学文网摘 要：目的 该文采用静脉注射给药途径，研究人参皂苷Rb1在小鼠脑组织分布。方法 将小鼠解剖取脑组织，将生理盐水加入1ml/200mg的组织中生成匀浆，再对匀浆液进行萃取，萃取使用等体积的水饱和正丁醇饱和液，预处理的脑样品采用HPLC法测得人参皂苷Rb1分布。结果 人参皂苷Rb1在脑组织中5min即达到吸收高峰，30min后自体内消除。结论 对其发挥抗老年痴呆、神经系统损伤保护、促进周围神经细胞再生、脑缺血损伤保护等等多种药效具有重要意义。
关键词：人参皂苷Rb1 静脉注射 脑组织分布 高效液相色谱
中***分类号：R54 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2014）11（c）-0249-02
人参皂苷Rb1即人参二醇系皂苷，分子量是1109.29，C54H92O23是其分子式，主要来源于五加科植物人参、西洋参、三七等植物。现代药理学研究表明人参皂苷Rb1具有脑缺血损伤保护、神经损伤保护、促进学习记忆能力，增强认知能力，促进周围神经细胞再生等中枢神经系统的作用[1-3]，是一种极具有药用价值的化合物。
1 资料与设备
1.1 药物与试剂
由双兴科技开发有限公司提供人参皂苷Rb1对照品；采用TEDIA COMPANY.INC公司生产的甲醇、乙腈色谱纯试剂；北京化工厂生产的甲醇（分析纯）。
1.2 使用设备和相关仪器
采用FA1204B电子分析天平，SHZ-D（Ш）型不锈钢台式循环水式真空泵，Agilent 1100型分析-半制备液相，RE501旋转蒸发仪，Hettich Vniversal 16R低温冷冻离心机。
1.3 动物
健康小鼠，体重36～40g，吉林省白城市省所提供。普通饲料喂养1周，自由饮水。
2 试验方法
2.1 色谱所需条件
流动相：乙腈和水按28：72的体积比混合；CenturySILBDSC18柱，50 mm×2.1 mmI.D.，5 mm粒径；205 nm的检测波长；1.00 ml/min的流速；以室温作为柱温。
2.2 给药方案与样品采集
小鼠脑组织中分布实验的取样时间是根据预实验结果而定。
15只体重36～40 g的健康小鼠。动物试验地点在吉林省白城市白城医高专药化药分实验室。采用浓度为6 mg/ml的人参皂苷Rb1溶液注射，分别于给药前与给药后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min以 8 mg/kg的剂量静脉给药，每次3只，处死动物，解剖脑组织，并冲掉表面浮血用0.9%的生理盐水，最后置于-40℃冰箱保存待测。
2.3 样品预处理
处理脑组织样品的方法：
称重后把脑组织剪碎并研磨，用Gilson移液器按1 ml/200 mg组织重量加入生理盐水匀浆。用等体积的水饱和正丁醇3次萃取组织匀浆液，用1 ml甲醇溶解在85 ℃下经过减压干燥的萃取液，经过3～5倍的稀释，用0.22 mm微孔滤膜过滤，检测则采用HPLC。
3 结果
3.1 人参皂苷Rb1标准品HPLC***和确定色谱条件
人参皂苷Rb1标准品精准的1.00 mg，用甲醇进行1 ml的定容，达到100 μg的浓度，用甲醇将其稀释成50 μg的浓度，取出20 μml过0.22 μm微孔滤膜，色谱条件的确定则通过流动相乙腈和水的比率的改变，以及标准品适宜的出峰时间来得出的。***1采用HPLC的流动相，其乙腈和水的比率为28：72；1.00 ml/min的流速；205 nm的检测波长。如表1所示，人参皂苷Rb1对照品有18.596 min的出峰时间，2.1 mAURb1的高度。
3.2 用HPLC对小鼠空白脑组织进行检测
结果显示人参皂苷Rb1受脑组织中成分的干扰很小，见表2。
3.3 用HPLC检测小鼠给药后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min的脑组织标准品
在各时间点上均放3只小鼠，针对5 min、30 min、60 min、120 min、240 min不同的时间点，人参皂苷Rb1通过静脉注射后，处理老鼠脑组织时采用上面2.2的方法，分别取20μml过0.22μm微孔滤膜，用HPLC检测。然后把小鼠脑组织中检测的人参皂苷Rb1对比曲线***画出来。***中显示，5 min脑组织中最高，吸收高度为1.2 mAU，随着时间推移，曲线骤然下降，30 min吸收高度为0.2 mAU。60 min、120 min、240 min后均未测得脑组织中Rb1的含量（***2）。
3.4 分析讨论
由脑组织样品分布***可知，人参皂苷Rb1通过静脉注入小鼠脑后，5 min即达到高峰，之后明显下降，30 min后未测得脑组织中Rb1的含量。
通过实验结果得出的曲线可以看出，18.596 min为其出峰时间，人参皂苷Rb1通过静脉注射5 min、30 min、60 min、120 min、240 min后处理的心脏组织样品进行HPLC检测，其在19.13 min左右也得到分离，与标准曲线进行对照，说明该药物在脑组织中有所分布。
4 结语
采用HPLC的流动相：具有1.00 ml/min的流速；乙腈与水的比率为28：72；检测波长是205 nm。由此人参皂苷Rb1标准品的标准曲线可以确定出来。
根据脑组织分布***判断，在5 min前均出现干扰峰，相比较人参皂苷Rb1标准品而言，Rb1标准品对脑组织会产生较小的干扰。
对小鼠脑组织样品测定结果进行分析得出，用8 mg/kg人参皂苷Rb1对小鼠进行注射后，针对不同的5个时间点，小鼠心脏组织的药物浓度有以下特点：
5 min脑组织中Rb1浓度〉30 min脑组织中Rb1浓度，30 min后药物逐渐自脑组织消除。根据小鼠脑组织中人参皂苷Rb1检测曲线***，小鼠静脉注射人参皂苷Rb1后，药物在脑组织中有所分布，滞留时间短，对人参皂苷Rb1发挥脑缺血损伤保护、神经损伤保护、抗阿尔茨海默病、抗血管性痴呆、促进周围神经细胞再生等多种药效提供基础理论依据，具有重要的意义。
参考文献
[1] 王琼，王逸，韩春勇，等.人参皂苷Rg1、Rb1及其代谢产物益智作用的研究进展[J].中草药，2014，45（13）：1960-1965.
[2] 刘秋娅，李晓宇，刘皋林，等.人参皂苷Rb1的药理作用研究进展[J].中国药学杂志，2013，48（15）：1233-1237.
[3] GAO X Q，YANG C X，CHEN G J，et al.Ginsenoside Rb1 regulates the expressions of brain-derived neurotrophic factor and caspase-3 and induces neurogenesis in rats with experimental cerebral ischemia[J].J Ethnopharmacol，2010，132（2）：393-399.
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