ELSD法测定注射用硫酸异帕米星含量

【摘要】目的建立高效液相色谱蒸发光散射检测(HPLCELSD)法测定注射用硫酸异帕米星含量的方法。方法色谱柱为ZorbaxSBC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为1%三氟醋酸水溶液甲醇(体积比95∶5)),流速:0.5mL/min;蒸发光散射检测器,漂移管温度45℃,载气压力368Pa。结果异帕米星在0.1~0.8mg/mL的范围内呈较好的线性关系(r=0.9995),平均回收率101.0%,RSD=0.32%;系统精密度RSD=0.34%。结论本方法操作简便、快速，方法的精密度、准确性、重现性均较好地满足质量控制的要求，可用于注射用硫酸异帕米星的质量控制。

【关键词】高效液相色谱法;蒸发光散射检测器;硫酸异帕米星

Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCELSDmethodforthequantificationofisepamicinsulfateintheinjection.MethodsTheanalysiswasperformedonacolumnofZorbaxSBC18(250mm×4.6mm,5μm).Themobilephaseconsistedof1%tifluoroaceticmethanol(95∶5)andtheflowratewas0.5mL·min-1.Thedrifttubetemperaturewas45℃，ELSDwasusedasthedetectorwithpressureofnebulizinggasof368Pa.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.1~0.7mg/mL(r=0.9995).Theaveragerecoverywas101.0%withRSD0.32%.ConclusionThismethodissimple,rapid,accurateandreproducibleforthequalitycontroloftheinjectionofisepamicinsulfate.

Keywords:HPLC;evaporativelight-scatteringdetection;isepamicinsulfate

硫酸异帕米星为氨基糖甙类抗生素,由庆大霉素B半合成而来，目前仅在日本抗生素基准解说（简称“日抗基”）中收载。“日抗基”中采用抗生素微生物检定法测定硫酸异帕米星的含量,操作烦琐、测定误差较大。由于氨基糖甙类抗生素无紫外吸收,无法采用紫外检测器，因此,通常采用衍生化的方法进行测定［1~2］，但该法操作烦琐、费时,而且反应过程中可能会产生副产物,干扰有关物质的测定。蒸发光散射检测器（ELSD）是一种通用型质量检测器,其响应不依赖物质的光学特征,对无紫外或紫外末端吸收的有机化合物的检测显示出极大的优越性。有文献报道用蒸发光散射检测器进行氨基糖甙类抗生素的质量分析［3］。本研究建立了在酸性条件下HPLCELSD法测定注射用硫酸异帕米星含量的方法,测定结果与“日抗基”中收载的微生物检定法的测定结果基本一致。

1材料与方法

1.1仪器与试剂岛津高效液相色谱系统2010CHT型和SEDEX75型蒸发光散射检测器;ZorbaxSBC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)。三氟醋酸为TEDIACOMPANYINC产品,分析纯;水为自制双蒸水。硫酸异帕米星标准品（规格：684mg/g,批号：050701）及注射用硫酸异帕米星由海南长安国际制药有限公司提供。

1.2色谱条件采用1%三氟醋酸水溶液甲醇(体积比95∶5)为流动相,流速为0.5mL/min;ELSD检测器漂移管温度为45℃,载气压力368Pa;进样量20μL。

1.3溶液的配制

1.3.1标准品溶液的配制取硫酸异帕米星标准品,精密称定,用水溶解,分别制成浓度为0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mg/mL的标准溶液,每个浓度平行配制2份。

1.3.2供试品溶液的配制取供试品注射用硫酸异帕米星,精密称定,用水溶解,制成浓度为0.5mg/mL的溶液,平行配制6份。

1.4方法学考察

1.4.1线性关系精密称取异帕米星对照品适量,加水制成含注射用硫酸异帕米星0.1、0.2、0.4、0.6及0.8mg/mL的溶液,分别进样20μL,以浓度的常用对数（X）为横坐标,以峰面积的常用对数（Y）为纵坐标作***,计算得回归方程：Y=1.2496X+5.663，r=09995。结果表明异帕米星在0.1~0.8mg/mL的范围内呈较好的线性关系。

1.4.2精密度试验取对照品溶液,连续进样6针,以主峰峰面积计算RSD为0.34%。

1．4．3稳定性试验取供试品（批号051101）溶液,分别于0、1、2、4、6、8h取20μL,注入液相色谱仪,记录色谱***,结果RSD为0.78%。

1．4．4重复性试验取同一批供试品（批号051101），配制成6份溶液，分别进样分析，含量测定结果的RSD为0.6%(n=6)。

1.5回收率试验精密称取已知含量的注射用硫酸异帕米星适量（高、中、低各3份）和与之相对应量（按注射用硫酸异帕米星处方比例）的硫酸异帕米星标准品9份，分别置于100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，取20μL注入液相色谱仪进行测定,计算回收率，测得回收率分别为100.8%、100.9%和101.4%，平均回收率为101.0%，RSD为0.32%,表明回收率良好。

2含量测定结果

采用本法测定3批注射用硫酸异帕米星的含量；按企业申报的质量标准测定方法，采用微生物检定二剂量法测定注射用硫酸异帕米星的含量，结果见表1。结果表明两种方法的含量测定结果非常接近。硫酸异帕米星供试品溶液的色***谱见***1。

3讨论

3.1本文所建立的HPLCELSD方法与目前中国药典采用的效价方法及英、美等国家采用的衍生化方法比较，具有以下优点:不需要进行衍生化，减少了样品前处理所带来的误差，提高了分析的精度。

表13批样品HPLCELSD法与微生物检定法测定结果（略）

Tab.1ContentofisepamicinsulfatedetectedbyHPLCELSDandantibioticsmicrobialassays,separately

1.硫酸根;2.异帕米星

***1硫酸异帕米星测定HPLC色谱***（略）

Fig.1HPLCchromatigramofisepamicinsulfate

3.2已有文献报道采用0.05mol/L五氟丙酸溶液甲醇系统为流动相测定硫酸异帕米星原料的含量［3~4］，未见对注射用异帕米星的含量进行测定的文献报道，本文参照硫酸小诺霉素注射液的小诺霉素组分测定方法［5］建立了测定注射用异帕米星含量的HPLCELSD法，结果表明本法可靠、可行。

【参考文献】

［1］JILLAM.Highperformanceliquidchromatographicdeterminationofisepamicininplasma,urineanddialysate［J］.JChromatogr,1990,526:487-488.

［2］MAYUMIS,KOICHIROK,EIKOY,etal.Columnliquidchromatographicdeterminationofisepamicininnavityusinggauze［J］.JChromatogr,1990,529:473-475.

［3］王明娟,成双红,张斗胜，等.HPLCELSD法测定异帕米星含量［J］.中国抗生素杂志，2003，28（1）：20-21.

［4］王建,洪利娅,倪坤仪,等.高效液相色谱蒸发光散射检测法测定硫酸异帕米星及其有关物质的含量［J］.分析化学,2006（1）:19-22.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部［M］.北京：化学工业出版社，2005:719.

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