学文网摘要：以新几内亚凤仙花种子无菌萌发的试管苗为材料,探讨了激素对芽增殖、生根以及试管内开花的影响。结果表明:芽增殖最适培养基为MS+ 0.5mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA,35d顶芽增殖倍数为3.0,侧芽增殖倍数为5.3,生根率同步达100%;试管内诱导开花的最适培养基为 MS+2.0mg/L 6-BA +0.2mg/L NAA,其开花率达90%,平均每颗苗开花数为2.2朵,花期长达60d。
关键词：新几内亚凤仙;增殖;试管内开花
收稿日期：20120329
作者简介：郭云贵（1977—），女，湖北新洲人,硕士,讲师,主要从事细胞工程方面的教学与研究工作。中***分类号：S681.1文献标识码：B文章编号：16749944(2012)05000102
1引言
新几内亚凤仙(Impatiens hawkeri)属凤仙花科凤仙花属宿根草本花卉,别名五彩凤仙花,为原产新几内亚的杂交种,具有株型大、花朵大、花期长、开花多、花色品种丰富,温度适宜可周年开花等特点。传统的繁殖方法是采用无行扦插或种子繁殖,新几内亚凤仙具有不稔性而不易结实,种子价格比较贵,发芽率低;茎段扦插成活率低,繁殖速度慢,且扦插苗形态不佳。用组织培养技术既可除去病毒又可壮苗快繁,可在短期内提供大量优质试管苗。该实验以新几内亚凤仙花种子为研究材料,建立了离体组织培养快繁体系并实现了试管内开花,在此基础上进一步探讨了激素配比对试管苗开花的影响。
2材料与方法
供试材料为新几内亚凤仙花种子,北京市芳萱苑种子有限公司生产。
2.1凤仙花初代无菌系的建立
将凤仙花种子用双层纱布包扎起来,放在广口瓶中,自来水冲洗10min后转移至工作台上,先用70%酒精浸泡30s,然后置于2.0%次氯酸钠中消毒15~20min,再用无菌水冲洗5次,接种于MS0培养基中,平均每只试管接入2~3颗种子,培养14d开始试验。
2.2凤仙花芽增殖培养试验
将顶芽和侧芽分别接种于以下6种不同激素配比的培养基：6-BA0.5 + NAA0.2;6-BA0.5 + NAA0.5;6-BA1.0 +NAA0.2;6-BA1.0 + NAA0.5;6-BA2.0 +NAA0.2;6-BA2.0 +NAA0.5,35d统计芽增殖倍数,芽增殖倍数=可用增殖的芽总数/接种芽数。
2.3凤仙花组培苗诱导试管内开花
将增殖后获取的芽接种于以下4种培养基:(KH1)6-BA1.0 + NAA0.1;(KH2)6-BA1.0 + NAA0.2;(KH3)6-BA2.0 +NAA0.1;(KH4)6-BA2.0+NAA0.2中,60d后密切注意开花情况,统计开花率与平均开花数。开花率(%)=开花苗数/接种苗数×100%;平均花朵数=总开花朵数/接种苗数。
2.3培养条件
除特殊说明外,生根以1/2MS为基本培养基,其他以MS为基本培养基,培养基均添加0.8%琼脂粉和3%蔗糖以及0.1%的活性炭,调pH值为5.8;培养温度为25℃左右,光照强度为1 000~2 000lx,光照周期为10h/d。
3结果与分析
3.1不同浓度6-BA、NAA配比对凤仙花芽增殖效果的影响
种子萌发的实生苗多含顶芽和第一对侧芽,在芽增殖试验中分别统计得表1和表2。
表1不同激素配比对凤仙花顶芽增殖的影响
培养基编号BA/(mg/l)NAA/(mg/l)35d增殖倍数生长状况10.50.22.80植株矮小或茎伸长,但茎细弱、芽稍多、叶油绿20.50.53.30植株较高、芽稍多、叶嫩且油绿、叶片肥大31.00.23.33植株高、叶油绿、芽多41.00.53.17植株矮小、芽稍多、叶嫩但颜色稍浅52.00.22.60茎伸长,叶片卷曲且细长，多生长于顶端62.00.52.57茎伸长,叶片卷曲且细长，多生长于顶端
表2不同激素配比对凤仙花侧芽增殖的影响
培养基编号BA/(mg/L)NAA/(mg/L)增殖倍数35d生长状况10.50.22.67植株最矮、茎粗、叶片细长、颜色深20.50.55.29植株最高、叶片肥大、颜色深31.00.22.08植株矮小瘦弱、叶片细长、颜色浅绿41.00.53.00植株矮小、叶片多而细长卷曲、颜色浅绿52.00.22.36植株高、叶片细长嫩绿62.00.52.86植株矮小、叶片细长嫩绿
统计结果表明:顶芽及侧芽在2号培养基上均有较高的增殖倍数且植株肥壮,为芽增殖的最适宜培养基。
***1完整植株***2试管花蕾
在芽增殖实验中,出现了不同程度的生根现象(***1),35d时生根率全部达到100%,同时在126d时,意外观察到4号培养基中出现了一个肉眼可见的花蕾(***2)。故在此基础上进一步开展了开花培养基的优化(***3、***4)。
***3试管开花***4不同颜色的试管花
3.2不同浓度6-BA、NAA配比对凤仙花开花效果的影响
将凤仙花组培苗接种于诱导开花培养基上后,第79d在KH4号培养基中最先发现了肉眼可见的花蕾,持续观察到第150d,统计开花率、花期以及平均花朵数得表3。
表3不同激素配比对凤仙花试管开花的影响
培养基
编号6-BA
/(mg/L)NAA
/(mg/L)第一个花蕾
时间/d花期
/d开花率
/%开花花朵
平均数KH11.00.1904050.00.67KH21.00.2904566.71.33KH32.00.1835370.01.30KH42.00.2796090.02.20
由表3可以看出,KH4效果最好,开花率高达900%,平均花朵数达220,花期长达60d之久,说明诱导凤仙花组培苗试管内开花,培养基中除了要有合适的激素配比之外,激素的添加浓度也非常重要。
4结语
凤仙花的组织培养研究者不是很多,且有的试验只完成了再生体系,缺乏更为详实的试验数据［1,2］。凤仙花是比较容易组织培养的品种,但其快繁系数并不高,本实验3~5d增殖系数约3~5,且随着培养时间的延长,增殖倍数也没有很大的改善,多数研究者的结果也极为相似,如田广红(2002)［3］研究指出新几内亚凤仙芽增殖继代周期为40d,增殖倍数为5,王越等(2008)［4］也指出大旗瓣凤仙花增殖周期为35~40d,增殖倍数为3.5~4.0,刘静等(2008)［5］与邵玉春等(2003)［6］的研究结果稍高一些,增殖倍数分别为6~8和14,所做的品种前者为新西兰凤仙,后者为新几内亚凤仙;同时凤仙花在芽增殖的同时极易生根且根多,多数研究者有相似的结果［1,2,5］,这样可以大大简化组培程序,提高快繁效率,若苗太瘦小可选择性地生根壮苗后再炼苗移栽。
关于凤仙花离体培养至试管内开花的报道更少见,仅向太和等(2005)［1］研究指出凤仙花组培苗转接到诱导开花培养基BA1.0+NAA0.1上,20d形成肉眼可见的花蕾,40d实现试管开花,但其凤仙花品种为白边康乃馨与金孔雀B。本实验实现了新几内亚凤仙的试管开花,且开花率高达90%,花期长达60d,花色品种丰富,试管内开花为进一步探讨外界条件对试管苗开花的调控提供了一个简便的实验体系［1］,同时此系统完善,将可能为植物组织培养开创一条新的无可取代的商业途径,如生产小型试管花卉挂饰,提高自然美的享受。
参考文献：
［1］ 向太和,王利琳.凤仙花离体培养再生植株并试管内开花［J］.杭州师范学院学报,2005,4(4):293~294.
［2］ 及华,温春秀,高延厅.何氏凤仙花的离体快速繁殖［J］.植物生理学通讯,1997,33(5):356~359.
［3］ 田广红.新几内亚凤仙的组织培养和植株再生［J］.植物生理学通讯,2002,38(1):36.
［4］ 王越,刘燕.大旗瓣凤仙花的组织培养与快速繁殖［J］.植物生理学通讯,2008,44(3):510.
［5］ 刘静,丁兰,赵庆芳,等.凤仙花的组织培养与离体快繁［J］.西北师范大学学报,2008,44(1):80~82.
［6］ 邵玉春,和宁,孟新亚.新几内亚凤仙的组织培养［J］.中国花卉园艺,2003(3):28~29.
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