学文网摘要：目的：考察不同方法对苦参中苦参生物总碱提取效率的影响。方法：采用酸性染料比色法，对苦参酸水回流、乙醇回流、酸水超声提取三种方法的提取液中的生物总碱进行含量测定。结果：水回流、乙醇回流、酸水超声提取液中苦参总碱含量分别为0.573%、0.652%、0.634%。结论：以苦参总碱作为评价指标，乙醇回流结果较好，酸水超声提取次之，酸水回流最低。
关键词：不同提取方法 苦参生物总碱 影响
【中***分类号】R-3 【文献标识码】B 【文章编号】1008-1879（2012）12-0393-01
苦参又名地槐、野槐、牛参等，为豆科槐属植物（Sophora flavescens Ait）的干燥根，分布于我国南北各地[1]。近年来医学界对苦参有效成分提取、分析及其药理等方面进行大量的研究并取得很大进展。苦参中苦参总碱的提取方法较为常用的有溶剂提取法，包括水提和醇提，加热回流和超声提取。目前，其总生物碱的含量测定方法有重量法、酸碱滴定法、酸性染料分光光度法[2]。为了充分研究不同方法的生物总碱提取效率，我们分别采用酸水回流、乙醇回流、酸水超声三种方法，并采取酸性染料比色法，测定不同提取方法中苦参总生物碱的含量。该研究为工业化生产苦参总碱提供了科学的方法。
1 材料与方法
1.1 仪器试剂。UV2100紫外分光光度计（美国惠普公司），PH精密数显酸度计（上海天达仪器有限公司），微量进样器（上海玻璃仪器厂）。苦参碱由广东梅州嘉应制药有限公司提供，苦参（广东康美股份有限公司），其它试剂均为分析纯。
1.2 试液配制。①溴麝香草酚蓝缓冲溶液的配制：量取0.1M的磷酸二氢钾50ml转移至于100ml容量瓶中，加入0.1M氢氧化钠42.2ml，再加蒸馏水7.6ml，用酸度计校正为7.6。并精密称取溴麝香草酚蓝0.0125g，加入上述配制溶液使溶解，摇匀即得。②苦参碱标准品溶液配制：精密称取苦参碱标准品15.00mg用甲醇定容到5ml，即为3.0mg/ml。
1.3 比色法最大吸收波长。苦参碱酸性染料比色法的最大吸收波长在400～420nm之间，以2nm为单位左右移动波长，确定最大吸收度的波长所在位置，结果显示410nm处为其最大吸收波长。
1.4 标准曲线的绘制。取已配制好的上述苦参碱标准品溶液20、30、40、50、60ul分别置于25ml的带塞磨口锥形瓶中，置于水浴80℃蒸干溶剂，加入溴麝香草酚蓝pH=7.6闭塞剧烈振摇3min，分别转入25ml分液漏斗中，静置2h，使水层与氯仿层完全分层后，分取氯仿层，在410nm波长处测定吸收度，以未加生物碱的氯仿萃取液为空白对照[3]。
建立苦参碱含量X与吸光度A间的线性关系，采用SPSS作回归分析，得到方程为：
A=0.0226X+0.0122，r=0.991
说明苦参碱在60ug～180ug之间线性关系良好。
1.5 稳定性实验。取苦参碱标准溶液40ul，按2.3标准曲线下方法每隔1h测定其吸收度，结果表明，苦参碱和溴麝香草酚蓝在pH=7.6缓冲溶液中形成的离子对，在氯仿中8h内是稳定的。
2 结果与分析
2.1 苦参总碱的提取。
2.1.1 酸水回流法提取苦参总碱。将苦参药材粉碎成80目粉末，取10g，加0.3%的HCl溶液回流提取3次，提取时间分别为1.5h、1h、1h，加入HCl溶液量依次为40ml、30ml、30ml，总料液比为1∶10。合并提取液于真空旋转浓缩至10ml，过滤，冷却，加蒸馏水定容到50ml。
2.1.2 乙醇回流法提取苦参总碱。将苦参药材粉碎成80目粉末，取10g用95%的工业酒精回流提取3次，提取时间分别为1.5h、1h、1h，加入工业酒精的量依次为40ml、30ml、30ml，总料液比为1∶10。合并提取液于真空旋转浓缩至10ml，过滤，冷却，加蒸馏水定容到50ml。
2.1.3 酸水超声法提取苦参总碱。将苦参药材粉碎成80目粉末，取10g，用0.3%的HCl溶液超声提取3次，提取时间分别为1.5h、1h、1h，加入HCl溶液量依次为40ml、30ml、30ml，总料液比为1∶10。合并提取液于真空旋转浓缩至10ml，过滤，冷却，加蒸馏水定容到50ml。
2.2 样品液总生物碱的含量测定。分别用微量进样器吸取酸水回流、乙醇回流、酸水超声样品液各20ul，置于25ml带塞磨口锥形瓶中，于水浴80℃蒸干溶剂，分别加入溴麝香草酚蓝pH=7.6缓冲溶液6ml，氯仿6ml，闭塞剧烈振摇5min，分别转入25ml分液漏斗中，静置2h，使水层与氯仿层完全分层后，分取氯仿层，在410nm波长处测定吸收度，以未加样品液的氯仿萃取液为空白对照。用工作曲线法进行定量。结果见表1。
3 讨论
本实验采用工作曲线法进行定量，方法简单，可靠，重现性好。用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。此法可分为工作曲线法及外标一点法等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算。
酸性染料比色法测定样品生物总碱含量时，为了防止氯仿层中的水分测定结果的影响，应通过加吸水剂无水硫酸钠方法除去氯仿萃取液中的水分。酸性比色法的pH值要求较高，本实验所用的溴麝香草酚蓝缓冲液，配制好必须用pH酸度计进行校正，否则会对测定结果带来影响。
参考文献
[1]辛海量，赵玉海，林峰，等.苦豆草中总生物碱含量测定[J].药学学报，2002，18（2）：113-115
[2]郑虎占，董泽宏，佘靖.中药现代研究与应用[M].第3版.北京：学苑出版社，1998.270
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