――
死保“命根”的“长生不老法”
英国科学家认为，癌细胞之所以能长生不老，很可能有 “长生不老法”。为此，科学家用荧光物质分别给癌细胞里的各种分子做标记，以此来追踪它们的活动情况，结果发现一种名为RAD51D的蛋白质总是在它们的染色体端粒附近活动，而一般细胞不会出现这种情况。
端粒是染色体两端的特殊物质，就像鞋带两头起固定作用的金属或塑料箍，它维持着染色体的稳定，而且对细胞的寿命至关重要。正常细胞每***一次，端粒就会变短一点，短到一定程度，细胞就会死亡。从这个意义上说，端粒就是所有生命体的“命根”。此前，人们只知道这种蛋白质在正常细胞里具有修复DNA的作用，现在这种蛋白质出现在癌细胞的端粒附近，难道它们具有修补端粒的作用？
为了证实这一猜测，科学家用干扰法阻止RAD51D蛋白质在癌细胞身上发挥作用，结果其长端粒的染色体数量减少，而短端粒的染色体数量明显增加，而且大多数癌细胞在7天内就死亡了。这个现象说明，失去这种蛋白质的保护，变短的端粒就不会得到修复，最后导致癌细胞死亡。
由此不难看出，癌细胞有这一套 “长生不老法”，而一般细胞则不具备这种能力，只能走“自然死亡”的道路了。
蒙骗“天敌”的“防卫法”
癌细胞仅仅有“长生不老法”还无法猖狂肆虐，因为它面临免***大***团――巨噬细胞群体的攻击。靠“长生不老法”还不能完全保命，必须得有一套“防卫法”才行。
那么癌细胞究竟是用什么方法来防卫的呢？美国一个研究团队发现，在白血病患者的细胞中，有一种名为CD47的蛋白质的含量水平远远超过健康细胞。为什么会这样呢？研究人员猜测，这种蛋白质很可能负有特殊使命。
为了弄清这种蛋白质的特殊使命，研究人员把肿瘤细胞和巨噬细胞放在一起培养，结果肿瘤细胞照常存活；但注入这种蛋白质的抗体后，癌细胞细胞就很快被巨噬细胞“吃掉”了。看来是这种蛋白质保护了癌细胞。为此，科学家用输入这种蛋白质抗体的方法，发现可以有效***小鼠的***癌、子宫癌、结肠癌等各种肿瘤。
原来，CD47蛋白质是一种广泛存在于细胞中的蛋白质，它一般附着在细胞表面，发出“不要消灭我”的信号。无论肿瘤细胞，还是健康细胞，其中的CD47都可以防止自身受到巨噬细胞的攻击。而肿瘤细胞中的CD47约为健康细胞中的3倍，所以可以以此蒙混过关，逍遥法外。
利用“镖师”四处入侵的“扩张法”
要说癌细胞最令人畏惧的魔法，就是它的无限度“扩张法”。以往人们以为是癌细胞因为不怕挤压，才能够成几何级数增长，并以这种方式实现扩张，最后让健康细胞无“立足之地”，从而要人性命的。加拿大科学家研究发现，实际的魔法并非如此。
科学家发现，脑肿瘤细胞的一种致癌蛋白能够产生一种小的囊泡，把自己包裹起来。如果这些囊泡被限制在原来的细胞中倒还不会产生什么危害，但这些囊泡就像专门负责武装押运的“镖师”，可以把致癌物押送到健康细胞旁边，并且让致癌物与健康细胞融合，最后把健康细胞也变成了癌细胞。这一研究结果证明，癌细胞肆虐并不是变异细胞不受控制地增殖以至形成肿瘤的，而是众多健康细胞受到入侵后发生癌变的结果。癌细胞就是用这种方式来进行大规模的入侵和扩张的。
癌细胞篇6
采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析．各项数据以Mean±SD表示，实验组与对照组样本间的差异比较采用配对样本t检验，*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001，表示差异有统计学显著性意义．
2结果
2.1TBL的分离纯化
采用盐析，HiTrapDEAEFF离子交换柱层析和SuperdexTMG-75，10/300凝胶柱层析分离．获得的TBL在SDS-PAGE上显示单一条带(Fig．1，泳道2)，蛋白质纯品达到95%以上，分子质量约62kD．
2.2TBL对细胞增殖的影响
采用不同浓度的TBL(0、5、10、20、40μg/mL)分别作用于11种细胞系48h后，用MTT法检测TBL处理后不同细胞系的增殖情况．从Fig．2A中可见，TBL对正常细胞293T、HL7702及癌细胞HepG2、HeLa、MCF-7、QBC939、SGC7901的增殖均无明显影响．相同浓度下，TBL对正常结肠细胞FHC无抑制作用，仅对肠癌细胞DLD-1、HCT116及SW480细胞的增殖有显著的抑制作用(Fig．2B)，且呈剂量依赖效应，3种肠癌细胞的IC50值分别为17.8±0.36μg/mL，15.3±0.26μg/mL，20±0.30μg/mL．结果表明，TBL对结直肠癌细胞系的增殖有显著且特异的抑制作用．
2.3TBL对HCT116细胞形态的影响
TBL对HCT116细胞形态的影响采用倒置显微镜观察．结果表明，与对照组(Fig．3A)相比，10μg/mLTBL处理后(Fig．3B)，HCT116细胞数量明显减少，细胞边缘有变圆的趋势;20μg/mLTBL处理后，不仅细胞数量明显减少，而且细胞边缘整体发生变化，细胞轮廓模糊，细胞体积明显增大，细胞与细胞之间粘附增加，趋于成簇生长(Fig．3C)．
2.4TBL的N-糖苷酶活性和蛋白质合成的抑制作用
以兔网织红细胞裂解液系统和荧光素酶检测系统检测TBL对蛋白质合成的影响，实验结果表明，随着TBL浓度的增大，蛋白质翻译抑制作用逐渐增强，在TBL浓度为40μg/mL时达到完全抑制(Fig．4A)．而荧光素酶的活性随着TBL浓度的增大逐渐减弱，在40μg/mL时酶活性下降至50%(Fig．4B)．当将HCT116细胞总RNA与TBL体外作用后发现，RNA发生了明显的降解(Fig．4C)，说明TBL与RNA之间存在一定的相互作用．同时，当用不同浓度TBL处理兔网织红细胞裂解液后，随着TBL浓度的增大，兔网织红细胞的RNA逐渐出现新的切割片段(Fig．4D)．这些实验说明，TBL切割核糖体RNA的作用与蓖麻毒蛋白ricin［9］类似，具有N-糖苷酶的酶，从而影响了蛋白质的生物合成．
2.5TBL对HCT116细胞中miRNAs表达量的影响
为了检测TBL对HCT116细胞中miRNAs的影响，用qRT-PCR方法分析TBL处理后，HCT116细胞系中的miRNAs的表达情况．选择了19种在结肠癌中表达较特殊的miRNAs，从Fig．5可见，HCT116细胞经20μg/mLTBL处理24h后，有6种miRNAs表达量下调(＞2倍)，分别是miR-21、miR-135a、miR-135b、miR-17-5p、miR-331和miR-183，其中5种均为肠癌细胞中的致癌miRNAs;有2种miRNAs表达量上调(＞2倍)，分别是miR-615和miR-206，二者在肠癌细胞中的表达谱中无明显规律;其余11种miRNAs表达量变化不明显(0～2倍之间)．通过分析比较TBL对上述19种miRNAs的影响，发现TBL对HCT116细胞中的miRNAs表达量的影响主要表现为下调，在6种致癌miRNAs中，对miR-21的下调最为明显．
3讨论
癌细胞篇7
本文结合癌细胞研究的相关成果，介绍几种支持癌细胞不死性的机制，包括活性氧自由基机制、端粒酶作用机制、癌细胞迁移时的核膜和DNA修复机制以及备用能源物质供应机制等。
关键词：
癌细胞；不死性；机制；氧自由基；端粒酶
正常的细胞经过原代培养后仍然能够保持正常的二倍体核型，大多数细胞经传代培养繁殖到40～50代，就会逐渐衰老、凋亡。但是，癌细胞不再受机体的控制，其遗传物质发生改变，形态结构和表面物质等都发生变化，在适宜条件下能无限增殖。癌细胞获得不死性的机制涉及多个方面。
1活性氧自由基机制
自由基又称游离基，是具有非偶电子的基团或原子。外界环境中的阳光辐射、空气污染、吸烟、农药等都会使人体产生更多的活性氧自由基。这些氧自由基可作为一种细胞内的信使分子，通过氧化蛋白质上面的巯基，改变蛋白质的结构，进而改变蛋白质的功能。活性氧自由基对于癌细胞的产生有着重要影响，可以影响癌细胞的表型以及对于***策略的响应;可以激活HIF－1，进而上调糖酵解、血管再生以及其他细胞代谢的基因表达，从而有利于普通细胞向癌细胞转化和癌细胞的***［1］。
2端粒保护和端粒酶催化机制
在机体中，新生细胞会不断补充肺部、皮肤、肝脏及其他组织的细胞。然而，很多人类细胞都不能无限***，这是由于细胞每***一次，位于染色体末端的染色体就会缩短一点。端粒是染色体末端富含TG序列的DNA重复片段，从功能角度来讲，端粒更像是鞋带末端的金属箍一样，保护鞋带不易散开。虽然正常细胞有减缓端粒DNA损失的保护机制，即:端粒会通过“吞食”任何突出的DNA末端形成的一种套索样的T型环状结构来保护染色体。一种名为端粒重复结合因子2(TRF2)的蛋白是维持端粒结构完整性的关键蛋白［2］，TRF2可以压缩DNA，这对于T环的形成非常重要;同时，DNA链会沿着TRF2复合物进进出出，在复合物内部，DNA可以缠绕在TRF2上，随后多个TRF2分子就会聚集在一起形成DNA环状结构，从TRF2蛋白结构中凸现出来，从而加强端粒保护染色体末端的能力，减缓端粒DNA的损失。但即使如此，随着细胞***次数的增加，端粒会逐渐缩短，缩短到一定程度即引起染色体不稳定从而启动细胞程序性死亡。癌细胞的无限***能力与其具有高水平的端粒酶活性有关。端粒酶是一种专门的核糖白的逆转录酶，其可以重建端粒使得细胞无限***［3］。端粒酶在肿瘤细胞中能大量表达，在机体的干细胞、免***细胞和发育中的胚胎细胞中也可成功表达，但在正常细胞中却罕见其表达。Artandi实验室［3］研究鉴定出一种被称作TCAB1的蛋白，发现该蛋白能够将端粒酶复合体携带到细胞核中一个被称作卡哈尔体(cajalbody)的加工区域，端粒酶通过与包被染色体末端的TPP1蛋白相互作用而被结合到端粒上，给新复制出的染色体末端添加帽子结构，阻止染色体渐进性缩短，从而保证癌细胞长时间的***。近年来，科学家还发现有一些肿瘤细胞并不依赖于端粒酶来维持端粒的长度，而是利用其他染色体末端的端粒为模板，通过同源重组补充短的端粒序列或者利用体内端粒序列的端粒环来滚环复制延伸端粒，这些被称之为“端粒延长替代机制［4］”。
3癌细胞迁移时的修复机制
正常细胞只有在细胞***前才会打开核膜，其他时候核膜完整性良好，以防止细胞核、细胞质内的内含物混合。但生物机体中诸如免***细胞之类的细胞会通过自身扭曲挤入其他细胞之间的狭窄缝隙中，这就会导致细胞核膜破裂，核、质内含物混合。由于核膜不能快速修复，细胞质中的一些酶会降解细胞自身的DNA，导致这些细胞死亡。研究发现［5］，癌细胞穿过狭窄缝隙受到挤压时，不仅会破坏核膜，还会导致细胞的DNA遭受损伤，DNA双链断裂。但由于癌细胞自身具有核膜快速修复机制，一种被称作转运必需内体分选复合物(ESCRT－III)的复合体会堵住核膜上的裂口，阻止核、质内含物混合。这样，细胞就有时间修复发生断裂的DNA，使癌细胞在遭受DNA损伤后能够因为快速修复而存活下来，并保证迁移到体内新位点的癌细胞能够顺利增殖和生长。
4备用能源物质供应机制
癌细胞篇8
【关键词】 肝细胞癌；钙磷脂结合蛋白Ⅱ；免***组化
本次研究主要针对肝细胞癌中的AnnexinⅡ表达情况， 观察不同患者之间的表达差异性， 分析AnnexinⅡ在肝细胞癌中的表达。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 本次研究选取本院病理诊断为肝细胞癌患者， 并进行肝移植手术1例， 同时选取肝癌组织和非肿瘤肝组织数块， 将其放入液氮中在-70℃下进行保存， 选择本院肝癌石蜡组织标本79例， 其中男56例， 女23例， 年龄43～74岁， 平均年龄54岁。患者的肝癌症状按照WHO划分标准进行划分， 其中Ⅰ级21例，Ⅱ级37例，Ⅲ级21例。选取（本院鉴定中心提供）正常肝石蜡组织8例， 其中男5例， 女3例， 年龄43～77岁， 平均年龄54岁。
1. 2 材料 研究使用的材料主要包括：美国Clontech公司提供的PCR-SelectTMcDNA Substraction Kit；美国Qiagene公司提供的mRNA磁珠法纯化试剂盒、Sigma公司出产的Trizol；Promega公司生产的Rnaseinhibitor和M-MLV RT；A&B公司出产的SYBR Green PCR Master Mixture；武汉博士的公司出产的AnnexinⅡ多克隆抗体；福州迈新生物技术开发公司出产的Elicision Plus， 分析纯试剂选用进口分装。
1. 3 方法
1. 3. 1 构建抑制差减杂交文库 将100 mg的肝癌组织和非肿瘤肝组织分别放入1 ml Trizol当中匀浆， 氯仿和异丙醇抽提， 之后对所抽提RNA的A260及A280进行测定， 计算A260除A280确定RNA的纯度及质量， 使用磁珠法纯化试剂盒纯化分离mRNA， 操作按照说明书的使用标准进行， 构建差减杂交文库， 将第二轮PCR扩增产物克隆进入pMD-18T载体， 转化JM109感受态细菌， 并使用蓝白斑法筛选阳性克隆[1]。
1. 3. 2 进行cDNA芯片的制作 扩增阳性克隆中的插入片段， 纯化PCR产物后进行cDNA芯片制备， 为cDNA测序及同源性的分析， 将cDNA芯片结果显示在肝癌组织中的差异表达克隆进行测序， 并使用Blast进行比对， 进一步分析在发生或肝癌发展当中具有影响较大的基因。
1. 3. 3 分别提取、逆转录肝癌组织和肺肿瘤肝组织RNA 选取cDNA 40 ng， 上下游引物各20 mol/L及2×SYBR Green PCR Master Mixture 10 μl， 在蒸馏水不足反应体系20 μl， 在实时荧光定量PCR仪ABI Prism 7000上进行。计算样本中AnnexinⅡ的mRNA拷贝数相对量。免***组化按照Elivision plus试剂盒的操作要求进行， PBS代替一抗体作为阴性对照参考， 使用Leica RX型***像分析系统采集***像分析免***组化的结果， Qwin软件识别阳性表达面积和积分灰度值， 每一张切片采集5个视野， 视野为×200， 其中阳性的表达面积比在5%以上， 反之为阴性。
1. 4 统计学方法 本次研究使用SPSS18.00统计学软件进行分析。计数资料采用秩和检验；计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用单因素分析， 两两比较采用SNK法。P
2 结果
2. 1 RNA的完整性 本次检验的RNA和mRNA的A260/A280>1.8， 研究成功构建差减文库， 插入的片段通过PCR的鉴定， 结果在96%以上的克隆都具有扩增产物， 产物在200～700 bp之间， 通过对肝细胞癌中的高表达克隆测序， 并对其进行Blastn比对， 发现一个与AnnexinⅡ同源性为100%的基因， 检验分析认定为AnnexinⅡ基因。通过荧光定量检测， 肝癌组织中的AnnexinⅡ的mRNA拷贝数是非肿瘤肝组织的4.05倍。
2. 2 免***组织化学 通过肝细胞癌组织和癌旁肝硬化组织与正常肝组织进行比较， 结果AnnexinⅡ的阳性表达差异具有统计学意义（P
2. 3 在肝细胞癌组织和正常肝组织当中的AnnexinⅡ表达阳性率比较当中， 肝细胞癌与正常组织差异具有统计学意义（P0.05）， 见表2。
3 讨论
本次研究通过实验室研究分析， 采用芯片筛选的方法， 观察肝细胞癌的差异表达基因， 研究的可信度较高， 研究中的AnnexinⅡ已经不仅仅只是参与炎症反应机制方面的内容， 同时AnnexinⅡ还是核心区保守， N端存在的结合结构域， 可以通过癌基因pp60v-src、血小板源性生长因子受体和胰岛素受体在酪氨酸23进行磷酸化修饰， 蛋白激酶C在丝氨酸25进行磷酸化修饰， 进行信号转导、分化等均发挥着重要的功能。通过研究发现， AnnexinⅡ和细胞分类调控及肿瘤生长的关系非常紧密， 如果AnnexinⅡ的表达失调， 那么癌细胞的表达也往往上调[2]。本次同源性研究中发现AnnexinⅡ的mRNA拷贝数是正常肝组织的4.05倍， 而其他也均表现为高表达的结果， 免***组化分析当中， 所有高中低分化肝细胞癌组织的阳性表达率均较高， 与正常肝组织的差异性较大， 差异具有统计学意义（P
参考文献
[1] Stewart BW， Kleihues P. World Cancer Report. Ly-on： IARC， 2003：1-351.
癌细胞篇9
所有数据以均数±标准差表示，采用SPSS13.0软件作统计处理，两样本均数比较采用成组设计资料t检验，多组之间的均数比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，细胞活力检测采用双因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1ERCC1基因在SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞中的表达RT-PCR检测结果显示：采用2-CT法进行相对定量分析，以GAPDH为内参基因对上样量进行校正。使用t检验进行统计学分析，t=-9.856，P=0.01，SKOV3/DDP与SKOV3相比，差异有统计学意义，n=3（见***1）。Western印迹法检测结果显示：SKOV3／DDP细胞中ERCC1蛋白的相对表达量明显高于SKOV3（P<0.01），表明ERCC1在卵巢上皮癌DDP耐药细胞株SKOV3/DDP中的表达较亲本细胞株SKOV3明显升高（见***2）。
2.2ERCC1shRNA的筛选构建获得的3个克隆有ERCC1shRNA的重组质粒分别转染至SKOV3／DDP细胞，从而筛选获得稳定转染的细胞株，采用RFQ-PCR法检测ERCC1mRNA的表达，PLVX-ERCC1-shRNAC为对照。ERCC1mRNA的检测结果显示，与未转染组相比，PLVX-ERCC1-shRNA1转染组抑制ERCC1基因的的效果最明显，ERCC1基因相对表达量均值为0.24667，明显低于PLVX-ERCC1-shRNA2（0.836667）组和PLVX-ERCC1-shRNA3（0.412667）组，与PLVX-ERCC1-shRNAC相比，PLVX-ERCC1-shRNA1及PLVX-ERCC1-shRNA3差异均有统计学意义(P<0.01)；PLVX-ERCC1-shRNA2差异无统计学意义(P>0.05)。从结果可以看出PLVX-ERCC1-shRNA1对ERCC1干扰效果较好，shRNA1为基因最佳片段，因此后续实验选取PLVX-ERCC1-shRNA1进行研究（见***3）。
2.3ERCC1基因沉默后细胞中ERCC1蛋白的表达Western印迹法检测结果见***4。SKOV3、DDP-shRNAC细胞中ERCC1蛋白的相对表达量明显高于SKOV3／DDP-shRNA1，进一步证实本实验设计的shRNA能有效而特异地沉默ERCC1基因，抑制ERCC1蛋白的表达(P<0.01)。
2.4shRNA对SKOV3/DDP细胞ERCC1沉默DDP耐药性的影响细胞活力检测结果显示，不同剂量DDP处理ERCC1稳定沉默细胞株24h后，细胞活力显著低于其对照细胞，差异有统计学意义（P<0.05）。上述结果提示，特异性沉默ERCC1基因能增强SKOV3／DDP细胞对DDP的敏感性（见***5）。
3讨论
卵巢是女性盆腔深部器官，原发性卵巢上皮癌起病隐匿，发现多为晚期，是妇科恶性肿瘤中预后较差的肿瘤之一。目前认为有效的***方案是理想的初次肿瘤细胞减灭术(optimalprimarycytoreductivesurgery，OPCS，肿瘤残留病灶<1cm)及术后辅以铂类为基础的联合化疗。虽然普遍的以铂类为基础的初始联合化疗被认为有较高的有效性，但肿瘤细胞原发或继发的铂类耐药，严重影响了化疗疗效。化疗耐药已成为目前卵巢上皮癌患者预后差的重要原因之一，20％～30％的卵巢上皮癌患者表现为铂类原发耐药，最终有80％的患者出现继发耐药，多数患者会复发，并最终死于耐药性疾病［9-10］。随着生物及遗传技术研究的迅速发展，顺铂耐药被认为与NER密切相关。ERCC1基因是一种高度保守的单链DNA核酸内切酶，是一组DNA损伤的识别，切除蛋白，在修复过程中起关键作用，其正常表达是维持该修复酶功能的重要分子基础。研究显示，在DNA修复过程中，ERCC1通过与着色性干皮病因子F(XPF)形成ERCC1-XPF异二聚体而发挥作用，被认为是NER途径的关键基因［11-12］。若ERCC1低表达，机体核苷酸切除修复能力降低，细胞发生癌变的可能性将会增加；相反，若ERCC1过表达，则可使细胞停滞在G2／M期的DNA损伤迅速修复，从而降低肿瘤的发生［1］。ERCC1目前已经成为许多研究的焦点，目的在于发现肿瘤抵抗铂基础化疗的机制。Feng-Ying等［2］为评估ERCC1是否与卵巢上皮癌耐药有关，在Medline、Pubmed、Webofscience和CNKI数据中搜索关于ERCC1表达与卵巢上皮癌铂类化疗反应的文章，用固定效应Meta分析进行数据分析，产生有关ERCC1表达与卵巢上皮癌铂类化疗反应的混合优势比及95%可信区间，用Begg测试检验选择偏倚，卵巢上皮癌患者中ERCC1表达阴性的患者对铂类化疗敏感性较阳性表达者好，提示ERCC1的表达与铂类耐药显著相关［2］。赵丹等［3］研究ERCC1，BRCA1,β-tubulinⅢ和TUBB3mRNA的表达与卵巢上皮癌临床化疗敏感性的关系，提示ERCC1，BRCA1mRNA的表达与原发性卵巢上皮癌临床铂类化疗方案的敏感性呈负相关。但Mustafa等［4］研究卵巢上皮癌患者中ERCC1的基因表达与卵巢上皮癌一线化疗药物铂类的耐药性之间的可能联系，结果提示低、中、高ERCC1的表达与自由进展生存期无明显差异，在初始卵巢上皮癌患者中ERCC1的表达与铂耐药无显著相关性。因此，综合目前国内外相关文献表述，ERCC1与卵巢上皮癌铂类耐药之间的关系仍然存在争议。RNA干扰（RNAinterference,RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-strandedRNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭某些特定选择基因的表达（长度超过30的dsRNA会引起干扰素毒性），所以目前这种技术被广泛用于研究基因功能、传染性疾病和恶性肿瘤［13］。但是化学合成siRNA转染细胞介导RNAi，由于抑制时间短、成本高、效果不稳定等缺点限制了其在生物医学方面的研究应用。为了弥补这些方面的局限，近年来迅速发展的shRNA表达载体可在生物体内被加工成siRNA，进而稳定且特异地导致目标基因沉默。与传统的基因沉默技术相比，shRNA表达载体具有稳定性好、效率高、可传递性强等优点，在恶性肿瘤的基因***上具有良好的应用前景［14］。
癌细胞篇10
肾细胞癌分子靶向***
肾细胞癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率占泌尿系肿瘤的第二位，占全身恶性肿瘤的2％。统计数据表明，约四分之一的肾细胞癌患者在发现时已发生转移。目前肾细胞癌的***仍以根治性手术为主，但术后复发率达20％以上，且放、化疗效果不佳。研究显示，肿瘤分子靶向***的出现，为解决这一问题提供了可能。
对肾细胞癌的分子生物学最新研究发现，肾透明细胞癌(占肾细胞癌75％以上)具有极高的VHL基因突变率。该基因突变可引起细胞组织缺氧反应信号传导机制异常。由这种机制诱导的基因包括血管内皮生长因子(VEGFR)、血小板源性生长因子(PDGFR)、转化生长因子α和碳脱水酶Ⅸ等，这些为该病的分子靶向***提供了潜在的新靶点。
索拉非尼是新开发的第一个口服的多激酶抑制剂，靶向作用于肿瘤细胞及肿瘤血管上的丝氨酸／苏氨酸激酶及受体酪氨酸激酶，这些激酶包括RAF激酶、VEGFR-2、VEGFR-3、血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)、KIT、FLT-3和RET。索拉非尼具有双重抗肿瘤效应，一方面，它可以通过抑制RAF/MEK/ERK信号传导通路，直接抑制肿瘤生长：另一方面，它又可通过抑制VEGFR和PDGFR而阻断肿瘤新生血管的形成，间接抑制肿瘤细胞生长。
索拉非尼***晚期肾细胞癌的一项Ⅱ期随机临床试验共纳入202例患者，***总有效率是71％，无进展生存期为24周，对照组为6周(P=0.0087)。这些结果促使随后进行了一项Ⅲ期随机对照试验(纳入903例难治的肾癌患者)，***组的无进展生存期为24周，对照组为12周(P