学文网【摘 要】 目的：建立测定金乌骨通胶囊中原儿茶酸和原儿茶醛含量的方法。方法：采用高效液相色谱法；色谱条件：安捷伦 C18柱（250mm× 4.6mm，5μm），甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液为流动相（梯度洗脱），流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：256nm。结果：原儿茶酸在0.0793～0.4758μg范围内、原儿茶醛在0.00526～0.3153μg范围内呈良好的线性关系；原儿茶酸平均回收率为97.01%，RSD 为1.41%（n=6）；原儿茶醛平均回收率为98.19%，RSD为1.82%（n=6）。结论：原儿茶酸峰与原儿茶醛峰及其他杂质峰能够有效分离，其方法简便，准确度、灵敏度高，重现性和稳定性好，能够满足本品有效成分质量控制的要求。
【关键词】 金乌骨通胶囊；高效液相色谱法；原儿茶酸，原儿茶醛；含量测定
【中***分类号】R284.2 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）04-0029-02
金乌骨通胶囊由金毛狗脊、乌梢蛇、葛根、***羊藿、姜黄、补骨脂、木瓜、土牛膝、土***参、威灵仙等十味药组成，具有滋补肝肾、祛风除湿、活血通络的功效，临床用于肝肾不足、风寒湿痹、骨质疏松、骨质增生引起的腰腿酸痛、肢体麻木等症状[1]。其中，金毛狗脊、木瓜的活性成分主要是原儿茶酸和原儿茶醛[2-3]。现代药理实验表明，原儿茶酸和原儿茶醛具有增加冠脉流量、抗炎等活性，体外具有抑血小板聚集、抗菌等生理活性[4-5]。有文献采用薄层色谱法鉴别金乌骨通胶囊中的原儿茶酸和原儿茶醛[6]；研究采取高效液相色谱法测定其原儿茶酸和原儿茶醛含量，有助于更好的控制该药品质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器 安捷伦1260 高效液相色谱仪；梅特勒AG135电子天平；岛津UV-2401紫外分光光度计。
1 .2 材料 原儿茶酸（批号：810-200205）、原儿茶醛（批号：110810-200205）对照品均购自中国药品生物制品检定所；金乌骨通胶囊由贵州盛世龙方制药有限公司提供；甲醇、乙腈均为色谱纯；水为娃哈哈纯净水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱（250mm×4. 6mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液，按表1梯度洗脱；流速：1.0ml/min，柱温：35℃；检测波长：256nm。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取原儿茶酸、原儿茶醛对照品适量，精密称定，置于同一容量瓶中，加甲醇制成分别含原儿茶酸15.86μg/ml和原儿茶醛 10.51μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取样品5g，精密称定，精密加50ml乙酸乙酯，称重，水浴回流30min，放冷，用乙酸乙酯补足重量，滤过，取续滤液25ml蒸干，加甲醇2ml使溶解并转移置5ml量瓶中，加1%的冰醋酸至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 系统适用性实验 分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱***，供试品溶液色谱***中分别呈现与对照品溶液色谱***中保留时间相一致的两色谱峰，原儿茶酸与原儿茶醛两成分峰的分离度较好，与相邻杂质峰完全分离，阴性无干扰。见***1。
2.4 线性关系试验 取“2.2.1”的对照品溶液，分别精密吸取5、10、15、20、25、30μl注入色谱仪，记录色谱***，以进样质量数（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得原儿茶酸的回归方程Y =4748.43767X -8.12860，r= 0.99999；原儿茶醛的回归方程Y = 2003.05491X -4.81000，r= 0.99995。结果表明，原儿茶酸在0.0793～0.4758μg、原儿茶醛在0.00526～0.3153μg范围内质量数与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液20μl，连续进样6次，记录色谱***，测定原儿茶酸、原儿茶醛的峰面积，计算原儿茶酸、原儿茶醛的RSD分别为0.22%、0.21%。实验表明仪器的精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密吸取“2.2.2”项下供试品溶液20μl，分别在0、6、10、16、22、25h各进样一次，测定原儿茶酸、原儿茶醛的峰面积，原儿茶酸、原儿茶醛的RSD分别为0.22%、0.21%。表明供试品溶液在25h内稳定。
2.7 重复性试验 取同一批号（130717）供试品，按“2.2.2”项下的方法平行制备6份供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件测定，测得原儿茶酸、原儿茶醛的平均含量分别为0.0211mg/g、0.0029mg/g，RSD分别为0.73%和1.23%（n=6），表明此方法重复性良好。
2.8 回收率试验 分别取原儿茶醛和原儿茶醛对照品29.31mg和11.45mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5.00ml置500ml量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。取同一批号（130717）的供试品5g，精密称定，精密加对照品储备液50ml，按“2.2.2”项下的方法，制备供试品溶液，精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，测定原儿茶酸、原儿茶醛的含量，计算回收率，结果见表1、2。测得原儿茶酸平均回收率97.01%，RSD=1.41%，原儿茶醛平均加样回收率98.19%，RSD=1.82%。符合分析要求。
2.9 样品含量测定 取5批样品，按照供试品溶液的制备方法制备，照上述色谱条件测定计算，结果见表4。
3 讨论
3.1 测定指标选择 由金乌骨通胶囊的处方组成可知，要控制好该药品质量，必须控制好处方中主药质量，该药品质量标准的研究中也以葛根、***羊藿、姜黄、补骨脂等的活性成分测定，即葛根素、***羊藿苷、姜黄素、补骨脂素和异补骨脂素等的含量测定来控制质量[7]。金毛狗脊、木瓜中含有原儿茶酸和原儿茶醛也是该药品功效活性成分，有必要开展原儿茶酸和原儿茶醛含量测定指标，比文献中采用薄层鉴别更好的控制该药品质量。
3.2 检测波长的选择[8] 取原儿茶酸、原儿茶醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成含原儿茶酸、原儿茶醛分别为10μg/mL的溶液，摇匀，照紫外分光光度法（2010年版中国药典一部附录VA），在190～500nm 处扫描，溶液在256、280、320nm的波长处均吸收波长处有最大吸收，考虑到该样品成分复杂性；结合从DAD检测器收集的***谱信息可知，原儿茶酸最大吸收波长为（256±2）nm，原儿茶醛最大吸收波长为（280±2）nm。当选择280nm波长处测定，取样量不变，则原儿茶酸几乎检测不到；而在256nm波长测定二者可兼顾，也不用增加取样量，这样减少对分析柱的污染，故选用256nm为检测波长。
3.3 流动相的选择[9-11] 采用甲醇-冰醋酸（90∶10）和乙腈-冰醋酸（95∶5），试验结果表明两者均能达到分离效果，但由于该品种成分复杂，用单一的洗脱方式可以把原儿茶酸原儿茶醛分离，但对第二次进样干扰严重，为了消除相互干扰，采用梯度洗脱增加有机相洗脱残留成分，所以本方法采用甲醇-乙腈-1%冰醋酸按表1梯度洗脱达到消除进样之间的相互干扰。
3.4 提取方法的考察 精密称取样品5g，加50ml乙酸乙酯提取，精密称重，比较回流提15、30、60min的三个提取时间段，均用相应溶剂补足重量，滤过，取滤液25ml蒸干，加甲醇2ml使溶解并转移置5ml量瓶中，用1%的冰醋酸定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，结果表明，提取15min含量偏低，30、60min含量无明显变化，为了省时采取回流30min。提取溶剂的选择，比较甲醇乙醇提取溶剂，甲醇提取液颜色深，成分复杂，影响结果并易损坏色谱柱，乙醇提取含量偏低，故采用乙酸乙酯提取成分相对单一，便于分离检测。
经方法学验证，该检测方法可以测定本品中原儿茶酸、原儿茶醛含量，具操作简便、灵敏度高、能够更好的克服其它物质的干扰、重复性和稳定性好等优点，可以有效的控制金乌骨通胶囊中金毛狗脊和木瓜药材的质量。
参考文献
[1]WS-10140（ZD-0140）-2002.国家药品标准（试行）颁布件[S].国家食品药品监督管理局.
[2]杨慧洁，吴琦，杨世海，等.金毛狗脊化学成分与药理活性研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2010，15（6） ： 12-14.
[3]吴虹，魏伟，吴成义.木瓜化学成分及药理活性的研究[J].安徽中医学院学报，2004，24（2）：62-64.
[4]徐宗佩.中药单体原儿茶醛对瘀血证患者单核细胞趋化游走能力的影响[J].天津中医，2002，19（1）：49.
[5]赵秀艳，张艳霞，张桂艳.炎立消胶囊的临床应用[J].人参研究，2001，13（4） ： 43-46.
[6]段萍，徐作刚，万红才，等.TLC法鉴别金乌骨通胶囊中的原儿茶酸和原儿茶醛[J].中国药师，2013，（增刊）：17-18.
[7]段萍，徐作刚，矛向***，等. 金乌骨通胶囊质量标准研究[J].中成药，2013，35（12）：2672-2677.
[8]王治平，杨柯. RP-HPLC法测定滇桂艾纳香中原儿茶酸与原儿茶醛的含量[J].中药材，2005，5（5）：25-26.
[9]靳贵生.炎立消胶囊中原儿茶醛的高效液相色谱测定[J].山西医药杂志，2006，14（6） ： 12-14.
[10]张淑蓉，裴妙荣，裴香萍.反相高效液相色谱法测定炎立消胶囊中茶酸、原儿茶醛和酪醇的含量[J].中国实验方剂学杂志，2008，14（6） ： 12-14.
[11]陈明，段萍，徐作刚，等.高效液相法测定乌蕨中原儿茶酸及原儿茶醛含量[J].中国民族民间医药杂志，2014，23（9）：11-12.
（收稿日期：2015.12.27）
转载请注明出处学文网 » 金乌骨通胶囊中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定