学文网红细胞计数篇1
关键词： 网织红细胞 窥盘 设计 应用
红细胞（RBC）的发育依次经历原始红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞、晚幼红细胞和成熟红细胞（***1）。网织红细胞（Ret）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的尚未完全成熟的过渡阶段细胞，其胞质中尚残留部分核糖核酸（RNA）等嗜碱性物质，可被新亚甲蓝等碱性染料活体染色后呈织网状或颗粒状结构，故称之为网织红细胞。国际血液学标准化委员会（ICSH）将网织红细胞分成Ⅰ～Ⅳ型（***2）。网织红细胞计数可反映骨髓的造血功能，对贫血的诊断、鉴别诊断及预后有重要的参考价值。
目前虽然有流式细胞仪（FCM）和带网织红细胞参数的五分类血细胞分析仪（BA）可以检测网织红细胞，而且衍生出众多参数，但至今尚未普及。基层医疗单位还是应用窥盘法计数网织红细胞。网织红细胞的认识从形态学开始，以手工方法计数，可直观地看到网织红细胞的形态特征。网织红细胞计数的参考方法（WS/T346-2011）是直接在油镜下分别计数网织红细胞和成熟红细胞（***3），网织红细胞百分比（Ret%）按以下公式计算：
要保证网织红细胞的准确性即低CV%值，往往需要增大计数的红细胞数（表1）。由此可见，直接计数网织红细胞比例时，红细胞计数的工作量非常大。
网织红细胞计数广泛应用米勒窥盘，计数1000个红细胞中网织红细胞的百分比。米勒窥盘是一种光学圆形片状窥盘，直径19mm，安装在显微镜目镜中，窥盘中有面积比例为1∶9的2个正方形计数方格[1]（***4），只需计数小方格（A）内的红细胞即可准确估量出整个大方格（B）内的红细胞数。
米勒窥盘在某些型号的显微镜下不能看到窥盘的整个大方格，以及1：9比例固定的缺点等。经查阅文献，介绍几种计数网织红细胞的窥盘（表1）供大家参考。
各种窥盘结构的核心是在血片上细胞分布均匀的前提下，要能够以“小”窥“大”，并根据细胞数量确定一个部分与整体的合适比例，以降低工作强度，提高工作效率和准确性。要做到窥盘的科学合理，必须遵循以下几点：①窥盘是置于显微镜目镜头内的玻璃片或透明胶片，画线结构应在直径16mm圆圈的范围以内，确保视野内能够看到完整的结构；②对于部分非平场显微镜，边缘细胞不清晰，易漏数误数，小格尽可能设计位置居中；③大小方格比例10：1在计算和准确度上优由于9：1的设计；④对于压线细胞的处理，方格型优于圆圈型，易于做到压线细胞计数一半，舍弃一半。
参考文献：
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红细胞计数篇2
关键词：用形成分；尿液； AVE764B尿有形成分分析仪；显微镜检查
目前，随着自动化检验仪器的飞速发展，尿液自动化有形成分检查的应用，不仅提高了检测速度，增加了检测项目等，而且结果精密度好，能定量分析尿中有形成分，但自动化技术目前仍不能完全取代传统化学检查和尿有形成分显微镜检查，只能起到初筛作用，显微镜检查仍是尿有形成分检查的金标准。
1 资料与方法
1.1一般资料 ①收集2014年3月以来，我院病区及门诊患者新鲜尿液样本；②中国长沙爱威科技有限公司AVE764B直接镜检影像分析仪及原装试剂，日本Olympus显微镜型号CX21。
1.2方法
1.2.1标本采集 用洁净尿杯收集随机中段尿，充分混均后倒入干净试管中约11ml。先用AVE764B进行分析，剩余尿液留取至试管刻度线处（10ml）进行离心镜检。
1.2.2所有标本在取样后2h内完成检测，AVE764B严格按仪器说明书操作上机测试，自动进样器模式分析。镜检由一名经验丰富的技术人员按照《全国临床检验操作规程》第三版尿沉渣检验法进行操作，并以此检测结果作为本次研究结果的金标准。
1.2.3结果判断方法 检验结果根据《全国临床检验操作规程》第三版，RBC 0-3个/HP为阴性 ，中国长沙爱威科技有限公司推荐的报警限过筛值RBC3个/HP，尿分析仪镜检>6个/ul，均为阳性。
1.3统计学方法 采用SPSS17.0软件进行统计学分析以AVE764B检测方法为实验法，显微镜检查为金标准，采用McNemarX 检验和Kappa一致性检验比较两种方法检测红细胞差异与一致性，发现两种检测方法差异有统计学意义（P=0.000）。经一致性检验Kappa=0.81（P=0.000），两种检验方法存在较高一致性。
2 结果
AVE764B与镜检法检测1568例尿液中红细胞，比较两者检测结果，并对AVE764B作出性能评价见表1。
以显微镜检查为金标准，AVE764B检测红细胞的敏感度为96.3%，特异性为76.4%， 准确度为93.2%，阳性预测值为92.4%，阴性预测值为92.4%，经McNemarX 检验，发现两种检测方法差异有统计学意义（P=0.000）。经一致性检验Kappa=0.81（P=0.000），两种检验方法存在较高一致性。
将所有AVE764B检测的假阳性标本进行分析，显微镜检查结果，统计各成分所占比例，见表2。
3 讨论
尿有形成分分析仪在尿液检测中必不可少，是辅助临床医生诊断，***及监测泌尿系疾病的重要方法。随着辅助检查设备的不断发展，临床越来越多的使用尿沉渣分析仪来对尿液中的有形成分进行检测和分析 。直接镜检影像分析仪与人工显微镜检查原理基本相似，都是直观地观察有形成分形态，标本不离心，在光学显微镜下，数码摄像系统对流经过每个有形成分进行摄像。利用计算机***像分析方法，获取尿有形成分的大小，对比度，形状，胞质特征等，运用形态识别软件自动识别和分类尿有形成分。AVE764B系统采用影像技术，像质优劣及相应细胞***像捕捉是决定结果的根本因素，特别是影形红细胞等难以捕捉的细胞***像应该在分析中加以注意 。由于不离心镜检定量能较准确反映尿沉渣有性成分的实际浓度 ，是手工尿沉渣镜检不可取代的。尿直接镜检影像分析仪与普通显微镜相比，简便，高效，定量，精密度好。但影像式有形分析仪对含杂质多的标本因***像模糊，准确辨认较为困难，尤其红细胞检测假阳性率偏高，本次研究AVE764B红细胞检测阳性预测值76.7%，特异性76.4%，假阳性标本结晶，酵母样菌的干扰较高。研究结果显示AVE764B检测红细胞，与显微镜检查比较，差异有统计学意义，但经Kappa一致性检验，两法一致性较高，可能是由于研究样本中阴性样本较多的缘故。AVE764B假阴性，可能由于未离心样本中红细胞计数值偏低。AVE764B在一定程度上可取代显微镜观察，但仍不能完全替代人工显微镜镜检。应将沉渣法结果，干化学法检测结果联合应用 ，对计算机存储***像进行人工重新判定，或任意选取可疑样本进行人工复核，对系统错判和误判部分进行人工核对和纠正，防止漏诊和误诊。
目前，尿液有形成分分析主要有两类，尿液有形成分直接镜检影像分析仪，流式细胞术和电阻抗检测相结合的尿有形成分分析仪。各类分析仪在工作中主要还是过筛作用，对特殊标本进行人工复核，从而提高仪器的准确性，为临床提供准确的数据。
参考文献：
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[4]丛玉隆，马俊龙，张时民，等.尿液细胞成分定量分析方法学研究[J].中华检验医学杂志，2006，29（3）：211-214.
红细胞计数篇3
当前，由于三分类、五分类血细胞分析仪的普遍应用，有些医院的检验科就不再进行血涂片镜检，这样很容易漏检造成误诊。本文着重探讨血涂片检查的重要性。
1 复核血细胞分析仪计数是否正确
由于血细胞分析仪的计数可受很多因素影响，不可能使每项参数都完全正确，所以进行血涂片镜检的重要作用不能忽视。使用血细胞分析仪时，应对每例患者都作血涂片镜检，从血涂片中细胞分布情况，可大致估计血细胞数，因而可对照血细胞分析仪计数是否正确，以保证计数质量。
1.1 对白细胞计数的复核 笔者曾遇一重症肝炎患者，血细胞分析仪计数白细胞异常增高，而血涂片中白细胞分布正常；后经手工计数，白细胞在正常范围，考虑可能是高胆红素血症干扰仪器计数所致。采用生理盐水洗涤，再重新计数，结果正常。由于同时作血涂片的检查，使错误得以及时纠正。血细胞分析仪对白细胞计数的干扰因素可有：巨大血小板、血小板凝块、有核红细胞、溶血素、工作温度等，造成白细胞假性升高或降低，故用血涂片进行复核很有必要。
1.2 对白细胞分类的复核 仪器对细胞分类是基本白细胞在加入溶血素后体积变化来区分，分类比较粗糙，只是一种过筛手段，与传统分类不同，传统手工分类是按基本细胞形态来分类的。目前，血细胞分析仪尚不能明确区分幼稚细胞、嗜酸性或嗜碱性粒细胞和单核细胞，也不能识别异型淋巴细胞等［1］。因此，进行镜检分类是必不可少的，它是保证细胞分类正确的基础。目前尚无一种自动化血细胞分析仪可以代替手工涂片。
1.3 血小板计数的复核 用血涂片进行血小板数复核，需要有丰富的经验，仔细观察血涂片中血小板的形态及分布，如血小板数量正常而形态不正常，可进一步作血小板功能方面的检查。如血小板数与仪器计数有出入，可能因素有：血小板凝集、细胞碎片、纤维蛋白、小红细胞(体积＜30 fl)、标本放置时间过长等，均可严重干扰血小板计数。
2 通过血涂片，并结合血细胞分析仪的各项参数及报警信号，可为临床提供有价值的资料
2.1 根据白细胞参数及直方***，结合血涂片检查分析，可发现更有价值的资料 当参数的直方***提示中性粒细胞数异常时，血涂片检查应特别注意中性粒细胞是否有形态异常，如核左移常伴有中毒颗粒、空泡变性，是否有原始和幼稚细胞等，如中性粒细胞5叶核以上者超过3%则为核右移，为造血功能衰退或缺乏造血物质所致。当参数和直方***提示中间细胞数异常时，血涂片检查就应特别注意嗜酸性、嗜碱性粒细胞和单核细胞的形态变化及其所占比例，注意是否有原始或幼稚细胞。在实际工作中也可发现，白细胞总数在正常范围内的白血病，如果不作血涂片检查，往往易漏诊。当直方***和参数提示淋巴细胞异常时，血涂片检查应特别注意有无异型淋巴细胞，有无原始和幼稚淋巴细胞等。
2.2 根据红细胞参数及直方***，结合血涂片，可为贫血的鉴别诊断提供有价值的依据，这时平均红细胞体积(mcv)均小于正常对照值，红细胞体积分布宽度(rdw)大于正常对照值。红细胞大小不均，大红细胞及巨红细胞易见到，生理性中心浅染区常消失，可见多色性及有核红细胞为巨幼红细胞性贫血，mcv和rdw均高于正常对照组。镜下见许多正色素性和低色素性红细胞则多见于缺铁粒幼细胞性贫血。以上各种原因的贫血均为造血原料不足或利用障碍引起。若见靶形红细胞，rdw为正常范围，则为地中海贫血。在溶血性贫血和再生障碍性贫血中，红细胞形态可大致正常，若易见嗜多色性红细胞，亦可见到有核红细胞，且rdw大于正常对照时，可推断为溶血性贫血；否则，可推断为再生障碍性贫血，并观察到粒细胞和血小板皆少。此外，镰形红细胞可见于血红蛋白s病，口形红细胞常见于遗传性口形红细胞增多症；脾切除患者的红细胞中可见多数棘细胞；在遗传性椭圆形红细胞增多症的血涂片中，椭圆形红细胞可在25%以上；红细胞碎片或不完整的红细胞，在弥漫性血管内凝血、微血管溶血性贫血、重型地中海贫血时出现较多。
3 血涂片镜检可检查寄生虫
临床上常遇到不规则发热的疟疾患者，往往被误诊或漏诊，在临床医师并未怀疑的情况下，由检验人员在血涂片中查见疟原虫而确诊，而血细胞分析仪就无此功能。
【参考文献】
红细胞计数篇4
[关键词] 网织红细胞计数;影响因素;显微镜法;抗凝
[中***分类号]R446.11+3 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2009)07(a)-115-02
Effect of anticoagulant on laboratory reticulocyte count test
CHU Jingying, LU Yuxia, YU Xiaoyu, XU Tingyun, SUN Zhongwen
(Department of Laboratory and Pharmacology, Suzhou Health College, Suzhou 215009, China)
[Abstract] Objective: To develop reticulocyte count test, and detect whether the anticoagulant influences the result of reticulocyte count. Methods: The reticulocyte count was developed by microscope. Results: In the blood without anticoagulant, the reticulocyte count was (9.21±4.02)‰; in the blood with anticoagulant, the reticulocyte count was (10.22±3.99)‰, and there was no significant difference in reticulocyte count between anticoagulant blood and no anticoagulant blood(P>0.05). Conclusion: The anticoagulant has no influence on reticulocyte test.
[Key words] Reticulocyte count; Influencing factor; Microscope test; Anticoagulant
网织红细胞(reticulocyte,Ret)是晚幼红细胞脱核后发育为成熟红细胞过程中,浆内含有残留RNA的红细胞,在瑞氏染色中,其形态学特点与红细胞相同。用煌焦油蓝等染料染色后,根据RNA在浆内的多少、着色成网状及点状不等,用显微镜可以观察和计数。网织红细胞数量的变化能间接反映骨髓的造血功能,不仅是诊断贫血和相关疾病鉴别诊断的重要实验室参数,也是贫血***的疗效评估和溶血、失血性贫血患者病情监测的重要参考指标[1]。网织红细胞检测对于慢性贫血和缺铁性贫血的鉴别也有一定的价值[2],而白血病患者网织红细胞也比正常人偏低[3],对于肿瘤患者,化疗后网织红细胞也可极度降低,故网织红细胞参数变化可作为评价肿瘤患者化疗后骨髓造血功能受抑及开始恢复的较敏感指标[4]。因此,临床上网织红细胞检测是重要的血液学检查指标。
为了进一步了解网织红细胞实验室检测的影响因素,在特定染色温度、染色时间条件下,采用正常健康人静脉血标本,拟进行如下研究:使用显微镜法检测同一人的未抗凝静脉血和EDTA-K2抗凝静脉血进行网织红细胞检测,探讨抗凝剂对于网织红细胞检测结果的影响,现将结果报道如下:
1 资料与方法
1.1 标本来源
我院检验专业和部分护理专业的健康学生,年龄18～20岁,平均(19.0±1.0)岁。
1.2 试剂
显微镜法用10 g/L煌焦油蓝生理盐水溶液,按全国临床检验操作规程配制。
1.3 方法
显微镜法:按全国临床检验操作规程(试管法)操作,染色温度为37℃,15 min,每份标本数3遍,取平均值。采用Miller窥盘计数。
1.4 统计学方法
数据以x±s表示,并进行配对t检验,P
2 结果
抗凝剂对网织红细胞计数影响的检测结果见表1。
表1静脉血标本显微镜法检测结果(x±s)
结果显示,抗凝的静脉血和未抗凝的静脉血网织红细胞计数比较,无显著性差异(P>0.05)。
3 讨论
网织红细胞显微镜检测法是20世纪80年代ICSH(国际血液学标准化委员会)推荐的方法,90年代后,仪器法逐渐用于临床。据文献报道,网织红细胞检测除了与染色温度、染色时间有一定的关系外[5-6],目前临床上检测网织红细胞的方法有仪器法和显微镜法,标本来源也有抗凝血和不抗凝血。显微镜法及仪器法网织红细胞检测结果是否有差异还没有确定,有学者认为仪器法(末梢血抗凝)网织红细胞检测及显微镜法(末梢血不抗凝)间有显著性差异[7],但有学者认为自动网织红细胞分析仪(抗凝静脉血)与显微镜法计数网织红细胞(不抗凝末梢血)对比,无显著性差异(P>0.05)[8];也有报道仪器法(抗凝静脉血)与显微镜法(不抗凝末梢血)比较,有显著性差异[9]。然而,两种不同网织红细胞检测方法之间的差异性是否为使用抗凝剂所致,尚未有相关报道。本实验结果表明,用显微镜法检测:同一人未抗凝静脉血和EDTA-K2抗凝静脉血的结果无显著性差异,证明抗凝剂对检测网织红细胞无明显影响,综合影响因素还需进一步探讨。
[参考文献]
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红细胞计数篇5
方法 用手工方法和用BC-3000分别测定30例血清总胆红素>200 μmol/L的标本,重度黄疸标本离心洗涤后再次测定。
结果离心洗涤前BC-3000与手工方法对白细胞的测定差异有统计学意义;离心洗涤后两种方法对白细胞的测定结果差异无统计学意义。
结论重度黄疸中的胆红素干扰BC-3000对白细胞的测定,应当用手工方法复检,或者离心洗涤后用仪器重新检测。
[关键词] 胆红素;BC-3000;白细胞计数
[中***分类号] R442.4[文献标识码] A[文章编号] 1672-4208(2009)15-0027-01
血液分析仪因其高效率、高精度、操作简便等优点而在各医疗单位广泛应用。但因仪器分析原理的局限性,对其测定结果的干扰因素也很多,比如温度、磁场、药物等,在一定条件下并不能完全代替手工法。病理状态下血清中的高浓度胆红素,是干扰血液分析仪测定白细胞的重要因素之一,报道如下。
1 材料和方法
1.1 一般资料 30例标本7例来自门诊患者,23例来自住院患者,其生化检查总胆红素均>200 μmo/L,男18例,女12例。
1.2 仪器和试剂 深圳迈瑞公司产BC-3000三分类血液细胞分析仪及配套试剂,山东威高集团公司产EDTA-K2抗凝真空管,美国雅培c8000全自动生化分析仪,四川迈克公司产胆红素测定试剂。
1.3方法 所有标本均在清晨空腹采取。胆红素测定用无抗凝真空管,分离血清后立即上机测定。白细胞测定用EDTA-K2抗凝真空管,采血量为2 ml,充分混匀后上机测定。白细胞手工计数和分类按《全国临床检验操作规程》第2版操作[1\]。所有血常规样本完成上述操作后经1500 r/min离心10 min,吸出上层血浆,补充以同等量的稀释液混匀后再上机测定。上述操作在2 h内完成。
1.4统计学方法 所有数据以x±s示,检验后采用
2 结果
离心洗涤前白细胞计数(13.8±3.8)×10.9/L,离心后(6.4±3.0)×10.9/L,手工法(6.5±3.4)×10.9/L。样本离心洗涤前仪器测定的白细胞总数和分类与手工法相应值比较差异均有统计学意义(
洗涤前后***谱分析,见***1,2。
***1为标本离心洗涤前白细胞直方***,其特点是在35～98 fl范围内白细胞密集,主峰靠近50 fl右侧,且单边下降。200～400 fl白细胞极少,呈现单峰特征,分类显示为淋巴细胞增高。这是因为血液分析仪的分析流程是先用溶血素溶解红细胞,然后依据电阻脉冲原理对白细胞计数分类,细胞数量取决于计数池中颗粒的多少,如果红细胞未被完全溶解,则会因为其体积大小的因素计入淋巴细胞数内[2\]。***2为离心洗涤后白细胞直方***,干扰因素被剔除,中性粒细胞不再被掩盖,直方***呈现双峰特征。
3 讨论
重度黄疸是临床常见症状之一,其血清中的胆红素大幅增高,胆红素对白细胞测定的干扰机制,一般认为是红细胞膜脂质异常,膜表面脂蛋白增多,胆红素对溶血素中某种作用成分相抵抗等因素有关[3-4\]。这时的红细胞对溶血素有抵抗作用,导致大量红细胞不能溶解而落入淋巴细胞计数范围,机器将其计入淋巴细胞,从而导致白细胞总数和淋巴细胞分类假性增高,而手工法用的是冰醋酸,其溶解细胞的能力很强,同时计数和分类的准则用的是形态学这一客观指标,所以重度黄疸不会对其造成干扰。离心洗涤后,大部分胆红素被去掉,其对仪器的干扰作用也相应消除。曾有报道不同仪器的溶血素配方不同,对红细胞的溶解能力也不同,因此黄疸的标本并非在所有仪器上均受到干扰[5\]。
BC-3000血液分析仪为电阻抗型血液分析仪,这类仪器的测定原理也称Coulter原理,它是基于血细胞的相对不良导电性而制成的,其分类是通过对细胞膜表面脂蛋白修饰后再分类的,这种设计只能区分颗粒的大小,而不能区分颗粒的性质[6\]。由于各类细胞之间体积交错,在某些病理情况下,如严重肝病[7\]、血红蛋白病、一氧化碳中毒、非寒冷性凝集患者的红细胞,也会因为红细胞对溶血剂的抵抗作用而溶解不良,造成细胞计数和淋巴细胞假性增高。
因此,对于上述病例在用仪器测定过程中,也应当同时做手工测定,以避免出现误差。
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红细胞计数篇6
[关键词] 贫血; 网织红细胞计数; 荧光强度; 临床应用
[中***分类号] R446.113 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)09-66-02
网织红细胞(Ret)是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未成熟的红细胞,其胞质内存留多少不等的嗜碱物质RNA,其RNA含量越多,Ret越不成熟,反之亦然。通过使用核酸荧光染料多聚亚甲基可对细胞胞浆中的核酸物质(RNA)进行染色,越不成熟的Ret其荧光越强,反之,成熟Ret荧光极少或最弱,故将Ret分成高荧光强度网织红细胞(HFR)、中荧光强度网织红细胞(MFR)、低荧光强度网织红细胞(LFR)三部分。IRF定义为中、高荧光强度区域内Ret百分数之和(MFR+HFR),为不成熟Ret比例,可更灵敏的反映骨髓造血系统的状况。
我院使用的具有全自动网织红细胞计数、荧光强度自动化分析及成熟度分类功能的Sysmex X T-2000i 血细胞分析仪,广泛用于临床血液常规标本的检测,为临床提供了大量的分析参数和研究参数,现将网织红细胞及其光强度分析的临床应用情况报道如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象
2009年 1～11月本院住院患者均为首诊并未做过输血及抗贫血***。慢性肾功能衰竭患者共20例,男11例,女 9例,年龄45～79岁;失血性贫血30例,男19例,女11例,年龄23～68岁;缺铁性贫血30例,男13例,女17例,年龄32～73岁;肿瘤性贫血30例,男19例,女11例,年龄42～86岁;再生障碍性贫血20例,男10例,女10例,年龄10～70岁;对照组30例为我院健康体检合格者,其中男 15例,女15例,年龄 20～55岁。
1.2 仪器与试剂
Sysmex XT-2000i全自动血液分析仪及Sysmex XT-2000i全部配套试剂。
1.3 检测方法
所有标本均为空腹静脉血2mL,采用专业真空采血管(EDT A-K2)抗凝并充分混匀,于4h内完成分析。
1.4 质量控制
Sysmex XT-2000i专用配套的低值、中值、高值全血质控物作为室内质控品,各检测数据均在规定的靶值范围内。
1.5 统计学处理
分组统计各项检测指标的均值和标准差(χ±s),并作t检验(采用SPSS10.0统计软件进行分析)。
2 结果
见表1。
3 讨论
Sysmex XT――2000i血液分析仪采用流式细胞术加核酸荧光染色方法测量网织红细胞内的RNA含量,其中前向散射光(FSC)测量细胞体积,侧向散射光(SSC)测量细胞内含物,侧向荧光测细胞内RNA含量[1]。根据网织红细胞内RNA与试剂中的荧光染料(多聚亚甲基)结合后发出的荧光强度将网织红细胞分为低荧光Ret(LFR)、中荧光Ret(MFR)、高荧光 Ret(HFR),同时计算出未成熟Ret的比率(IRF),以显示Ret的成熟程度。越是幼稚的Ret其细胞内RNA含量越多,故仪器所测得的荧光越强,HFR其胞浆中残留的RNA最多,显示最强的荧光,为较幼稚的Ret;LFR其胞浆中残留的RNA最少,其荧光强度最弱,为接近成熟的Ret;MFR为介于两者之间的Ret。
正常生理情况下,MFR、HFR水平较低,在造血受到刺激时,大量较为幼稚的Ret从骨髓释放到外周血中,使MFR、HFR含量显著增高,因此MFR、HFR更能真实的反应红细胞生成的开始。IRF为MFR与HFR之和可总体反应骨髓红系造血状况,研究表明,红系增生是粒系多核细胞恢复的早期和敏感指标,首先出现增加的是网织红细胞内MFR群,而后是HFR群,其变化的顺序基本是MFR+HFR,多核细胞,Ret绝对值。骨髓移植后8～9d,HFR增高是最早出现的骨髓造血功能恢复的敏感指标,其后网织红细胞上升(约20d)、分叶核粒细胞上升(约46d)[2]。
本组结果表明,除再生障碍性贫血Ret绝对值和百分比显著低于健康对照组(P
本统计结果显示,各贫血组Ret绝对值与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05),而Ret百分比、MFR%、HFR%、IRF%增高,LFR%降低,与健康对照组比较差别有统计学意义(P
综上所述,网织红细胞荧光强度分析是骨髓造血系统抑制和恢复较敏感的指标,可作为某些贫血诊断和鉴别诊断的初筛指标,特别是MFR、HFR、IRF参数比网织红细胞更敏感,这些幼稚的网织红细胞参数的变化是反应骨髓红系造血水平的关键参数,对判断和监测骨髓的损伤程度和预后以及贫血疗效观察具有重要的临床意义。
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红细胞计数篇7
脑脊液（Cerbospinal flui， CSF）是一种细胞外液，它是血浆透过脉络丛后的清晰体液，它产生各自脑室的微血管丛。通过血液的透析作用所产生，充满脑室系统及脑和脊髓的蛛网膜下腔，最后回到血液循环。它的产生保持着动态平衡。不管是由于颅脑、脊髓或脊椎何种原因引起的出血，一旦进入脑蛛网膜下腔以后，必将引起软脑膜的一系列病理过程和相应的脑脊液细胞学改变，因其刺激并非由致病菌所致，故与一般感染疾病的脑脊液细胞学改变不同［1］。在我们日常接收的CSF标本中经常会遇见一些含血(或血性)脑脊液标本。如不仔细分析是血性脑脊液还是穿刺伤所致以及白细胞增多的原因，就有可能将其误诊。CSF细胞学检查有助于对病理性和腰穿误伤性血性CSF的鉴别诊断。
1 病理性血性脑脊液和腰椎穿刺伤的鉴别
1.1 病理性出血脑脊液
腰穿顺利，无损伤。脑出血的CSF外观呈红色（或血性）、黄色或微黄，混浊度依出血量的多少不等。血与CSF混合均匀，前后几个标本颜色相同。经快速离心后，CSF上清色黄。而轻度脑出血有时在外观上肉眼是观察不到红色，必须借助显微镜在镜下观察红细胞量的多少，红细胞膜不完整、有皱缩现象、不规则，有畸形改变，这就是所谓的镜下血性CSF改变现象［2］。⑴ 出血早期的CSF细胞学特点 大量的红细胞及高比例嗜中性粒细胞，2～3d内达高峰，占75%～100%，1～2周后消失。随着嗜中性粒细胞的下降，激活单核细胞增加，并可见嗜中性粒细胞和激活单核细胞并存（***1，见封2），一般常在出血后2～3d出现。约在3d左右出现红细胞吞噬细胞（***2，见封2）。由于红细胞的破碎、血红蛋白被酶解，出血后5～7d即可见到蛛网膜下腔出血的特征性细胞—含铁血黄素吞噬细胞和胆红质细胞（***3，见封2），在吞噬细胞胞浆内含铁血黄素细胞被染色成灰黑色或棕黑色颗粒。⑵ 具体检测方法 将腰椎穿刺所获得的0.1mL新鲜CSF，置于我室Cytosoin3型细胞玻片离心仪，以500～1000r/min离心5～10min后取出玻片，经自然干燥，行迈-格-姬（MGG）常规染色，于细胞***像仪下观察细胞形态。镜下若发现红细胞吞噬细胞、含铁血黄素吞噬细胞和胆红质等类型的吞噬细胞，则提示为病理性出血（但必须从前未经过腰穿以免因以往的穿刺伤而造成误诊），同时并根据各阶段相继出现的细胞形态、色泽推测出血时间。
1. 2 对出血是否停止以及是否再次出血的鉴别
由于红细胞进入脑脊液后，通过机体免***机制会不断地被破碎、吞噬和清除。出血停止后，红细胞特别是新鲜红细胞的数量将会逐渐减少，色泽变淡，破碎的红细胞数量逐渐增多，则提示出血已经停止。如一次出血后同时见到吞噬新鲜红细胞、退色红细胞，含铁血黄素和胆红质的吞噬细胞的共存，同时吞噬细胞外亦可见不同数量的红细胞，多提示出血未止或有再次出血的可能［1］。
1.3 穿刺损伤时
腰穿不顺利，损伤局部血管。CSF外观可见血液不能马上和CSF混合均匀，因此，先流出的CSF混血较多、色红。后流出的CSF混血少、色淡，越流越淡，最后有时澄清。穿刺损伤血管，有时也可颜色先后一致，若出血较多，标本静止后血液自行凝固。因血性CSF中嗜中性粒细胞反应的出现，红细胞吞噬细胞、含铁血黄素吞噬细胞和胆红质细胞的形成和出现均需经过一定的时间，因而在腰穿误伤所致的新鲜血性CSF中，是不会也来不及出现上述嗜中性粒细胞反应和单核-吞噬细胞。因此发病后立即送检的新鲜含血标本中有无上述吞噬细胞存在，即成为鉴别脑出血、蛛网膜下腔出血、脑外伤等病理性出血，还是因腰椎穿刺伤性出血而导致CSF标本含血（或血性）的重要客观依据［1-2］。
2 出血量的评估
2.1 根据红细胞的数量，可通过下列公式计算［3］：
出血量=脑脊液中红细胞×平均脑脊液量（150mL）÷周围血中红细胞数
2.2 对于血性CSF，可用公式的推算做为鉴别依据的方法。血性CSF的处理：要计数CSF的白细胞总数和红细胞总数，同时检查周围血液白细胞总数和红细胞总数。出血初期在12h以内，可以按红细胞︰白细胞500∶1的比例计算（即每进入CSF 500个红细胞将同时带入一个白细胞），计算血液进入CSF时所带入的白细胞数/mm3。严重贫血或白血病患者，可临时为患者进行血常规检查，以便进一步明确其外周血液中红、白细胞的确切比值。
2.3 具体计数方法 按下例公式可以校正CSF真正的白细胞总数［3］。
校正后CSF白细胞数＝未校正CSF中白细胞数－CSF中红细胞数×周围血白细胞数÷周围血红细胞数如果计算的CSF白细胞数不高，分类也比较接近正常比例，则CSF细胞数正常。如果计算出CSF白细胞数升高很多，说明CSF中白细胞升高，然后对比分析血中白细胞分类和CSF白细胞分类的关系。正常CSF中不应有中性粒细胞，但因腰穿时偶可发生难以避免的穿刺性外伤，致使脑脊液中可见中性粒细胞的污染。此时脑脊液计数大多正常［1］。出现高比例嗜中性粒细胞则提示有病理性出血。如果嗜中性粒细胞比淋巴细胞少或比较接近，则考虑颅内感染的可能性。
CSF细胞学检查对病理性和腰穿误伤性血性CSF的鉴别诊断等方面有一定的价值。对脑血管病的诊断、鉴别诊断和病理生理的了解发挥更积极的作用。
参考文献
［1］粟秀初，孔繁元. 实用CSF细胞学彩色***谱［M］. 北京：人民***医出版社，1996：26-27.
红细胞计数篇8
【关键词】 胸腹水 优利特300 uf-1000i 手工法 结果比较
目前浆膜腔积液细胞检查仍为传统的显微镜下直接细胞计数、分类检测、但是此方法对结果的影响因素较多，难以快速、客观、准确的取得实验结果。因此，有医学工作者试***将全自动尿沉渣分析仪用于胸腹腔积液细胞计数，但不同报道结果有很大差别，为了证实我院引进一年uf-1000i在胸腹水检测中的应用价值，以及优利特-300尿干化学分析仪测定胸腹水中蛋白含量和比重，我们收集胸腹水标本68例进行检测分析，并和手工法比较，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 标本来源 随机收集本院门诊和住院病人送检胸腹水标本，共68例，其中女性30例，男性38例。采集后不加抗凝剂立即送检，30min内检测完毕。
1.2 仪器 uf-1000i（日本sysmex公司）；尿十一项干化学分析仪（桂林优利特-300）；配套试剂和原装质控品；olypasx-31显微镜；标准牛鲍氏计数板。
1.3 方法
1.3.1 每份标本同时用优利特-300和手动法检测蛋白含量和比重。
1.3.2 每份标本同时用uf-1000i和手工法检测红细胞、白细胞、上皮细胞数量。当白细胞计数>300×106/l的标本，2000r/min离心3min，收集细胞做形态学分类（瑞氏染色）。
1.3.3 uf-1000i和优利特-300的操作说明按照仪器说明书进行，手工检测方法按《全国临床检验操作规程》进行，蛋白质和比重结果的统计分析采用x2检验，细胞计数结果的统计分析采用配对t 检验。
2 结果
2.1 优利特-300与手工法分别测定68例胸腹水的蛋白质、比重和ph值，经x2检验，蛋白质含量和比重均有极显著差异（x2=106、17，p<0.01、p<0.01）。68例胸腹水的ph值均大于7.5。结果见表1。
表1 优利特-300与手工法测定胸腹水的蛋白质、比重结果的比较
.
2.2 uf-1000i和光镜同时计数胸腹水中红细胞、白细胞、经配对t 检验，红细胞数两者有显著性差异（t =1.78，p>0.05），白细胞数两者有显著性差异（t =5.92，p<0.05）。
2.3 uf-1000i检出上皮细胞数>10/μl者，白细胞数均>300×106/l，共26例，经2000r/min离心3min取沉淀涂片瑞氏染色，油镜下手工分类计数，结果见表2.
表2 uf-1000i与手工计数上皮细胞结果比较
uf-1000i 手工
ec(μl) 间皮细胞（100%）
<20 1～6
20～50 10～20
>50 >20
3 讨 论
优利特-300是专为尿液分析设计的，特异性很高，其蛋白质的检测是根据染料结合的蛋白误差法原理，高出ph值会使燃料本身颜色加深，造成假阳性，加之胸腹水中所含蛋白组分与尿液中有较大差别，也是造成检测结果差异的原因之一；而比重的测定则是利用尿中电解质与聚电解质发生离子交换的原理，在高ph值的情况下，测定结果将偏低。正常人的新鲜尿ph值在5～7之间，本文用优利特-300测定出的68份胸腹水值均大于7.5，势必造成蛋白质出现假阳性以及比重偏低，与手工法比较其p <0.01，结果统计学有极显著性差异，因此，优利特-300不能用于检测胸腹水蛋白质含量和比重。
uf-1000i型全自动尿沉渣分析仪应用流式细胞和电阻抗原理[1]，通过测定各种有形成份的荧光强度（f1）和荧光脉冲宽度（f1w）、前向散射光强度（fsc）和前向散射光脉冲宽度（fscw）以及电阻抗的大小（lmp），识别和计数标本中各种有形成分，如红细胞、白细胞、上皮细胞等。标本可自动混匀，消除了离心沉淀法的体积计算不准，细胞成分附壁，细胞沉淀易破环变形等影响因素，其结果客观可靠。仪器可在相当大的范围内对红细胞、白细胞等进行准确计数，作出定量报告。本文用uf-1000i型全自动尿沉渣分析仪及手工法同时对68例胸腹水进行红细胞、白细胞的计数，两法检测结果经统计学处理，红细胞数无显著性差异（p >0.05），而白细胞数有显著性差异（p<0.05），这是由于胸腹水的特殊性造成的，与新鲜尿液相比，胸腹水在体内停留时间较长，其中的白细胞会发生聚集、溶解、变性等，而且胸腹水中可能有较多的脱落的上皮细胞，甚至是肿瘤细胞，都会对uf-1000i计数的白细胞数产生影响，因此，uf-1000i可以用于检测胸腹水中的红细胞数，不能检测其中的白细胞数。
对于血性胸腹水，因其所含红细胞数量较多，临床上一般以“++ — ++++”/hp报告，没有给出准确的计数结果。uf-1000i检测结果与手工计数红细胞无显著性差异（p >0.05），可用于检测红细胞数，但鉴于成本过高，不提倡采用。在某些特殊情况下，如果确实需要，可使用uf-1000i得到精确的红细胞计数结果。
由表2可知，uf-1000i检出上皮细胞增多（大于20/μl）胸腹水，经离心沉淀、瑞氏染色、油镜下手工分类计数得出的间皮细胞百分比与上皮细胞数具有相关性，当间皮细胞百分比>20%时，上皮细胞数均>50/μl，而间皮细胞百分比>20%时是临床上疑为肿瘤的一个重要依据。谭家成[2]用uf-100检出上皮细胞（ec）和/或小圆上皮细胞（src）增高的脑脊液，经脱落细胞学检查证实为肿瘤细胞。因此，若uf-1000i检测胸腹水的上皮细胞数>50/μl，可作为进行细胞分类以及脱落细胞学检查的参考指标。
曾有文献报道[3]uf-100全自动尿沉渣分析仪可用于胸腹水的检查，但本试验结果表明uf-1000i只能用于检测胸腹水中的红细胞数量，不能用于检测其中的白细胞数量，与其结论不符。
综合本文试验结果，我们认为胸腹水的检测目前仍以手工法为宜。
参 考 文 献
[1]从玉隆，马俊龙. 当代尿液分析技术与临床[m].第一版，北京：中国科学技术出版，2000；15-35.
红细胞计数篇9
[关键词] CD—3200型血液分析仪；显微镜；平均红细胞体积；应用价值
[中***分类号] R446.11+1 [文献标识码] A [文章编号] 1674—4721（2012）09（b）—0102—02
仪器法计数血小板易受多种因素干扰，可通过血小板直方***及相关参数的变化来判断计数结果的可靠性，必要时通过手工法检测以纠正仪器误差[1]。本研究主要比较美国雅培公司的CD—3200型血液分析仪在不同平均红细胞体积（MCV）患者中，对于检测血小板计数与计算RBC与PLT比率的意义，现报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择本院2011年1月～2012年1月实施血常规检测的患者80例，其中红细胞正常值规定在：男（4.0～5.5）×1012/L，女（3.5～4.5）×1012/L，血小板正常范围为（100～300）×109/L，根据MCV水平的不同分为两组。正常者40例，男20例，女20例；年龄18～40岁，平均（29.6±3.6）岁。MCV 0.05），具有可比性。
1.2 仪器与方法
所有80例患者均使用手工显微镜法进行计算后同时使用机器法进行检测，本组所用显微镜为日本奥利巴斯双目显微镜，放大倍数为4～40倍，血细胞分析仪为美国雅培公司的CD—3200型血液分析仪，比较不同MCV患者血小板计数结果，并计算RBC与PLT比率总均值。
1.3统计学处理
应用SPSS 13.0软件进行，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间均数比较用t检验，两组间率的比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同MCV患者检测结果比较
机器法所得血小板计数在两组中均大于显微镜法（P < 0.05），且在MCV
2.2 不同MCV患者RBC与PLT比率总均值比较
两组机器法所得RBC与PLT比率总均值大于显微镜法（P < 0.05），且在MCV小于80 fl的患者中，机器法和显微镜法所得RBC与PLT比率总均值均小于MCV正常组（P < 0.05）。见表2。
3 讨论
2001年国际血液学标准化委员会推荐了间接PLT计数参考方法，即采用流式细胞分析仪测定经单克隆抗体标记的全血RBC与PLT比率，然后用颗粒计数仪或经校准的血液分析仪准确计数RBC，最后计算血液中PLT参考值，由于是对细胞做特异性标记后分析，因而影响因素较少，检测结果可靠[2]。但在用血液分析仪进行血小板计数时，受到***糜微粒和红细胞碎片、冷凝球蛋白、红细胞夹杂物等干扰，其结果易受影响，其中主要的干扰来自于红细胞碎片和***糜微粒[3]。本研究则比较不同MCV患者使用美国雅培公司的CD—3200型血液分析仪检测后的RBC和PLT比率并与手工法进行对照，以探讨CD—3200仪器的在不同MCV患者检测中的应用价值。
CD—3200型血液分析仪检测，由于红细胞和血小板的计数是在同一个通道中进行，且它们之间仅仅以体积大小来区别，因而难免有些患者的部分小血红细胞被当作PLT来计数，影响PLT结果，但并不是所有小红细胞对血小板的检测结果都会造成影响[4]。本组中机器法所得血小板计数在两组中均大于显微镜法，且在MCV小于80 fl的患者中，机器法和显微镜法所得血小板计数均多于MCV正常组，因为在使用CD—3200型血液分析仪对血小板进行计数时，其影响因素较多，处理收到小血红细胞影响外还受到血小板凝集反应的影响，同时，EDTA的抗凝活性可会导致CD—3200型血液分析仪对血小板计数的偏差，所以此时建议进行手工显微镜法进行校对[5]。当存在小红细胞时，仪器计数值高于样本的实际值，血小板直方***呈异常的特征性改变，因此，当红细胞平均体积
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红细胞计数篇10
[关键词] 血红蛋白浓度；溶血性贫血；诊断指标；缺铁性贫血
[中***分类号] R556 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）02（a）-0063-02
溶血性贫血系指破坏红细胞的速度加快，而超越骨髓造血功能限度时发生的一类贫血。疾病发生后血红蛋白和外周血红细胞有不同程度降低，网织红细胞数量增加，但存在形态异常的红细胞；LDH与血清间接胆红素升高；红细胞存活时间减小。平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）检测作为贫血鉴别诊断指标，用于鉴别诊断缺铁性贫血（IDA）及巨幼细胞性贫血（MA）的研究较多，而关于通过外周血象MCHC诊断溶血性贫血（HA）患者的报道较少。本院对MCHC作为诊断早期溶血性贫血指标进行了研究，现报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2009年10月～2011年12月来本院就诊HA、小细胞HA、IDA、MA患者各50例，均为首次诊断，而且无心、肾、肺、肝等疾病。所有患者诊断均符合《血液病诊断及疗效标准》[1]。各组女性25例，男性25例，年龄25～61岁，各组平均年龄分别为HA：（42.5±7.2）岁，小细胞HA组：（38.5±6.3）岁，IDA组：（36.2±7.6）岁，MA组：（41.5±5.6）岁，统计数据均为首次就诊***前数据；选择健康人群50例作为对照组，其中女性25例，男性25例，平均年龄（37.5±7.5）岁。
1.2 仪器与试剂
实验仪器为亚培CD3700全自动5分类血球分析仪，试剂为仪器配套产品。
1.3 方法
应用亚培CD3700全自动五分类血细胞分析仪对各组标本MCH、MCHC、Hb进行检测。检测时间不超过标本采集后30 min，然后比较HA、小细胞HA、IDA、MA及对照组等各组MCH、MCHC、MCV（MCH是每升血液血红蛋白量与红细胞数量的比值， MCHC是每升血液中血红蛋白量红细胞压积值的比值，MCV是每升血液中红细胞压积红细胞数量的比值[2]）；比较HA组与对照组MCH和MCHC；比较小细胞HA组与对照组的MCV；比较IDA组与对照组的MCH、MCHC、MCV；MA组与对照组的MCH及MCV。
1.4 数据处理
采用SPSS 15.0统计学软件对文中数据进行分析，计量资料数据以均值±标准差表示，组间比较采用t检验，P﹤0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
外周血象MCHC比较显示HA患者MCHC明显比MA、IDA及对照组要高，差异有统计学意义（P﹤0.01）；小细胞HA患者和MA患者外周血象MCHC与对照组差异无统计学意义（P﹥0.05），而小细胞HA患者MCV明显比对照组低（P﹤0.01），MA患者MCV则明显高于对照组（P﹤0.01）；外周血象MCHC最低的IDA患者与对照组及其他实验组差异有统计学意义（P﹤0.01）。见表1。
3 讨论
溶血性贫血（HA）的基本原因是由于红细胞的存活时间减小，被破坏的程度增加， 红细胞的损耗超过了骨髓造血功能增强限度所致的一组贫血。健康人类的血液循环中，红细胞的存活时间为100～120 d（ 新生儿期为80～100 d）， 每天从血液中因衰老破坏而被清除的红细胞约有1%， 同时骨髓的造血功能可以将数量同等的新生红细胞释放进入血液循环以稳定血液中红细胞数量。健康人通过骨髓造血补充红细胞的功能很强，最大可以达到正常成人水平的6～8倍， 因此， 只有当红细胞存活时间缩短并且破坏速度加快，而超越骨髓造血功能限度时，才能导致贫血。一般认为， 当红细胞的存活时间少于15～20 d时， 就能导致贫血。溶血性贫血发病人数一般为血液病发病总数的15%左右[3]，且病因复杂，以原发性AIHA最多，能占到HA总数的82%左右[4]。因病因不同，临床表现也不尽相同，并且由于其确诊需较高的实验室检查条件，而且易被临床医生疏忽，常引起漏误诊[5]。
HA患者常因肝功能异常而无法通过血清间接胆红素的变化鉴别；除了再生障碍性贫血患者以外的良性类型贫血患者几乎都能见到网织红细胞升高；红细胞寿命测定操作繁琐费时，Coombs实验的灵敏度和特异性不够，对HA的诊断没有很大帮助[6-7]。因此，诊断HA患者需要选择一项早期、简便、特异、灵敏的实验指标。
老年慢性HA患者对外界的免***力不强，并且贫血会加重机体免***功能损害，如果诊断不够及时明确可能迅速加重病情甚至危及生命。关于慢性HA患者，没有典型的临床表现和骨髓检查，因此如果早期筛选没有一项早期、简便、特异、灵敏的实验室诊断指标可以导致病情加重；关于急性HA，早期筛选诊断可以节约时间来更快的抢救生命。
近年来，很多文献报道了MCH、MCHC、MCV诊断鉴别IDA、再生障碍性贫血及MA，但HA的早期筛选中选用MCHC作为实验室指标的报道较少。本文中结果显示MCHC对HA的特异性和灵敏度较高，HA患者中除了少数小细胞HA患者，外周血象MCHC均高于对照组及其他实验组；对于少数HA合并缺铁性贫血或先天遗传小细胞合并HA患者，MCH和MA与对照组的差异无统计学意义，应结合MCV诊断，MCV明显高于对照组诊断为MA，而MCV明显低于对照组则诊断为小细胞HA。虽然HA患者检测MCH的结果与小细胞HA患者、IDA、MA有一定的差异，但对照组和MA患者的MCH与HA患者有小部分交叉重叠，因此，不能将MCH作为早期筛选HA的指标。
临床选用MCHC指标早期筛选诊断HA时有几个方面需要特别注意：（1）发现少数影响判断的小细胞HA患者时，应结合MCV鉴别诊断；（2）体外标本MA可能会导致假阳性，发现时可通过网织红细胞计数诊断；（3）标本采集后30 min内应检测完毕，如实验检测不能按时，可以先将标本放于40℃冰箱内保存，最好存放时间不高于5 d[8-9]。MCHC对HA的诊断灵敏、特异，且检测方便，价格便宜，因此可作为HA的早期诊断指标，具有重要的临床意义。
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