学文网磺胺类药物篇1
1磺胺类药物的作用
磺胺类药物抗菌谱较广，对大多数革兰阳性菌和某些革兰阴性菌有抑制作用。磺胺类药物是通过抑制细菌叶酸代谢而呈现抑菌作用的。因对磺胺类药物敏感的细菌不能利用环境中的叶酸，需要菌体内通过对氨苯甲酸（PABA）等物质在二氢叶酸合成酶的催化下，合成二氢叶酸，而磺胺类药物的基本化学结构与PABA相似，可与细菌体内PABA竞争二氢叶酸合成酶，妨碍二氢叶酸的合成，最终影响细菌核酸和蛋白质的合成，抑制了细菌的生长繁殖。细菌对磺胺类药物易产生耐药性，尤其在用量不足时更易发生，磺胺类药物之间有交叉耐药性。
2磺胺类药物的应用
磺胺类药物具有较广的抗菌谱，而且疗效确切，性质稳定，使用简便，价格便宜，便于长期保存，当前是仅次于抗生素的一大类抗菌药物。特别是高效、长效、广谱的新型磺胺和抗菌增效剂合成以后，使磺胺类药物临床应用有了新的广阔前景。为了更好地应用磺胺类药物，应做到以下几点：
2.1正确掌握用药剂量。首次用药量或第1天用量要加倍，以后的用量为维持量。拌料一定要均匀，对急性病例也可以用针剂注射给药。
2.2注意交叉耐药性。细菌对磺胺类药物有交叉耐药性，如使用某一种磺胺药细菌产生了耐药性后，不要用其他磺胺类药，而应使用抗生素或其他化学合成抗菌药，以免延误病情，增加用药成本。
2.3用药期间应充足饮水。用药期间必须供给充足的饮水，以防止析出磺胺结晶而损害肾脏。
2.4发现中毒立即停药。供给充足的饮水，在饮水中可加入0.1%～0.2%的碳酸氢钠或0.5%的葡萄糖溶液，也可在饲料中加入0.05%的维生素K3或在日粮中将B族维生素用量提高1倍。中毒严重的鸡，肌注维生素B121～2μg。
2.5慎用磺胺类药物。凡属肝肾功能减退、重症溶血、贫血、全身性酸中毒病症应慎用。
2.6合理使用抗菌增效剂（TMP）。抗菌增效剂与磺胺类药物并用时，具有增效作用，一般TMP与磺胺类药按1∶5的比例使用，可明显提高临床效果，降低用药成本。
2.7注意配伍禁忌。两种或两种以上的药物在一起使用，必须经兽医技术人员许可，避免用药违反配伍禁忌而影响***效果的药物。
2.8加强饲养管理。磺胺类药物只有抑菌作用，没有杀菌作用。因此，在***过程中要加强饲养管理，提高畜禽机体的防御能力。
3磺胺类药物应用时的注意事项
在给家畜（牛、马、驴、骡、猪、羊、犬等）***疾病的过程中，磺胺类药物是常用的兽药。但在使用的过程中，不按标准用量使用的例子很多，有的首次用量太小，不到标准用量的1/3；有的首次用量太大，超过标准用量的6倍以上；有的重复给药的间隔时间比标准时间延长1倍，这样的用量是不符合科学要求的，要严格要求才行。用磺胺类药物给畜***疾病时应注意以下几点：
3.1用法要正确。磺胺类药物钠盐注射剂碱性都较强，pH值在9.0~10.5的范围内，注射时，要根据方法的不同采用不同的浓度，静脉注射要用5%以下浓度，以免引起血栓性静脉炎；皮下注射要用0.5%的浓度，以免引起组织皮炎坏死；肌肉注射要用10%以下的浓度，并且要注射到肌肉深层，以免引起局部肿胀。
3.2用量要准确。磺胺类药物的用量与其抗菌原理有密切关系，必须使其血液中的浓度与对氨苯甲酸竞争取得绝对优势，方能挥发较好的疗效。正确的用量是：首次采取突击量，以后按不同磺胺类药物的特点，每隔一定时间重复给予维持量。首次量不足，维持量不足，不给维持量，或重复给药间隔过长，以及停药过早等，都可降低***效果，并可贻误***时机。因为这样，不但不能完全彻底消灭致病细菌，反而可给它们以喘息“锻炼”的机会，使残余的致病细菌获得抗药性，变成不怕磺胺类药物的细菌了。现将几种常用的磺胺类药物的用量、间隔时间介绍如下：磺胺嘧啶：内服，首次用量每千克体重0.2g，维持用量每千克体重0.1g，间隔用药时间12h；注射，分别是0.07g、0.07g，间隔12h；磺胺二甲嘧啶：内服，分别是0.2g、0.1g，间隔6～8h；磺胺甲基异恶唑：内服，分别是0.2g、0.1g，间隔8～12h；磺胺脒：内服，分别是0.2g、0.1g，间隔8～12h。
4禁忌
4.1磺胺类药物在养鸡生产中的使用对象仅限于1月龄以上的雏鸡和育成鸡，主要用于防治球虫病、卡氏白细胞原虫病及大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、痢疾杆菌、葡萄球菌等引起的细菌感染。
4.2磺胺类药物的使用疗程一般为3～5d，如果使用一次就有了效果，也不要停用，待疾病症状消失后，再按预防用量给药2～3d，坚持用完一个疗程。
4.3磺胺注射液药物如磺胺嘧啶注射液，不易与酸性药物，如VC、青霉素、四环素、盐酸麻黄碱等合用，否则析出磺胺沉淀。其遇到普鲁卡因后疗效减弱，甚至失效，遇到氧化钙、氯化铵会增加对泌尿系统的毒性。
磺胺类药物篇2
关键词：猪肉；磺胺；液相色谱；质谱
Simultaneous Determination of Thirteen Sulfonamides in Meat using HPLC-MS/MS
ZHANG Zhi-gang
（State Key Laboratory of Food Safety Technology for Meat Products， Xiamen Yinxiang Group Co. Ltd.， Xiamen 361100， China）
Abstract：AHPLC-MS/MS method was developed for the simultaneous determination of thirteen sulfonamides in pork.The sulfonamide residues were extracted with acidic acetonitrile. The extract was concentrated and then defatted using hexane， filtered with 0.22 μm filter membrane and transferred into sample vial， ready for HPLC-MS/MS analysis. Chromatographic separation was performed on a Kinetex C18 （100×2.1 mm， 2.6 ?m） column using a gradient elution with water （0.1% formic acid） and acetonitrile as mobile phases. Mass spectrometer was operated in multiple reaction monitoring of positive ionization mode. Thirteen sulfonamides showed good linearity between 1 and 300 μg/kg， and their limits of quantitation were all below 10μg/kg. The average recoveries at three spiked levels of 1μg/kg、2μg/kg and 10μg/kg ranged from 60% to 78.1% with relative standard deviations of 0.24%～8.88%. The method is simple， sensitive and selective， and applicable for the routine simultaneous determination of sulfonamides in meat.
Key words：meat；sulfonamides；liquid chromatography；mass spectrometry
中***分类号：O657 文献标志码：A 文章编号：
磺胺类药物（sulfonamides，SAs）是具有氨苯磺酰胺结构药物的总称，由于其具有高效、低毒、价格低廉等特点，作为广谱抑菌药在畜牧、水产等养殖生产中得到了广泛应用。随着我国居民生活水平的提高，猪肉的消费量增长很快，但是猪肉中SAs药物残留问题日益突出，引起了社会大众的广泛关注。SAs种类可达数千种，其中应用较广的就有几十种。通过任何途径摄入的SAs药物都会在人体中蓄积，对人体健康产生潜在的危害。SAs药物具有一定的副反应，比如导致过敏反应、造血紊乱、泌尿系统损害等等，而且某些SAs药物还具有潜在的致癌性。因此，世界各国都对此类药物在禽肉中的残留制定了严格的限量要求。美国规定磺胺氯哒嗪和磺胺甲氧哒嗪不得检出，其他SAs药物残留最大限量为0.1mg/kg；日本规定磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲嘧啶残留最大限量为0.02mg/kg，磺胺甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹啉残留最大限量为0.03mg/kg。欧盟和我国规定禽肉中SAs药物总量不得超过0.1mg/kg。
目前，禽肉中SAs的检测方法主要包括微生物法、酶联免***法、薄层色谱法（TLC）[1]、气相色谱/质谱法（GC/MS）[2]、高效液相色谱法（HPLC）[3-5]、毛细管电泳法（CE）[6]和液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）等。生物学方法虽然操作简单，但是难以对不同类别的SAs进行检测。GC-MS具有较高的灵敏度和特异性，但衍生化过程复杂。HPLC和CE的灵敏度低，选择性和特异性也不太理想，特别是在复杂基质中低浓度SAs测定时表现的非常明显。LC-MS/MS已经成为复杂基质中兽药残留的同时定性定量分析的主流方法，具有灵敏度高、选择性好、分析效率高等优点。LC-MS/MS已用于测定不同样品基质中的磺胺类药物[7-14]。本实验建立猪肉中13种常见SAs药物残留（磺胺甲噻二唑、磺胺异恶唑、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺醋酰、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺喹啉、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲恶唑）的分析方法，优化了提取条件和检测方法，回收率、定量限等参数完全能够满足现行标准法规的要求，为猪肉制品中SAs药物残留安全监测提供一个快速、灵敏、准确的检测手段。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
磺胺甲噻二唑、磺胺异恶唑、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺醋酰、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺喹啉、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲恶唑（纯度均>99%） 美国Sigma公司；甲醇、乙腈、正己烷为色谱纯试剂 德国Merck公司；其他试剂为分析纯，国药集团化学试剂有限公司；实验用水为Mill-iQ高纯水。
1.2 仪器与设备
Agilent 1200高效液相色谱 美国安捷伦公司；API5000三重四极杆串联质谱仪（配有电喷雾离子源） 美国应用生物系统公司；TURRAX T25型均质器 德国IKA公司；Allegra 64R高速冷冻离心机 美国Beckman Coulter公司；全自动氮吹浓缩仪 美国Capiler Life Sciences公司；色谱柱 美国Phenomenex公司。
1.3 方法
1.3.1 标准储备液的配制和混合标准工作液的配制
准确称取适量标准品，分别用甲醇溶解并定容，配成质量浓度为100μg/mL的标准储备液，-18℃条件下避光保存。移取各标准储备溶液，用甲醇稀释成质量浓度为10μg/mL的混合标准中间溶液，-18℃条件下避光保存。根据需要用空白猪肉提取液逐级稀释配成适当浓度的混合标准工作液，现配现用。
1.3.2 液相色谱条件
Kinetex C18色谱柱（100mm×2.1mm，2.6?m）；流速0.3mL/min；柱温35℃；进样量5μL。梯度洗脱程序见表1。
表1 液相色谱梯度洗脱条件
Table 1 Gradient elution program of liquid chromatography
时间/min 流动相A：0.1%甲酸水溶液/% 流动相B：乙腈/%
0 90 10
5.0 10 90
8.0 10 90
8.1 90 10
10.0 90 10
1.3.3 质谱条件
离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；电喷雾电压：5500V；离子源温度TEM：550℃；碰撞气CAD（N2）：4 psi；气帘气CUR（N2）：30 psi；GS1：50L/h；GS2：50L/h；驻留时间为20ms；入口电压EP：10V；监测离子对、去簇电压和碰撞能量详见表2。
表2 质谱参数
Table 2 Operating parameters of mass spectrometry
化合物 母离子（m/z） 子离子（m/z） 去簇电压/V 碰撞能量/eV
磺胺吡啶 250.3 156.2*
108.2 77 23
37
磺胺嘧啶 251.3 156.2*
108.2 89 23
32
磺胺噻唑 256.3 156.2*
108.2 91 21
34
磺胺甲基嘧啶 265.3 156.2*
108.2 90 23
34
磺胺异恶唑 268.3 156.2*
113.3 80 19
24
磺胺甲噻二唑 271.3 156.2*
108.2 80 21
35
磺胺二甲基嘧啶 279.3 186.2*
124.3 110 26
36
磺胺氯哒嗪 285.3 156.2*
108.2 62 22
37
磺胺喹恶啉 301.4 156.2*
108.2 105 21
36
磺胺二甲氧嘧啶 311.4 156.2*
108.2 130 27
40
磺胺醋酰 215.2 156.2*
108.2 78 16
27
磺胺甲氧哒嗪 281.3 156.2*
108.2 140 22
33
磺胺甲恶唑 254.3 156.2*
108.2 130 22
32
注：*为定量离子。
1.3.4 样品处理
称取样品2g（精确至0.01g）于离心管中，加入4g无水硫酸钠，加入8mL 1%乙酸-乙腈，均质提取2min，以4000r/min离心4min，然后取上清液转移至20mL试管中，在45℃水浴下氮气吹干用1mL含有0.1%甲酸的乙腈定容，涡旋，再加入2mL正己烷除脂，涡旋。以15000r/min离心3min，经0.2μm有机相滤膜过滤，转移到进样瓶中，供液相色谱-串联质谱测定。
2 结果与分析
2.1 提取方法的优化
乙腈具有很强的组织渗透力，作为提取试剂在食品中磺胺类药物的分析中应用最为广泛。结果表明，乙腈对猪肉中各药物的提取回收率在51%～77%之间。考虑到磺胺类化合物均易溶于弱酸性溶液，因此选用1%乙酸-乙腈作为提取溶剂进行提取实验，表明该提取试剂不仅去除蛋白的效果好，而且容易浓缩，提取回收率也有所提高，可达60%～89%。因此在后续实验中均选择1%乙酸-乙腈作为提取溶剂。另外，在样品提取时加入无水硫酸钠可以有效地防止样品中的水分及干扰成分进入提取液，同时硫酸钠的存在可促使蛋白质的变性分散，防止样品结成块状影响提取。
2.2 质谱条件的优化
分别对100ng/mL各种药物的标准溶液进行母离子全扫描，确定其分子离子，并优化各分子离子的去簇电压。然后分别以上述离子为母离子，对其子离子进行全扫描，选择丰度较高、干扰较小的两对子离子为定性离子，峰度最高的作为定量离子，然后优化其碰撞能量（优化后的质谱条件见表2），使得分子离子与特征碎片离子产生的离子对强度达到最大时为最佳。***1、2显示了13种磺胺类药物在优化条件下的TIC***和MRM色谱***。
***1 13种磺胺类药物的TIC***
Fig.1 TIC chromatograms of meat spiked with 13 sulfonamides
a.磺胺吡啶；b.磺胺嘧啶；c.磺胺噻唑；d.磺胺甲基嘧啶；e.磺胺异恶唑；f.磺胺甲噻二唑；g.磺胺二甲基嘧啶；h.磺胺氯哒嗪；i.磺胺喹恶啉；j.磺胺二甲氧嘧啶；k.磺胺醋酰；l.磺胺甲氧哒嗪；m.磺胺甲恶唑。
***2 13种磺胺类药物的MRM色谱***
Fig.2 MRM chromatograms of meat spiked with 13 sulfonamides
2.3 线性范围和定量限
取一系列混合药物标准工作溶液（1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、300.0ng/mL），以峰面积Y和对应的质量浓度X（ng/mL）作***，如表3所示，在1～300ng/mL范围内，各药物质量浓度与对应的峰面积呈现良好的线性关系，相关系数大于0.99。磺胺药物的定量限如表3所示，均小于10μg/kg，远远低于欧美日等国家设定的残留最大限量，说明该方法的灵敏度完全适合日常分析的要求。
表3 13种磺胺类药物的线性方程、相关系数、回收率和定量限
Table 3 Linear equation， correlation coefficient， recovery and limit of quantification of 13 sulfonamides
药物 线性方程 相关系数 回收率/% 定量限/
（μg/kg）
1μg/kg 2μg/kg 10μg/kg
磺胺吡啶 Y=4235X+3600 0.9992 62.9 62.8 61.1 8
磺胺嘧啶 Y=3154X+7890 0.9989 68.4 63.8 76.4 5
磺胺噻唑 Y=2120X+2890 0.9994 66.2 73.4 62.3 5
磺胺甲基嘧啶 Y=3182X+2110 0.9990 64.1 69.7 62.6 5
磺胺异恶唑 Y=5390X+4090 0.9988 61.1 63.5 69.1 8
磺胺甲噻二唑 Y= 2605X+2890 0.9996 63.8 67.1 67.6 4
磺胺二甲基嘧啶 Y=2980X+2100 0.9991 69.2 72.8 78.1 4
磺胺氯哒嗪 Y= 2210X+3130 0.9988 62.8 62.1 66.3 5
磺胺喹恶啉 Y=2900X+2890 0.9999 60.0 60.7 65.6 5
磺胺二甲氧嘧啶 Y=956X-2280 0.9995 65.9 61.2 64.1 4
磺胺醋酰 Y=9990X+1230 0.9993 60.4 61.8 68.1 8
磺胺甲氧哒嗪 Y=3670X+6920 0.9992 69.6 77.2 65.7 5
磺胺甲恶唑 Y=3715X+4210 0.9996 63.1 73.1 66.4 5
2.4 回收率和精密度
用空白猪肉样品进行添加回收率和精密度实验，样品添加不同浓度的标准品后匀浆，放置过夜，使标准品在样品中实现充分的交换平衡，然后按上述方法进行提取、净化和液相色谱-串联四极杆质谱测定，其回收率和精密度结果见表3。在添加水平1、2μg/kg和10μg/kg时，其回收率在60.0%～78.1%之间，相对标准偏差（RSD）在0.24%～8.88%，说明该方法具有很好的回收率和重现性。
3 结 论
所发展的液相色谱/串联质谱方法可在10min内完成13种磺胺类药物残留的定量和确证性分析，结合液液萃取和高选择性的MRM模式，很好地实现了样品与杂质的分离，省去了固相萃取步骤，大大提高了分析效率。前处理步骤简单快速，重复性好。13种磺胺类药物具有很宽的线性范围，回收率在60%～78.1%，定量限均小于10μg/kg，远低于欧美日设定的残留最大限量。此方法操作简便，灵敏度、准确度、精密度均满足残留分析的要求，完全可满足国内外对猪肉中磺胺类化合物的快速、准确的检测要求。
参考文献：
磺胺类药物篇3
药店里，老张正在对营业员大发雷霆：“你们的药品有问题，我服了你们的这瓶药后，全身起了疙瘩，瘙痒难忍。”
原来，老张近来血压控制不太好，社区医生给他又加了一种药氢氯噻嗪。老张在药店买了药，没想到服药后出现皮疹。药店的执业药师杨大姐对老张说：“老伯，我们这药品质量绝对没有问题，您老平时是否有药物过敏的情况？”“我一生只对磺胺药过敏，其他什么药我都不过敏。”老伯的一句话让药师杨大姐明白了原因。她告诉老张：“老伯，您这是遭遇了一回药物交叉过敏反应。”老张一脸的迷茫：“什么是药物交叉过敏反应？”
药师分析
所谓药物交叉过敏，是指对具有相似化学结构的药物产生交叉或不完全交叉过敏反应。老张这类对磺胺类药物过敏的人，往往不只对这一类药物过敏，还会对其他含有磺胺化学结构相似成分的药物也产生过敏反应，如部分利尿剂、口服降糖药等。有研究表明，凡是对磺胺药过敏的患者，对以下这些药物都可能存在交叉过敏反应。
1.利尿和降压药 临床上常用的氢氯噻嗪、吲达帕胺（寿比山）、呋塞米（速尿）等利尿剂都与磺胺类抗菌药有相似的结构。另外，含氢氯噻嗪的复方降压药如氯沙坦钾氢氯噻嗪片、缬沙坦氢氯噻嗪片、厄贝沙坦氢氯噻嗪片等，也会与磺胺类抗菌药发生交叉过敏反应。
2.磺酰脲类降糖药 如甲苯磺丁脲、格列本脲（优降糖）、格列吡嗪（美吡达）、格列喹酮（糖适平）、格列齐特（达美康）等，属于磺酰脲类降糖药。药物的说明书中均明确指出 “对磺胺类过敏者禁用”。 此外，还要特别注意避免使用一些含有上述药物的复方制剂。如含格列本脲的消渴丸等。
3.解热镇痛抗炎药 如塞来昔布（西乐葆）结构中有苯磺酰胺基、尼美舒利含磺基，不可用于对磺胺过敏者。
4.抗痛风药 痛风常用药丙磺舒，对磺胺类药物过敏者要禁用。
5.青光眼***药物 如乙酰唑胺及布林佐胺（派立明），不能耐受磺胺类药物或其他磺胺类衍生物者不可以用。
6.其他 ***溃疡性结肠炎的药物柳氮磺吡啶，实际上属于磺胺类药物，对磺胺类药物过敏者禁用。氨苯砜（对麻风杆菌有较强的抑菌作用）其作用机制与磺胺类药物相似，也是磺胺类药物过敏者禁用。
相关链接：其他能发生交叉过敏反应的药物
阿司匹林与其他非甾体抗炎药如布洛芬、芬必得、炎痛喜康、甲氯芬酸、吲哚美辛等药物存在交叉过敏反应。
痢特灵（呋喃唑酮）是***肠道感染的有效药物，如果对该药发生了过敏，最好不要使用***尿路感染的药物呋喃妥因片和***神经炎的呋喃硫胺片，也应避免用***心脏病的乙胺碘呋酮片。因为这些药物与痢特灵可能出现交叉过敏。
异丙嗪（非那根）与氯丙嗪、奋乃静、三氟拉嗪等吩噻嗪类抗精神病药有交叉过敏。
磺胺类药物篇4
关键词：液相色谱-串联质谱；负离子模式；鸡肉；磺胺硝苯
Abstract： A method for the determination of sulfanitran in chicken was developed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Samples were extracted with formic acid-ethyl acetate （2：98， V/V）， and the extract was defatted by hexane extraction and cleaned up by liquid-liquid partitioning. The analyte was separated on a C18 colum using a mobile phase consisting of methanol and 5 mmol/L ammonium acetate solution with gradient elution. The mass spectrometry was operated in negative ion mode using multiple reaction monitoring （MRM） for qualitative and quantitative analysis. The calibration curve of the method was linear in the range of 2.0C100.0 μg/L， with correlation coefficient more than 0.99. The limit of detection （LOD） and limit of quantitation （LOQ） were 0.5 μg/kg and 2.0 μg/kg， respectively. At spiked levels of 2.0， 5.0， 10.0 μg/kg， the recoveries ranged from 76.0% to 83.4% with relative standard deviations （RSD） less than 8.7%. This method proved to be convenient and suitable for the determination of sulfanitran residues in chicken.
Key words： liquid chromatography-tandem mass spectrometry； negative ion mode； chicken； sulfanitran
DOI：10.15922/ki.rlyj.2016.08.007
中***分类号：TS251.7 文献标志码：A 文章编号：1001-8123（2016）08-0035-04
磺胺硝苯属于磺胺类的一种抗球虫药物，此药抑制球虫体内的二氢叶酸合成酶阻碍叶酸合成导致核酸合成受阻从而使虫体繁殖受到抑制，该药作用是在球虫无性繁殖阶段抑制第二代裂殖体的发育，对第一代裂殖体也有一定抑制作用，主要用于家禽球虫病的***与预防[1]。研究表明，磺胺类药物在体内的作用时间和代谢时间较长，人体长期食用含有此类药物的食品会在体中蓄积，进而对人体机能产生危害[2-4]，破坏人的造血系统，造成溶血性贫血[5]，并导致病原体产生抗药性，发生过敏反应[6-7]。为保障食用者的安全我国及欧盟规定肉类食品中的磺胺类药物的最高残留限量（maximum residue limit，MRL）为：单一磺胺类药物25.0 μg/kg，磺胺类药物总量100.0 μg/kg[8-14]。
目前使用现代分析仪器对动物源性食品、化妆品及饲料中磺胺硝苯检测的方法文献报道很多，主要有液相色谱法[15-18]和液相色谱-串联质谱法[19-25]。液相色谱-串联质谱抗干扰能力强、选择性好检测灵敏度高，已被广泛应用于磺胺类兽药残留检测。文献所报道的液相色谱-串联质谱法检测磺胺硝苯的方法均是正离子监测模式，尚未有使用负离子监测模式的方法报道。本实验分别优化了正、负离子监测模式下的仪器方法。通过实验验证，使用负离子监测模式的灵敏度高于正离子监测模式，降低了磺胺硝苯的检测限，更好地保障消费者的安全。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
鸡肉样品购于淮安苏果超市。
磺胺硝苯（纯度为98%） 德国Dr.Ehrenstorfer公司；甲醇、乙酸乙酯均为色谱纯 美国默克公司；正己烷、甲酸均为色谱纯 美国天地公司；无水硫酸钠为分析纯 南京化学试剂有限公司；水为超纯水。
1.2 仪器与设备
TSQ Quantum Ultra EMR串联质谱仪（配有电喷雾离子（electrospray ionization，ESI）源）、Surveyor液相色谱系统（包括自动进样器Autosampler 1.3）、MS Pump 2.0质谱泵 美国Thermo Fisher公司；ZORBAX SB-C18色谱柱 美国Agilent公司；氮吹仪 美国Organomation
公司；超纯水器 美国Millipore公司；离心机 美国Sigma公司；超声波清洗仪 宁波新芝生物科技公司。
1.3 方法
1.3.1 标准溶液配制
准确称取磺胺硝苯标准品10.00 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，配成1.0 g/L标准储备液，于冰箱中冷冻避光保存，实验中根据需要用甲醇稀释至适当质量浓度的标准工作液。
1.3.2 样品提取
准确称取（5.00±0.05） g样品于50 mL离心管中，加入10 mL甲酸-乙酸乙酯（2∶98，V/V），于涡旋混合器上混匀1 min，超声波提取10 min；以8 000 r/min的速率离心3 min，转移上层有机溶液至20 mL氮吹管中；再用8 mL甲酸-乙酸乙酯（2∶98，V/V）重复提取残渣1 次，合并2 次提取液于氮吹管中，于45 ℃水浴中氮吹至干，用1.0 mL甲醇-水（2∶8，V/V）溶解，加入1.0 mL正己烷溶液，涡旋混匀，10 000 r/min离心3 min，下层溶液经0.22 μm滤膜过滤至进样瓶中，供液相色谱-串联质谱仪分析。
1.3.3 HPLC-MS/MS条件
HPLC条件：Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（150 mm×2.1 mm，3.5 ?m）；进样量：25 μL；柱温：30 ℃；流动相：A为5 mmol/L乙酸铵，B为甲醇；梯度洗脱条件：0～4 min 70%A；4.1～6.5 min 20% A；6.6～8.5 min 70% A；流速：250 μL/min。
MS/MS条件：采用ESI源；负离子方式扫描；喷雾电压：2 500 V；离子源温度：400 ℃；鞘气：40 bar，辅助气：15 bar；毛细管温度：350 ℃；多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）方式检测；优化质谱条件见表1。
2 结果与分析
2.1 质谱条件的优化
磺胺类药物为弱碱性，结构式中具有仲氨基或者叔氨基的化学电离性质，文献[26-28]报道的都是选用ESI+作为离子化模式。本实验在已有文献[29-30]报道的基础上，采用注射泵直接进样的方式，将质量浓度为1 μg/mL的标准物质，以5 μL/min的流速注入离子源中。首先在正离子模式下进行一级质谱分析，得到m/z 336.0分子离子峰，通过对辅助气、喷雾电压、透镜补偿电压等参数优化获得m/z 336.0，最高响应值为3.69×105，仪器响应强度较低；对磺胺硝苯在负离子模式下进行一级质谱扫描分析，得到m/z 334.0分子离子峰，通过优化辅助气、喷雾电压、透镜补偿电压等参数获得m/z 334.0最高响应为1.3×106，是正离子模式响应强度的3.5 倍，选定负离子模式进行监测，再对m/z 334.0准分子离子峰进行二级质谱分析，得到其相应的碎片离子信息。然后对每种物质的二级质谱进行碰撞能量、碰撞气、透镜补偿电压等参数优化，使每种物质的分子离子与特征碎片离子产生的离子对强度达到最大时为最佳，得到m/z 136.5、270碎片离子。实验结果发现，相同进样量的磺胺硝苯用Q1扫描ESI（-）比ESI（+）具有更高的响应值（***1），灵敏度大幅度提高，所以磺胺硝苯采用负离子模式监测。
2.2 流动相的选择
磺胺硝苯采用ESI（-）离子模式监测，在流动相中未添加甲酸或者乙酸等酸性供质子体物质。本实验考察了甲醇-水、乙腈-水混合溶剂作为流动相对磺胺硝苯的色谱行为和离子化程度的影响。结果表明，甲醇-水为流动相时仪器响应值、色谱峰面积高于乙腈-水为流动相时仪器响应值、色谱峰面积。实验还比较了在水相加入5 mmol/L乙酸铵对色谱峰的影响，研究表明，流动相为甲醇-5 mmol/L乙酸铵时，峰形优于甲醇-水为流动相，因此选择甲醇-5 mmol/L乙酸铵为流动相。
2.3 提取溶剂的选择
磺胺硝苯具有较强极性，pKa为14.5，易溶于酸性溶液和乙腈、乙酸乙酯、甲醇等极性有机溶剂。本实验考察了乙腈、甲酸-乙酸乙酯（1∶199、1∶99、2∶98、3：97、4∶96、5∶95，V/V）和乙酸乙酯的提取效率。结果表明，上述几种溶剂对磺胺硝苯均有较好的提取效果，乙腈对肌肉组织渗透能力较强，沉淀蛋白的效果较好，提取的脂肪含量较少，但是提取的基质干扰较大，磺胺硝苯受基质效应影响较强，添加回收率较低；乙酸乙酯提取的基质干扰较少，但提取出较多的脂肪，可以通过正己烷脱脂净化处理去掉脂肪，添加回收率明显优于乙腈；磺胺硝苯易溶于酸性溶液，使用酸性乙酸乙酯提取回收率高于乙酸乙酯，实验对甲酸的用量进行优化，当随着甲酸体积分数加大，磺胺硝苯的回收率逐渐提高，当其体积分数大于2%时回收率增加不明显，加大甲酸用量可以加强沉淀蛋白的效果，但是随着甲酸体积分数的提高，提取的基质干扰较多，因此，采用甲酸-乙酸乙酯（2∶98，V/V）混合溶液作为提取溶剂。
2.4 基质效应、准曲线线性范围及定量限
2.5 方法的回收率和精密度
选取阴性鸡肉样品，添加磺胺硝苯标准品，添加水平为2.0、5.0、10.0 μg/kg，每个水平进行5 次平行实验，按上述优化的实验方法测定各组分的回收率和相对标准偏差，结果见表2。
3 结 论
本实验建立了负离子监测模式测定鸡肉中磺胺硝苯残留的高效液相色谱-串联质法，较正离子监测模式仪器灵敏度大幅度提高，采用基质标准曲线来减弱基质效应对磺胺硝苯定量分析的影响。该方法操作简便快速，灵敏度较高，回收率较好，满足实际检测工作的需要。
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磺胺类药物篇5
但，看看你最后吃下去的是什么？一些叫“xx霉素”
有人间：这两者不一样吗？
不一样，完全不一样。
事实上，医学上并没有消炎药的说法。通常说的抗炎药，指的是那些直接减轻炎症反应的药物，有两大类：一类是激素类的抗炎药，如可的松;另一类是非甾体类抗炎药，如阿司匹林。而抗生素，是用来抗击细菌的。
为何两者会被混淆？
谬误溯源：
名叫“消炎片”的磺胺
在《辞晦》1979年版上可查到，“消炎片”最早是磺胺的俗称。
磺胺是战火中的英雄。以前，***人受刀***伤，皮肤破损处易招细菌感染，进而发炎溃烂，因此导致截肢甚至致死者都不少。直到二战，美***士兵的急救包里有了磺胺后，这种情况有了改变。
士兵们用磺胺粉末撒布伤口，再包扎，并口服磺胺片，预防和阻止了伤口发炎，也减少了大量的截肢。战后，这也成为医学界处置外伤的例行方式。
而在我国的上海，大概在上个世纪40年代，药房也开始生产销售这类磺胺药粉和磺胺药，并且直接取商品名为“消炎粉”和“消炎片”。把有抑菌作用的药等同于消炎药，大概便由此开始。
在我国的医药传统中，人们通常都不以药物本身来命名，而常以药物功能为名，譬如去痛片。抑菌的磺胺因为消炎效果显著，自然以“消炎药”的身份畅销起来，而且，这名字也远比“氨苯磺胺、磺胺噻唑或磺胺嘧啶”等拗口生僻的化学名来得响亮易记，深入人心。后来出的磺胺新药，如60年代出的磺胺嘧啶钠，也叫“消炎磺”。
那为何后来的抗生素也叫消炎药呢？
“消炎”美名过继给抗生素
磺胺是抑菌药，能减少细菌繁殖（不能杀死病菌），可算是现代西药中最早的抗菌药。
上世纪40年代后，青霉素、链霉素、氯霉素、四环素、红霉素等真正的抗生素陆续上市，其抗菌作用之强大，抗菌种类之多，远远胜过了磺胺。原先用磺胺***效果不佳的感染性疾病，也都被这些新药手到擒来。
人们理所当然认为，这些才是真正好用的消炎药。
如果翻阅以前的报刊，常可见到“青霉素一农村首选的消炎药”、“新一代抗菌消炎药利菌沙”;甚至专业文章也是将抗生素、杀菌、消炎等联系在一起，并通通简称消炎药，“消炎”美名就这样“过继”给了抗生素。
这会导致什么后果？
不是所有炎症都是细菌引起的！
我们知道，抗生素是用来抗击细菌的，但疾病中的炎症并不都由细菌感染造成。
“发炎”是人的一种病理现象，指机体对刺激的一种防御反应，表现为人体组织的红、肿、热、痛。太多的疾病都有发炎的表现，可以说，但凡有血液流通的器官组织，就可能被种种因子刺激，出现炎症，如肺炎、胃炎、脑膜炎、腮腺炎、前列腺炎、中耳炎……
而诱发炎症出现的因素那可是相当的多，总的可分四大类：生物的（如细菌、病毒、寄生虫），物理的（如热、辐射），化学的，以及免***过度的因素。
很明显，这些“炎”病中，只有由细菌引起的，用敏感的抗生素才会有效，而这只占炎症比例中的少部分。而且，随着抗牛素药物的研发以及社会经济卫生条件的改善，感染性疾病的比例也较以前更少，而其他因素（特别是免***性）的炎症则相对多起来，再随便用抗生素来消炎就错得更多。
那些抗生素“消”不了的“炎”
通过上面的分析，我们知道，但凡不是细菌感染的炎症，用抗生素来消炎都是效果不佳的。那么，有哪些最经常被我们误解误用的疾病呢？
病毒感染所致的炎症性疾病，譬如感冒、肝炎、腮腺炎，包括2003年来势汹汹的SARS（***型肺炎）。所以，一感冒，喉咙有点发炎，来，吃点“xx西林”（青霉素类抗生素）的消炎药，或者想好得快，干脆求医生吊一针，这都是没用的。
感冒等病毒感染，会引发体内的免***系统起来对抗，最后多半能战而胜之，所以医生们称之为自愈性疾病。甲肝、乙肝等病毒性肝炎，则都有***苗来预防，即便感染，用的也不是抗生素。
而那些由物理、化学因素刺激所致的，譬如长期烟酒刺激、辛辣饮食、空气污染损伤咽部黏膜所致的慢性咽炎，要除去它，自然是有针对性改变生活才能消除炎症。没有菌，抗生素哪有用武之地？当然也有细菌感染导致的急性咽炎，这就要有劳抗生素来消炎了。
磺胺类药物篇6
一、流行情况
1.流行特点 一年四季均可发生，在南方梅雨季节常呈现发病高峰；在北方以夏、秋季较多发，均呈地方性流行。各品种家兔均易感，尤以断奶后至3月龄的兔易感，发病死亡率可达50% 以上。一般成年兔感染后带虫，极少发病死亡，但能排出卵囊，是重要的传染源。
2.临床症状 兔球虫病的潜伏期为2～3天或更长。肝球虫病症状为精神萎顿、食欲减退，发育停滞、消瘦，肝区有压痛、贫血，可视粘膜苍白，部分出现黄疸；肠球虫病大多呈急性经过，幼兔在发病前能吃草料，未见异常表现即突然歪倒，四肢痉挛划动，头向后仰，发出惨叫，迅速死亡，或可暂时恢复，间隔一段时间，重复以上症状，最终死亡。慢性肠球虫病表现为体质下降，食欲不振，腹胀，下痢，排尿异常，尾根部附近被毛潮湿、发黄。
3.病理变化 兔肝球虫病死兔剖检可见肝脏明显肿大，肝表面可见黄白色结节，大小不等，质地较硬，或肝表面可见大量水泡样病灶，内有较多半透明液体。结节或水泡中均有大量卵囊。胆汁浓稠，在胆管、胆囊粘膜上取样涂片，能检出卵囊。
兔肠球虫病的病理变化主要在肠道，肠壁血管充血，肠腔臌气，肠粘膜充血或出血，十二指肠扩张、肥厚，粘膜有充血或出血性炎症，小肠内充满气体和大量粘液。主要依据球虫卵囊检出作判断。急性病例有时肉眼不能发现病变，球虫卵囊检查也很难发现，主要依据临床症状作出诊断。慢性时肠壁上有许多针帽大的黄白色结节和小的化脓性、坏死性病灶，结节内含大量球虫卵囊。
二、常用药物及用药方案
1.地克珠利 是广谱苯乙腈类抗球虫药。预防时以每百公斤饲料混0.1%地克珠利预混剂100克。在***兔球虫病时，可用0.1%地克珠利预混剂，每百公斤饲料加400～500克拌匀，撤出其它饲料和饲草，连续用药2～3天，待发病得到控制后改为正常预防量。
2.氯苯胍 预防时每百公斤饲料拌药15克。***时用预防剂量的2～3倍。地克珠利连续使用7～8个月后，需要更换使用氯苯胍，再用4～5个月。
3.磺胺类药物 磺胺类药物也有一定的疗效，具体用法：磺胺喹恶啉，***剂量0.1%饮水，预防剂量0.05%饮水；乙胺嘧啶，饲料中拌入0.0025%乙胺嘧啶对肝球虫病有效；磺胺二甲氧嘧啶，加入饮水中，***剂量0.05%～0.07%，预防剂量0.025%。
磺胺药长期使用易在体内残留，影响无公害肉品的生产及对外出口，实际生产中最好不用或少用，如果使用应有足够的休药期。以上几种磺胺类药物连用4～5天后，应停药一段时间，再用药4～5天。如果通过饮水给药，水必须清洁。兔饲喂含水量大的饲料，如胡萝卜和青草时，应少饮水。
磺胺类药物除抗球虫外，长期使用会产生一定的毒性。抗叶酸剂，如乙胺嘧啶可加强其药效，同时，减少磺胺类药物使用剂量。由于磺胺类药物长期用作预防药，易产生出血性综合征、肾损害及生长抑制等毒性反应，因此磺胺药通常宜作***用药物。
三、用药注意事项
1.看清厂家和药物成分 现在兽药市场上兔用抗球虫药琳琅满目，一定要看清厂家和成分。首先要选用有厂家、有批号、有生产日期的正规厂家生产的产品。其次是要看清成分和含量。兔球净是长效抗球虫药，主要成分是磺胺间甲氧嘧啶钠；兔球灵主要成分是磺胺氯吡嗪钠、免***多肽、盐酸多西环素、美他环素等；长效兔球灭的主要成分为磺胺间甲氧嘧啶钠+琥珀青篙素+贝尼尔+细菌病毒毒素因子清除剂等；球克星主要成分是地克珠利；球必克的主要成分是氯本胍；杀球灵的主要活性成分为氯嗪苯乙氰。
2.马杜霉素不能用 在众多抗球虫药中，含有马杜霉素的各种剂型的药，不能用于兔，否则会发生中毒死亡。这一点养兔场户，一定要充分重视，否则会造成不可挽回的损失。
3.兔用球虫***苗还没有 由于抗球虫药投药时间长，很多养兔户希望有“球虫***苗”。对此，非常遗憾地告诉大家，这种***苗还没有。市场上很多号称“兔用球虫***苗”的药物，实际上是长效抗球虫药。
4.饲料中增加用药量 如果养兔既喂料又喂草，在用药预防兔球虫病时，应在饲料中增加用药量，否则会出现用了抗球虫药仍有兔发生球虫病的现象。
磺胺类药物篇7
生活实例
在一次优生咨询门诊，28岁的李先生满脸忧愁地对医生说：“我得了溃疡性结肠炎，一直吃柳氮磺胺吡啶。现在我结婚了，想要个孩子，听说这个药对危害很大，会影响宝宝的智力，我应该怎么办呢？”其实，像李先生这样既想生育又怕药物影响优生的准爸爸很多。
的确，李先生用的柳氮磺胺吡啶（柳氮磺吡啶、水杨酸偶氮磺胺吡啶、SASP）对溃疡性结核炎、克隆病很有效。但遗憾的是，这种药会导致减少，数量减少、活力降低、畸形率增高等不良反应。根据李先生的情况，医生修改了***方案，改用5-氨基水杨酸（5-ASA）、强的松等糖皮质激素类药物……一年半后，李先生兴奋地告诉医生，他太太已顺利生下一名健康活泼的女婴。
准妈妈用药不当，会影响发育乃至造成畸形，似乎已众人皆知。准爸爸擅自用药甚至滥用药物，会对胎儿造成不利影响，人们的关注还不够。那么，准爸爸用药如何保证安全呢？
在正常情况下，组织与供应营养的血液之间有一个防护层，医学上称为血―睾屏障，这一屏障可以阻止血液中某些物质进入。但是，不少药物却能通过血―睾屏障，从而影响功能，干扰的形成。此外，影响男性性生活的药物，也会间接影响优生、优育。
杀伤没商量
有些药物可以杀伤，直接影响优生，下列药物准爸爸不能随意使用。
抗癌药
大多数抗癌药对生殖细胞毒性较强，可直接干扰DNA的合成，导致的基因变异、染色体异常，还可能导致畸形，引起日后的畸胎、流产等。例如环磷酰胺（癌得星），可引起男性数量显著减少，甚至完全没有。甲氨蝶呤除了可伤害以外，还会减少每次射出的量。还有一些抗癌药像氮芥、长春新碱、顺铂等对的伤害也很大。
抗结核药
大多数结核病病人需要长期正规服用抗结核药物，但是，准爸爸长期使用抗结核药也不利于优生。另外，一些抗生素，像呋喃坦啶（呋喃坦丁、呋喃妥英），也有足够的证据表明它对有害。
激素
各种性激素类药物例如雄激素、克罗米芬，可影响人体的内分泌功能，医生常常用于***内分泌疾病。但是，这些药物是双刃剑，使用得当，有助于生育；使用不当则抑制发育。准爸爸应用雌激素、孕激素类药物时，还可能导致性降低，迅速减退甚至消失，从而影响功能。还有，诸如强的松、地塞米松等糖皮质激素，如果长期大量应用，也会降低准爸爸的并伤害的健康。
利尿药
例如安体舒通有抗雄性激素的作用，若长期使用，会降低并伤害。还有，双氢克尿塞（氢氯噻嗪、双克、DCT）也会降低；速尿（呋塞米、呋喃苯胺酸）和丁尿酸（丁苯氧酸、布美他尼）可诱发低血钾症，有时还会发生功能障碍，但补充钾盐后情况可改观。
此外，长期服用***十二指肠溃疡等疾病的西咪替丁（甲氰咪胍、泰胃美），可导致男性数量减少而造成不育。***痛风的秋水仙碱（秋水仙素）会导致减少。同样，长期服用抗癫痫药物、抗精神病药物和甲状腺素，对生育也不利，尤其是自己想当然用药，危害更大。
降低“误性事”
有些药物可能降低准爸爸的，有的导致减退、丧失，有的造成不能或不能，间接地影响受孕。下列药物准爸爸也不能随意使用。
降压药
例如，***高血压的利血平，即使剂量较小，也会影响大多数男性病人的，甚至造成不能，有的还会诱发抑郁症，使原有的障碍及低下更趋严重。因此准爸爸不宜选用利血平。胍乙啶也容易导致不能、延迟，甚至不能。
心血管药
例如，常用的甲基多巴、肼苯哒嗪（肼酞嗪）、美加明、哌唑嗪，以及***青光眼和高血压的可乐定，***冠心病的洋地黄、地高辛、强心灵，都会导致男性下降。***心律失常的心得安（普萘洛尔、萘心安），剂量稍加大，就很容易出现减弱和障碍等副作用。
抗精神病药
很多抗精神病药物对和性能力都有影响，例如长期使用安定、碳酸锂、鲁米那、苯巴比妥那、速可眠等药物后，很多男性病人会出现减退、丧失、不能和不能。
中草药
大多数中草药是天然植物，副作用不大。但是，对准爸爸而言，中草药也非绝对保险。例如，雷公藤对有不轻的杀伤力。另外，在产棉地区的准爸爸要特别注意，千万不要食用棉籽油，否则也会误了生育大计。
合理用药利优生
需要说明的是，并不是每一个准爸爸在服用上述药物后，都一定会伤害或影响。一般地说，药物影响准爸爸的生殖能力与病人所服用药物的剂量、时间和总量有关。伤害程度与服药时间长短成正比，与各种有害因素累积成正比，并与个人体质敏感程度有关。准爸爸既要重视药物对优生的影响，也不要过于担心。临床药物专家建议：准爸爸需要用药或正在用药时，一定要主动告诉医生自己的孕育计划，并在医生指导下减少用药剂量或改用对优生无影响或影响不大的药物。
疾病本身对遗传、优生的影响也不要忽视。有些准爸爸因害怕药物会伤害或影响，硬撑着不去用药，那也是得不偿失的，不仅会延误疾病的***，对优生也不利。目前主张，准爸爸应该及时***疾病，尽可能在疾病治愈后，再播撒生命的种子。
准爸爸停止用药多久，准妈妈才可以受孕呢？一般地说，大多数药物在停用1～2周后，体内的药物成分已消尽。保险一点的话，准爸爸停药3个月后，准妈妈再受孕更好、更安全。
相关链接
常用消炎药磺胺嘧啶会伤害吗？
磺胺类药物篇8
摘要:综述了免***分析法在拟除虫菊酯、氨基甲酸酯、有机磷、氟喹诺酮、磺胺5种农兽药多残留检测上的应用情况，着重讨论了抗原设计、抗体制备和方法建立等核心技术的研究进展，并对检测方法的发展进行了展望。
关键词:农兽药;多残留;免***分析法
AbstractThe applications of immunoassay methods in the multi-residue determination of pyrethroids，carbamate，organophosphorus，fluoroquinolones and sulfonamides were summarized in this paper. The study advancers on core techniques，such as antigen design，antibody production and method development，were discussed emphatically，and the further trend of immunoassay methods was proposed.
Key wordspesticides and veterinary drugs;multi-residue;immunoassay
农兽药残留危害人们的生活健康，是食品安全检测的关注焦点。基于特异性抗体的酶免***分析方法作为一种简便、快速和灵敏的检测方法，在近年来的食品安全检测中起到越来越重要的作用。采用酶免***试剂盒、胶体金试纸条高通量、快速筛选阳性样品后，再用仪器确证的方法得到检验监测单位的普遍认可。已成功应用的检测产品有克伦特罗、莱克多巴胺试剂盒和试纸条等。其他如孔雀石绿、苏丹红、呋喃西林、恩诺沙星等快速检测产品也已投放市场，推广使用还需要一定时间的验证。然而一个不争的事实就是，对于检测如磺胺类、氟喹诺酮类、有机磷类、拟除虫菊酯类等有害物质时，使用单残留试剂盒并不比直接使用仪器具有优势。特别是检测农残的快速检测产品目前还不成熟，稳定性和假阳性等问题还未能很好解决。因此，如何同时检测一类药物，真正降低检测成本，并保证检测的准确性是目前农兽药的快速多残留检测的一种新趋势。
实现一类药物的多残留检测的基本思路是针对一类药物的共性结构设计并合成半抗原，由半抗原偶联载体蛋白制备全抗原，通过免***动物制备抗体，利用抗体对一类药物的识别作用，建立多残留检测酶免***分析方法[1-3]。
1农兽药的多残留现状
近年来，食品安全问题一直是困扰民生的焦点问题，而农兽药残留是制约食品安全的首要因素。2000年开始，广东省开展食品本底水平和污染监测项目，截至2005年的监测结果显示:蔬菜甲胺磷、敌百虫和敌敌畏检出率分别为7.95%、3.03%和2.65%，水果有机磷农药水胺硫磷检出率为10%，新鲜食用菌有机磷农药内吸磷检出率为8.33%，茶叶有机磷农药三氯杀螨醇检出率为5%，蔬菜氨基甲酸酯农药和拟除虫菊酯农药残留检出率为1.47%、17.17%，水果拟除虫菊酯农药检出率为20%。尽管国家加强了农药使用的监控力度，但是农药中毒事件和对外贸易摩擦仍时有发生。2008年1—2月，中日贸易过程中发生的“毒饺子”事件(有机磷农药中毒事件)，使中国食品在日本市场遭受重创。而兽药方面主要是一些抗生素和兴奋剂的危害，如磺胺类、氟喹诺酮类、肾上腺素兴奋剂等。直到2009年2月初，广东仍有瘦肉精中毒事件发生，导致6~10人中毒。2009年6月1日，中华人民共和国食品安全法正式实施，表明了国家维护食品安全的力度。有了法律法规的约束作用，仍然不可缺少检测方法的支持。针对目前农兽药品种繁多，多残留现状严峻，开展多残留检测研究，尤其是能实现快速、高通量、现场筛查的免***分析法的研究非常重要。
2免***分析法在各类农兽药多残留检测上的应用
农兽药多残留酶免***分析法的基本原理是根据待测一类药物的共性结构或共有结构特征，设计并合成突出其结构特征的半抗原，半抗原偶联大分子蛋白质作为全抗原并免***动物，通过细胞融合获得杂交瘤细胞，收集并纯化杂交瘤细胞分泌的类特异性抗体(或称宽谱特异性抗体、广谱特异性抗体)，利用抗体建立酶免***吸附测定(ELISA)、免***胶体金(GICA)等免***分析法。
2.1拟除虫菊酯
拟除虫菊酯(Pyrethroids)农药是20世纪70年代研发的一类仿生杀虫剂，具有化学性质稳定，不易光解，无特殊臭味及安全系数高，使用浓度低，触杀作用强，灭虫速度快等优点。目前其酶免***分析检测方法的研究已经开展比较多。Pullen等[4]直接采用氯菊酯的水解产物氯菊酸作半抗原，分别制备了具有不同交叉反应率的单克隆抗体和多克隆抗体，初步探索了2种抗体的类特异性。结果发现单克隆抗体可检测类型Ⅰ(菊酯类)拟除虫菊酯，对类型Ⅱ拟除虫菊酯(氰菊酯)没有交叉反应;而多克隆抗体既可检测类型Ⅰ拟除虫菊酯，又可检测类型Ⅱ拟除虫菊酯。Mak等[5]利用菊酸和间苯氧基苄醇合成的半抗原与甲状腺球蛋白结合制备Ⅱ型菊酯的免***原并免***动物获得多克隆抗体。由该抗体建立的ELISA方法检测氯氰菊酯、百树菊酯、氨氟氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯和氟胺氰菊酯的IC50值为6~205 ng/mL，而对Ⅰ型菊酯无交叉反应。国内在这方面的研究包括有李志茹[6]、骆爱兰等[7]、杨挺等[8]、祝金凤[9]的报道。其中祝金凤设计合成了能模拟Ⅱ型菊酯类农药特征结构的半抗原(RS)-α氰基-3-苯氧基苄基(RS)-cis，trans-2，2-二甲基-3-羧基-环丙烷羧酸酯，用活泼酯法制备人工抗原，免***新西兰大白兔获得抗Ⅱ型菊酯类农药的广谱特异性抗体。该抗体对5种Ⅱ型菊酯有识别作用，对氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯的灵敏度较高，间接竞争ELISA方法的检测限分别为11.7 ng/mL和48.5 ng/mL。
2.2氨基甲酸酯
氨基甲酸酯类农药(Carbamate)具有杀虫谱广、用药量少、药效快等特点，目前对其检测主要采用高效液相色谱法和酶抑制法等，酶免***多残留检测的研究报道很少。孙覃[10]合成了半抗原6-(苯氧基羰基)氨基-1-己酸并成功制备了芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂的通用抗体，抗体检测混灭威、灭除威、灭杀威、甲萘威的IC50值为0.47、0.65、1.08、0.53 μg/mL，其中混灭威在自来水、土壤以及青菜中的添加回收率分别为101.6%、87.7%和90.4%。
2.3有机磷
有机磷农药(Organophosphorus)通常是指磷(膦)酸酯、硫逐磷酸酯、磷酰胺酯类有机磷化合物。对于有机磷农药的多残留检测通常采用的是制备类识别特异性的抗体的途径。已有的报道都是针对二甲氧基(硫代)磷酸酯或二乙氧基(硫代)磷酸酯两大类有机磷农药的研究。自从1988年Sudi等[11]，首先提出建立有机磷农药多残留检测的酶联免***的方法后，国内外已有不少利用类特异性多克隆抗体建立二甲氧基(硫代)磷酸酯或二乙氧基(硫代)磷酸酯两大类有机磷多残留检测的报道[12-17]。Jang等[18]制备了O，O-二乙基-O-(5-羧基-2-氟苯基)硫代磷酰酯作为通用半抗原，偶联蛋白质作为人工抗原免***小鼠，通过细胞融合体外培养杂交瘤细胞，获得单克隆抗体，并首次利用单克隆抗体建立了间接竞争ELISA的方法用于有机磷多残留检测是一个突破。该方法对4种含有二乙氧基有机磷农药的IC50值在0.1~0.3 μg/mL，克服了利用多克隆抗体建立的方法特异性较差的困难。梁颖等[19]设计了3个含二甲氧基二硫代磷酸酯共有结构的半抗原，制备出3个单克隆抗体，并建立ELISA方法，检测马拉硫磷、乐果、亚胺硫磷、杀螟硫磷、倍硫磷可以达到限量标准，印证了Jang 采用单克隆抗体建立多残留检测方法的可行性。同时，还首次作了实际样品的检测，探讨了异源包被原对提高检测灵敏度的作用。
2.4氟喹诺酮
氟喹诺酮(Fluoroquinolones)类药物是一系列新型氟取代的喹诺酮类衍生物，广泛用于畜禽和水产养殖业。由于该类药物本身带有羧基活性基团，方便于酶免***分析方法的应用。蔡勤仁等[20]利用碳二亚胺法合成恩诺沙星人工抗原，免***BALB/c小鼠并采用杂交瘤技术制备了类特异性单克隆抗体，与恩诺沙星、环丙沙星、麻保沙星、沙拉沙星、达氟沙星的交叉反应率为27.4%~110.8%，检测限为0.13 ng/mL。魏东[21]利用活泼酯法制备了沙拉沙星人工抗原，免***动物得到抗血清，并建立FQNS多残留检测方法。该方法对沙拉沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星的检测限为19.1~26.2 ng/mL。兔肉中4个药物在0.5~2 000.0 ng/mL范围内的平均添加回收率为85%。李振华[22]采用达氟沙星偶联牛血清蛋白的人工抗原制备的兔多克隆抗体能识别达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、诺氟沙星和洛美沙星，交叉反应率为22.7%~111.2%。王战辉等[23]采用环丙沙星直接偶联牛血清蛋白作为免***原免***动物并制备得到宽谱特异性抗体单克隆抗体，该抗体建立的方法检测12个氟喹诺酮的交叉反应率在35%~100%，最低检测限都可以达到最高限量检测要求。
2.5磺胺
磺胺(Sulfonamides)类药物是一类具有广谱抗菌活性的化学品，广泛应用与人和动物细菌性疾病的***和预防。该类药物的酶免***多残留检测分析研究已经比较多。1991年，Sheth等[24]用化学方法合成了3种具有磺胺母核结构的半抗原TS、CS、NS，以磺胺噻唑衍生物TS偶联蛋白作为免***原，制备了广谱特异性抗体。Muldoon等[25]以对氨基苯磺酸作为半抗原偶联载体蛋白后免***动物，通过杂交瘤技术制备的单克隆抗体能很好识别游离药物，检测磺胺硝苯、磺胺吡啶、磺胺噻唑的IC50值分别为1.41、22.80、322.00 ng/mL。ZHANG Hong-yan等[26]等设计并合成了5个对氨基苯磺酸衍生物作为半抗原，其中用对氨基苯甲酸作为手臂的半抗原偶联KLH后免***新西兰大白兔得到的抗体最佳。利用其建立的异源直接竞争ELISA方法检测11个磺胺类药物的IC50值均小于100 ng/mL，其中磺胺异唑、磺胺噻唑、磺胺甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺吡啶和磺胺甲噻二唑可以满足最高残留限量的要求，牛奶样品中药物的添加回收率为104%~131%。吕芳[27]以含五元杂环的磺胺类药物为研究对象，制备了族特异性单克隆抗体，建立的间接竞争ELISA方法，检测磺胺噻唑、酞磺胺噻唑、琥珀酰磺胺噻唑、磺胺甲噁唑及四者等浓度混合物的检测限分别为14.40、6.30、18.20、33.90、4.63 ng/mL。
3展望
目前，农兽药多残留免***分析法的应用仍处于不成熟的阶段。限制其使用的因素，一是抗药物抗体的类特异性，二是免***分析法本身的稳定性和灵敏度。前者是开发农兽药多残留免***分析法的关键。目前的研究成果往往存在抗体谱宽足够但特异性不强或谱宽较窄但特异性较好的情况，真正能达到谱宽合适且特异性较好、检测一类药物的灵敏度相对一致的成果极少。而后者，检测方法的稳定性和灵敏度，是开发相应检测试剂盒产品的制约因素。目前的研究主要集中在制备类特异性抗体的层面上，涉及检测方法和试剂盒开发的研究较少。试剂盒的开发可见于一些专利，市面上销售的试剂盒极少，更多的是处于实验室研究阶段。
尽管农兽药多残留免***分析法仍不成熟，但作为低成本、高通量、快速检测的一种检测方法，适应全面保证大众食品安全的时代需要，加上国家在这方面的投入，该方法有良好的发展前景。实际上，对于上述的限制因素已有一些研究报道[25-28]。对于抗体的类特异性，笔者认为:一是可以结合计算机模拟[29~30]等手段设计突出检测对象共性结构的半抗原，二是可以考虑用自制的树枝状大分子骨架定点、定量连接半抗原构成全抗原。结合这两者可以有针对性的设计合理的抗原，并使用这些抗原制备多克隆抗体或单克隆抗体。后续通过试验比较抗体的抗药物谱宽和特异性，选择谱宽和特异性都较佳的抗体用于检测方法的建立和检测产品的开发。对于检测方法的稳定性和灵敏度，笔者认为可以借鉴开发成功的单残留检测试剂盒的缓冲溶液体系，同时考虑多个药物提取液的优化问题以提高检测方法的稳定性;而灵敏度方面可以结合纳米技术，如量子点技术的应用，使检测灵敏度有数量级的提高。
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磺胺类药物篇9
【摘要】 建立了动物源性食品中磺胺嘧啶残留的免***层析快速测定方法。用胶体金标记磺胺嘧啶单克隆抗体作为显色剂，磺胺嘧啶竞争物包被于硝酸纤维素层析膜上作为捕获试剂，采用竞争反应模式制成胶体金免***层析试纸。该免***层析试纸可以在15min内完成对磺胺嘧啶残留的半定量检测。读条系统判定灵敏度为5ng/ml，肉眼判定检测限灵敏度为10ng/ml，与其它磺胺类药物无交叉反应。该方法在不同动物源性食品(鸡肉、鸡蛋、鸡肝、猪肉、猪肝、牛奶、蜂蜜)中添加磺胺嘧啶的回收率在68.1%～118.8%范围内。动物试验样品检测结果表明，该方法与ELISA及HPLC具有好的符合率。该方法灵敏度高，检测准确、简便、快速，有良好的开发应用前景。
【关键词】 胶体金； 免***层析； 磺胺嘧啶
ABSTRACT An immunochromatographic assay (ICA) was developed for the detection of sulfadiazine in food products of animal origin. Based on the competitive reaction mechanism， the competitor of sulfadiazine was coupled with the nitrocellulose membranes acted as the capture reagent. Colloidal gold was coulped with monoclonal antibody against sulfadiazine served as the detection reagent. With this method， semiquantitative detection of sulfadiazine can be completed in less than 15min. The sensitivity to sulfadiazine was 5ng/ml by strip reader and 10ng/ml by eye measurement， and no crossreactivity with other sulfonamides. The recoveries were from 68.1%～118.8% in different food products of animal origin (chicken muscle， egg， chicken liver， porcine muscle， porcine liver， milk， honey). Results of animal experimental samples showed that there was a good agreement rate between ICA and ELISA as well as HPLC. This method is sensitive， accurate， simple， rapid and with a prominsing usage in practical application.
KEY WORDS Colloidal gold; Immunochromatography; Sulfadiazine
磺胺嘧啶(SD)是应用广泛的抗菌药物之一，在畜牧业生产中被广泛应用，但它有许多副作用。另外，长期应用许多细菌可对其产生抗药性［1］。磺胺嘧啶的不合理使用将导致其在动物源性食品中残留，并通过食物链进入人体，给人体健康带来潜在的威胁。我国以及美国、欧盟等国家规定了动物性食品中磺胺嘧啶的最高残留限量(MRLs)为0.1mg/kg。目前检测磺胺嘧啶残留的常用方法主要是高效液相色谱法(HPLC)［2，3］和酶联免***吸附试验(ELISA)［4，5］，该方法灵敏、准确，但需要昂贵的设备， 需要专业人员操作， 而且操作烦琐，检测时间长，成本高，推广使用受到一定限制。免***层析方法是一种新型的检测方法，具有简便、快速、准确、费用低和不需要专业人员操作等优点，适用于免***学领域中的快速检测分析。目前，该方法已被应用于药物残留分析［6～8］。
针对磺胺嘧啶残留检测方法存在的缺陷及免***层析方法的优点，在本研究中我们利用免***层析方法实现了动物源性食品中磺胺嘧啶残留的的快速检测。
1 材料与方法
1.1 主要材料
冷冻离心机，HITACHI公司；ZX1000点膜仪，CM4000切条机，TSR3000读条系统，BioDot公司；抗SD单克隆抗体，本实验室保存；羊抗鼠IgG，华美生物工程公司；磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲口恶唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺喹口恶啉、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、克伦特罗、氯金酸(HAuCl4·4H2O)，Sigma公司产品；氯霉素，中国药品生物制品检定所；硝酸纤维素膜、玻璃纤维，Millipore公司产品；磺胺嘧啶残留ELISA检测试剂盒，RANDOX公司；高效液相系统，Waters公司生产。
1.2 方法
(1)SD竞争物的合成 采用重氮化方法［9］将SD与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联，通过改变SD与BSA的反应比例合成不同偶联比的SD竞争物BSASD。
(2)抗SD单克隆抗体的纯化 采用辛酸硫酸铵沉淀法［10］从抗SD单抗腹水中提取单抗IgG。通过SDSPAGE(即SDS聚丙烯酰胺凝胶变性电泳)测纯度，用核酸蛋白仪测其浓度。
(3)胶体金颗粒的制备 采用柠檬酸三钠还原法［11］制备胶体金。取0.01%的氯金酸溶液100ml，搅拌状态下加热至沸腾，加入1%的柠檬酸三钠2ml，搅拌加热15min，室温冷却后，放置4℃存放。
(4)金标抗体的制备 10ml胶体金，用0.1mol/L K2CO3溶液调其pH至8.0，在搅拌状态下，加入一定量的抗SD单抗100μg(将磺胺嘧啶单抗浓度调整到1mg/ml)，混匀，放置30min，加入2.5ml 5%的BSA，混匀，4℃放置1h，4℃ 12000r/min离心30min，弃上清，将沉淀用pH9.0的硼酸缓冲液溶解至10ml；重复离心洗涤两次，沉淀用pH9.0的硼酸缓冲液稀释至1ml。用点膜仪将其均匀的喷涂于玻璃纤维上，冷冻干燥后，密封备用。
(5)免***层析试纸的制备 免***层析试纸由吸样材料、玻璃纤维、硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水材料和含双面胶的白色塑料板组成(***1A)。用点膜仪在玻璃纤维上喷涂金标抗SD单抗作为显色剂；在NC膜上包被羊抗鼠IgG和BSASD，分别作为对照线(C)和检测线(T)。将吸样材料、玻璃纤维、NC膜、吸水材料依次粘在白色塑料板上，用切条机切成宽3mm的小条制成免***层析试纸。
(6)免***层析试纸的检测原理 将试纸插入样品液中，样品在毛细管作用下向上泳动，当泳动至玻璃纤维时，固态化的金标抗SD单抗迅速溶解释放，一起向前泳动至T线，若样品中不含SD，金标抗SD单抗与包被于NC膜上的BSASD发生特异性免***反应而被截获，在T线形成红色条带，部分金标单抗穿过T线被包被于C线的羊抗鼠IgG截获，形成红色条带(***1B)；反之，若样品中含有SD，SD首先与金标抗SD单抗发生免***反应，抑制其与T线的SDBSA的结合，使T线截获的金标抗体的量减少，T线颜色变浅，部分金标单抗或其复合物穿过T线被C线截获，形成红色条带(***1C)；T线颜色的深浅与样品中SD的含量成负相关，当样品中SD的量足够大时，T线将无颜色出现，C线出现红色条带(***1D)。
(7)样品预处理
鸡蛋样品 将鸡蛋样品匀浆，取2g样品加入4ml乙酸乙酯上、下振荡3min，室温5000r/min离心5min，取300μl上层液体80℃水浴蒸干或在氮气流下吹干，用150μl 0.01mol/L pH7.4的PBS溶解残留物。
组织样品(鸡肉、猪肉、肝脏等) 将组织样品匀浆，取2g加入4ml乙酸乙酯振荡2min，室温3000r/min离心5min，取300μl上层液体于1.5ml离心管中80℃水浴蒸干或在氮气流下吹干，用150μl 0.01mol/L pH7.4的PBS解残留物。
牛奶样品 样品经3000r/min离心5min脱脂，吸取中层牛奶2ml加入4ml乙酸乙酯振荡2min， 室温
***1
胶体金试纸条示意***3000r/min离心5min，取300μl上层液体于1.5ml离心管中80℃水浴蒸干或在氮气流下吹干，用150μl 0.01mol/L pH7.4的PBS溶解残留物。
蜂蜜样品 取1g蜂蜜样品加入2ml双蒸水溶解，加2ml乙酸乙酯上下振荡2min，室温3000r/min离心5min，取300μl上层液体于1.5ml离心管中80℃水浴蒸干或在氮气流下吹干，用150μl 0.01mol/L pH7.4的PBS溶解残留物。
(8)样品的检测及结果判定 分别将120μl SD空白标准品及待检样品依次加入微孔板孔中，将试纸插入微孔板孔中，反应10～15min判断结果。SD空白标准品试纸检测线处出现红色条带；若待检样品试纸检测线出现与空白标准品检测线相似的红色条带，说明样品中未检出SD，判为阴性；出现明显浅于空白标准品检测线颜色的浅红色条带，说明样品中SD浓度在10～100ng/g范围内，判为弱阳性；若待检样品试纸检测线无颜色出现，说明样品中SD浓度大于100ng/g，判为阳性；若试纸对照线不出现红色条带，说明该试纸失效。
(9)免***层析法(ICA)与ELISA及高效液相色谱法(HPLC)的比较 选择健康“白来航”蛋鸡7只，随机分成对照组(2只)和试验组(5只)。对照组饲喂不含磺胺类药物的饲料，试验组饲喂含400mg/kg SD的饲料［12］。试验期间，自由采食，自由饮水。试验组连续喂药5d后停药，停药后连续收集8d鸡蛋。同时用ICA和ELISA对鸡蛋样品进行检测；选择健康“三黄”仔肉鸡(每只0.75kg)56只，随机分成对照组(40只)和试验组(16只)。对照组饲喂不含磺胺类药物的饲料，试验组饲喂含500mg/kg SD的饲料［9］。试验期间自由采食，自由饮水。试验组连续喂药7d后停药，喂药后1、3、5、7d和停药后12、24、48、72h每次宰杀试验组鸡5只，对照组鸡2只，采其肌肉。同时用ICA和HPLC对样品进行检测。
2 结果
2.1 抗SD单克隆抗体的纯化
已知小鼠IgG抗体分子量为150000，重链50000，轻链25000，SDSPAGE显示(***2)单抗已基本得到了纯化，纯度当在95%以上，可用于制备免***胶体金。用核酸蛋白仪测其浓度为2mg/ml。
2.2 SD竞争物的鉴定及选择
将彻底透析后的BSASD作紫外可见光光谱扫描检测。SD经重氮化后，与载体蛋白进行偶联，偶联产物经紫外光谱扫描，在360nm附近形成一特定偶氮峰［13］， 280nm处的吸收峰是载体蛋白BSA特征性的***2
抗SD单克隆抗体SDSPAGE***谱
吸收峰；368nm附近处的吸收峰是BSASD偶氮键特征性的吸收峰，结果表明偶联成功。同时当偶联物中BSA的峰值相同时，偶联物中的SD的峰值明显不同，表明合成的偶联物的偶联比是不同的，经计算BSASD的偶联比分别为1∶5、1∶10、1∶20和1∶40。将不同偶联比的BSASD用稀释成不同的浓度，包被于硝酸纤维素膜上，制备免***层析试纸，经灵敏度分析结果表明，当BSASD偶联物偶联比为1∶10时，免***层析试纸具有最佳的灵敏度。
2.3 胶体金的鉴定
胶体金外观橙红色，紫外可见光扫描显示其最大吸收峰在520nm，电镜观察显示其颗粒大、小均一，形状规则，通过测量其直径为(18.6nm±1.2)nm。
2.4 试纸条灵敏度试验
用免***层析法试纸分别检测浓度为0、5、10、20、40、80、100ng/ml的SD标准品，重复8次，通过肉眼观察其检测线，并用Biodot TSR3000读条系统测其检测线吸光值(G/PeakROD值)，结果见***3。肉眼观察5ng/ml SD标准品与0ng/ml的标准品检测线无明显差异，但根据统计学分析G/PeaROD值差异极显著(P
2.5 试纸条特异性试验
用免***层析试纸分别检测浓度1000ng/ml的其
***3
灵敏度试验它药物，如磺胺二甲嘧啶、磺胺甲口恶唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺喹口恶啉、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、克伦特罗、氯霉素，试纸检测区均有两条红线出现，用Biodot TSR3000读条系统测其检测线G/PeakROD值：磺胺二甲嘧啶(0.0595)、磺胺甲口恶唑(0.0597)、磺胺对甲氧嘧啶(0.0601)、磺胺喹口恶啉(0.0588)、磺胺二甲氧嘧啶(0.0597)、磺胺间甲氧嘧啶(0.0593)、克伦特罗(0.0601)、氯霉素(0.0597)，与0ng/ml的磺胺嘧啶标准品G/PeakROD值(0.0590)基本一致。说明免***层析试纸具有较好的特异性。
2.6 添加回收试验
将SD标准品加入空白动物源性食品样品(鸡肉、鸡蛋、鸡肝、猪肉、猪肝、牛奶、蜂蜜)中，使其SD含量分别为10、20和100ng/g，每个滴度设8个重复，样品经预处理后用免***层析试纸进行检测，并用Biodot TSR3000读条系统测其检测线G/PeakROD值，根据标准曲线计算SD含量及其回收率。结果表明，其回收率在68.1%与118.8%之间(表1)。
2.7 免***层析法(ICA)与ELISA的比较
用ICA和ELISA同时测定来自动物试验鸡蛋样品，ICA根据肉眼判定结果，结果见表2。52份鸡蛋样品中，二者阳性符合率为100%(25/25)，弱阳性符合率为72.7%(8/11)，阴性符合率为84.2%(16/19)，总符合率为94.2%(49/52)。参照我国SD残留限量标准，SD残留大于100ng/g判为阳性(+)，小于100ng/g判为阴性(-)，ICA和HPLC检测鸡肉中SD表1
磺胺嘧啶在动物源性食品中的回收率表2
免***层析法(ICA)与ELISA的比较 残留的符合率为100%。
2.8 ICA与HPLC的比较
用ICA和HPLC同时测定来自动物试验鸡肉样品，ICA根据肉眼判定结果，结果见表3。二者阴性符合率为82.8%(24/29)，弱阳性符合率为28.6%(2/7)，阳性符合率为100%(24/24)，总符合率为89.3%(50/56)。参照我国SD残留限量标准，SD残留大于100ng/g判为阳性(+)，小于100ng/g判为阴性(-)，ICA和HPLC检测鸡肉中SD的符合率为100%。表3
免***层析法与高效液相色谱法的比较
2.9 应用
在某市的农贸市场和超级市场采集140份鸡蛋样品和100份鸡肉样品，用免***层析试纸进行检测，结果表明，3份鸡蛋样品中含有SD残留，浓度均大于100ng/g，为阳性样品；2份鸡肉样品中含有SD，其中1份浓度在10～100ng/g，另1份浓度大于100ng/g。用HPLC法对其复核，鸡蛋样品SD含量分别为229、112和125ng/g，鸡肉样品SD含量分别为56和138ng/g，与免***层析法检测结果一致。
3 讨论
本研究采用竞争反应原理建立了SD残留检测的胶体免***层析法。将BSASD固定于硝酸纤维膜上，金标抗SD单抗固定于玻璃纤维，制备免***层析试纸。这样SD竞争物BSASD与样品中的SD共同竞争金标单抗。在竞争反应，BSASD与SD对金标单抗竞争力的强弱直接影响检测的灵敏度。BSASD竞争力弱，SD竞争力强，灵敏度就高；反之，灵敏度就低。BSASD竞争力与偶联于载体蛋白上的SD的量密切相关，因此偶联物中BSA与SD的比例是比较关键的。在本研究中，为提高检测的灵敏度，我们合成不同偶联比的SD竞争物BSASD，从中筛选出了具有最佳检测灵敏度的的BSASD偶联物(偶联比为1∶10)。
由于盐类成分能影响胶体金对抗体的吸附，并可使其聚沉，因此，标记之前必须彻底除盐，一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低的盐溶液(0.005mol/L NaCl pH7.0)中透析。长期低温保存的抗体，特别是在浓度高时，很容易形成聚合物，聚合物对标记过程及金标抗体的稳定性有一定影响，因此，标记之前须用微孔滤膜或超速离心除去不溶物。
目前应用免***层析技术建立的检测方法，大多只能进行定性分析(阳性、阴性)。要进行半定量、定量分析，一般需要借助读条装置来实现［6，14］。为了克服这种缺陷，在本研究我们以肉眼判定检测限(10ng/ml)与我国SD残留限量标准(100ng/ml)为cutoff值，采用分区判断的方法实现了对SD残留的半定量检测。当样品中SD残留浓度低于方法肉眼判定检测限时，检测线颜色与阴性对照检测线无明显差异，判为阴性；当样品中SD残留浓度在肉眼判定检测限与我国SD残留限量标准(100ng/ml)范围内时，其检测线颜色明显浅于阴性对照检测线，判为弱阳性；当样品中SD残留浓度高于我国SD残留限量标准(100ng/ml)范围内时，其检测线无颜色出现，判为阳性。该分区判断半定量检测方法在SD残留中取得了较好的效果。
在ICA和HPLC对来自动物试验的56份鸡肉样品同步检测中，HPLC方法为中国兽药监察所起草的检测方法，该本方法在鸡肉中的检测限为50ng/g，规定样品中残留量小于50ng/g时，判定为未检出；ICA的肉眼判定检测限为10ng/g。在10～100ng/g区段内，检测试剂盒检出的7份样品中，可能其中有的样品SD含量在10～50ng/g范围内，超出了HPLC法的检测限，HPLC方法判定为未检出，提示在10～100ng/g区段内两种方法的符合率较低(28.6%)。但以我国SD残留限量标准(100ng/g)为标准，二者符合率为100%。
本研究建立的免***层析方法检测动物源性食品中磺胺嘧啶残留具有简便、快速和灵敏度高等特点，它克服了目前检测方法存在的操作繁琐，检测时间长的缺点，有广泛的应用前景。
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磺胺类药物篇10
摘要目的：探讨磺胺嘧啶银在压疮患者中的应用效果。方法：2012年1月~2013年10月收治住院患者124例，将其随机等分为对照组和试验组，对照组采用庆大霉素***压疮，试验组采用磺胺嘧啶银***压疮。比较两组患者的疗效。结果：试验组患者疗效优于对照组（P<0.05）。结论：对患者采用磺胺嘧啶银***，疗程短，治愈率高，疗效显著，符合现代伤口换药湿性愈合的理念。
关键词 压疮；磺胺嘧啶银；***；疗效观察
doi：10.3969/j.issn.1672-9676.2015.02.074
作者单位：200050上海市上海电力医院
曹燕文：女，本科，副主任护师，护理部主任
Effect of silver sulfadiazine treat in Ⅲ-Ⅳ period pressure sores
CAO Yan-wen，GU Hong-hua（Shanghai Electric Power Hospital，Shanghai200050）
AbstractObjective：To investigate the therapeutic effects of silver sulfadiazine in pressure sores.Methods：124 patients who were admitted to hospital in Jan.2012-Oct.2013. were randomly divided into control group and experimental group.The control group using gentamicin treatment of pressure sores on patients，the experimental group using silver sulfadiazine treatment.Results：The experimental group was significantly better than the control group.Conclusion：Patients with silver sulfadiazine treatment had some advontages，such as short course，high cure rate，a significant effect，in line with current wound dressing moist healing concept.
Key wordsPressure ulcers；Silver sulfadiazine；Treatment；Efficacy
压疮是临床上常见的并发症之一［1］，是由于局部组织长期受压，导致血液循环障碍，局部持续缺血、缺氧、营养不良而致的软组织溃烂和坏死，一旦发生，不仅增加患者痛苦，严重感染时还会危及患者生命。我院对62例压疮患者采用磺胺嘧啶银***，取得了较好效果，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料2012年1月~2013年10月收治住院患者124例，其中男67例，女57例。年龄50~85岁。压疮面积3 cm×4 cm~10 cm×8 cm，均为Ⅲ~Ⅳ期压疮。其中糖尿病患者34例。将其随机等分为试验组和对照组。两组患者一般资料比较无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2方法压疮患者入院后，先对其进行全身评估，包括全身营养状况、压疮面积、压疮分期、肢体活动度等。
1.2.1试验组表面有黑痂的压疮，将磺胺嘧啶银敷于黑痂上，隔日换药1次，观察黑痂软化情况。待黑痂清除后，创面每日先用3%过氧化氢进行消毒，再用生理盐水将过氧化氢冲洗干净，将涂有磺胺嘧啶银的纱布进行填塞，外用无菌纱布覆盖，创面中的腐烂组织应不断进行清除，直至创面为新鲜肉芽组织。创面渗出液减少后，换药再改为隔日1次，对有脓性分泌物创面的换药方法如同黑痂清除后一样，若有污染应及时予以更换。
1.2.2对照组对黑痂创面需外科清创，创伤较大［2］。创面用生理盐水棉球清洁后，将含有庆大霉素溶液的纱布湿敷创面，外用无菌纱布覆盖，每日换药1次，创面中的腐烂组织应不断进行清除，直至创面为新鲜肉芽组织，若有污染及时予以更换。
1.3疗效判断标准治愈：疮面愈合痂皮脱落；显效：无黄色分泌物、疮面缩小，新肉芽组织生长；有效：渗出物减少疮面无扩大；无效：疮面扩大，渗出物增多，周围红肿［3］。
1.4统计学处理采用SAS 8.0软件进行分析，等级资料比较采用Wilcoxon秩和检验，检验水准α=0.05。
2结果（表1）
3讨论
3.1磺胺嘧啶银的作用机制磺胺嘧啶银为磺胺类抗菌，抗菌谱较广，对多数革兰氏阳性菌及多数革兰氏阴性菌敏感，对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等致病菌有中度以上敏感的抗菌作用［4］。
3.2庆大霉素的作用机制庆大霉素是一种氨基糖苷类抗生素，主要用于***细菌感染，尤其是革兰氏阴性菌引起的感染。庆大霉素能与细菌核糖体30 s亚基结合，阻断细菌蛋白质合成。
3.3使用磺胺嘧啶银***压疮的优点（1）磺胺嘧啶银能发挥磺胺类及亚硝酸银两者之间的抗菌作用，抗菌谱较广，特别是对绿脓杆菌有强大的抑制作用。（2）磺胺嘧啶银对伤口刺激性小，且不易产生耐药性，使用后压疮表面覆盖着一层药膜，创面不易污染，除能控制感染外，还可保持湿润的环境，促进炎症吸收和肉芽组织迅速生长，缩短创面愈合的时间。（3）愈合时不结硬痂，没有干裂症状，逐渐自然脱落而治愈，减轻了患者的痛苦。
4小结
本次采用磺胺嘧啶银***Ⅲ~Ⅳ期压疮，通过对比124例压疮患者的疗效观察进一步证实，磺胺嘧啶银可控制感染，保护创面，促使伤口快速愈合，不粘连伤口，缩短压疮***时间，治愈率高，疗效显著，符合现代伤口换药湿性愈合的理念［5］，尤其适用于感染性的压疮，同时减轻了患者换药时的痛苦，对压疮患者的***具有重要意义，值得临床推广应用。
参考文献
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